本文關鍵詞：MiR-27a在膠質(zhì)瘤的表達及其惡性表型體外研究

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【摘要】：背景 腦膠質(zhì)瘤是臨床上常見的顱內(nèi)原發(fā)性腫瘤。雖然惡性膠質(zhì)瘤的治療包括首選手術切除治療,輔助放化療,生物治療及綜合治療等治療手段,但是預后仍然很差。惡性膠質(zhì)瘤大多在確診后一年左右死亡。高級別膠質(zhì)瘤細胞是高度異質(zhì)性的腫瘤,因此認為其是有多種基因突變或表觀遺傳學變化導致的大量信號通路的失調(diào)控引起的,其中Wnt/beta-catenin信號通路及其上游調(diào)控miRNA的作用,在膠質(zhì)瘤的發(fā)生、發(fā)展、演變及預后中越來越受到關注。 Wnt/beta-catenin信號通路與多種疾病的病理過程有關,尤其是膠質(zhì)瘤的發(fā)生。該信號通路通過beta-catenin和TCF/LEF-1復合物激活下游靶點來調(diào)節(jié)多種生物學過程。Wnt蛋白穩(wěn)定胞漿beta-catenin,使其與TCF/LEF-1在核內(nèi)結合,募集轉(zhuǎn)錄因子Brgl和CREB結合蛋白,啟動Wnt信號通路靶基因表達。 SFRP1是Wnt/beta-catenin信號通路抑制因子,在體外的惡性腫瘤細胞株中的研究發(fā)現(xiàn)它可以通過促進腫瘤細胞的凋亡而起到抑癌作用,故可以初步設定SFRP1是一個膠質(zhì)瘤抑癌基因。此外,為了尋找SFRP1上游調(diào)控miRNA,我們搜索了包括TARGETSCAN, MIRANDA等預測miRNA靶基因網(wǎng)站,發(fā)現(xiàn)有很多的miRNA,包括miR-27a在SFRP1mRNA3'UTR上有潛在的結合位點,故本課題重點研究下調(diào)miR-27a抑制膠質(zhì)瘤細胞增殖、凋亡、周期和侵襲遷移的影響及其可能的作用機制。 方法 應用qRT-PCR的方法,檢測5個膠質(zhì)瘤細胞系和8例高級別腦膠質(zhì)瘤組織中miR-27a的表達水平；將niR-27a inhibitor轉(zhuǎn)染至人腦膠質(zhì)瘤細胞系LN229和U251中；采用qRT-PCR檢測轉(zhuǎn)染后膠質(zhì)瘤細胞系的miR-27a表達水平以鑒定抑制效果；MTS(四唑鹽)實驗評價細胞的增殖率；Propidium staining法檢測細胞周期變化；Annexin V法檢測細胞凋亡；Transwell實驗檢測細胞侵襲遷移能力變化；Western blots檢測細胞生物學行為相關蛋白的表達；熒光素酶實驗驗證miR-27a直接靶向SFRP1,調(diào)控其表達。 結果 MiR-27a在膠質(zhì)瘤組織和細胞系中的表達較正常組織明顯上調(diào)；qRT-PCR檢測結果顯示轉(zhuǎn)染后MiR-27a Inhibitor組較Negative Control組表達下降,MiR-27a Inhibitor組細胞增殖活性降低,細胞周期阻滯在G0/G1期,凋亡增加,細胞侵襲遷移能力受到抑制。Western blots提示細胞生物學行為相關蛋白PCNA、Bcl2、 CyclinDl及MMP-9表達在轉(zhuǎn)染組均有減少。該實驗說明miR-27a在高級別膠質(zhì)瘤中是癌微RNA (OncomiRs),直接靶向SFRP1,調(diào)控其表達,可能成為高級別膠質(zhì)瘤治療新的潛在靶點。 結論 MiR-27a在膠質(zhì)瘤組織和細胞系中的表達上調(diào)；轉(zhuǎn)染后MiR-27a Inhibitor組miR-27a表達下降,細胞增殖活性降低,細胞周期阻滯在G0/G1期,凋亡增加,細胞侵襲遷移能力受到抑制。該實驗說明miR-27a在高級別膠質(zhì)瘤是癌微RNA(OncomiRs),可能成為高級別膠質(zhì)瘤治療新的候選靶點。這是首次有關miR-27a在人腦膠質(zhì)瘤中的表達以及對膠質(zhì)瘤惡性表型的影響的研究報道,為進一步認識腦膠質(zhì)瘤的分子病理機制及新一類的靶向治療提供實驗依據(jù)。
【關鍵詞】：膠質(zhì)瘤 miRNA-27a 惡性表型
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R739.41
【目錄】：

• 致謝4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-10
• 縮略語/符號說明10-11
• 目錄11-12
• 1 前言12-15
• 2 材料與方法15-25
• 3 結果25-40
• 4 討論40-43
• 結論43-44
• 參考文獻44-48
• 綜述48-60
• 參考文獻55-60
• 作者簡介及在讀期間所取得的科研成果60-61

【共引文獻】

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本文編號：657406