發(fā)布時(shí)間：2017-08-11 13:28

  本文關(guān)鍵詞：NSCLC淋巴內(nèi)皮細(xì)胞異常增生的臨床病理特征及機(jī)制探討

  更多相關(guān)文章： 肺癌 腫瘤干樣細(xì)胞 淋巴內(nèi)皮細(xì)胞 分化

【摘要】：目的：1、探討淋巴內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志VEGFR2、VEGFR3、PROX1、LYVE1在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其臨床意義；2、從腫瘤干細(xì)胞誘導(dǎo)分化角度進(jìn)一步探討NSCLC淋巴內(nèi)皮細(xì)胞異常增生形成的可能機(jī)制。方法：1、臨床研究：根據(jù)本研究要求篩選2012年1月1日至2012年12月31日在南京軍區(qū)福州總醫(yī)院行手術(shù)治療的TxNOMO～TxN1MO非小細(xì)胞肺癌患者,采用免疫組織化學(xué)二步法對(duì)非小細(xì)胞肺癌術(shù)后組織淋巴內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志VEGFR2、VEGFR3、PROX1、 LYVE1蛋白進(jìn)行檢測(cè)分析,同時(shí)收集患者的臨床病理資料、隨訪患者的復(fù)發(fā)情況及其生存狀態(tài),計(jì)算無疾病生存時(shí)間(Disease-free survival, DFS)及總生存時(shí)間(Overall survival, OS)。計(jì)數(shù)資料采用Fisher精確檢驗(yàn),應(yīng)用Kaplan-Meier法繪制生存曲線,預(yù)后多因素分析采用Cox多因素回歸模型,Log-Rank檢驗(yàn)設(shè)定P值0.05為差別顯著。2、實(shí)驗(yàn)研究：(1)腫瘤干樣細(xì)胞富集、篩選及鑒定：選用A549肺癌細(xì)胞株,利用順鉑化療富集48h聯(lián)合無血清條件培養(yǎng)法篩選培養(yǎng)2周后,采用CCK-8法、流式細(xì)胞儀分析技術(shù)、裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)鑒定篩選出來的肺癌干樣細(xì)胞。(2)淋巴內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)分化：選擇淋巴內(nèi)皮細(xì)胞特殊培養(yǎng)基,將得到的肺癌干樣細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)分化。具體分為7組：A549組(RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)4周)、A549 CSLC組(無血清條件培養(yǎng)基培養(yǎng)4周)、肺癌干樣細(xì)胞空白組1(淋巴內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)3周)、肺癌干樣細(xì)胞空白組2(淋巴內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)4周)、肺癌干樣細(xì)胞TNF-α組(淋巴內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基+TNF-α培養(yǎng)4周)、肺癌干樣細(xì)胞VEGF-C組(淋巴內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基+VEGF-C培養(yǎng)4周)、肺癌干樣細(xì)胞TNF-α+VEGF-C組(淋巴內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基+TNF-α+VEGF-C培養(yǎng)4周),采用Western Blot技術(shù)檢測(cè)各組淋巴內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志VEGFR2、VEGFR3、PROX1、LYVE1的表達(dá)情況。結(jié)果：1、按照篩選流程,共入組60例NSCLC患者。χ2檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示：VEGFR2的表達(dá)與NSCLC患者的TNM分期(P=0.000)、是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.017)顯著相關(guān)；VEGFR3的表達(dá)與NSCLC患者的TNM分期(P=0.000)、是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.000)顯著相關(guān);PROX1的表達(dá)與NSCLC患者的TNM分期(P=0.000)、是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.004)、分化程度(P=0.038)顯著相關(guān)；LYVE1的表達(dá)與NSCLC患者的TNM分期(P=0.000)、是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.001)顯著相關(guān)。2、采用Kaplan-Meier生存分析法分析NSCLC患者無疾病生存時(shí)間,結(jié)果表明：VEGFR2、VEGFR3、LYVE1及TNM分期對(duì)NSCLC患者的無疾病生存時(shí)間有影響(P=0.001)。然而,PROX1高表達(dá)似乎有更短的無疾病進(jìn)展時(shí)間趨勢(shì),但并沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3、細(xì)胞增殖能力檢測(cè)結(jié)果顯示：相比A549細(xì)胞組,A549克隆球細(xì)胞組細(xì)胞增殖能力更強(qiáng),兩組對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4、流式分析結(jié)果顯示：富集后的A549克隆球細(xì)胞組干細(xì)胞表面標(biāo)記物CD44的陽(yáng)性率為64.16%、CD133的陽(yáng)性率為70.88%；A549細(xì)胞組干細(xì)胞表面標(biāo)記物CD44的陽(yáng)性率為0.51%、CD133的陽(yáng)性率為0.78%；兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5、裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：3周后接種105個(gè)A549克隆球細(xì)胞組的裸鼠皮下開始出現(xiàn)移植瘤,而接種105個(gè)A549細(xì)胞組的裸鼠在6周后才出現(xiàn)瘤體。飼養(yǎng)8周后,成瘤的裸鼠生長(zhǎng)狀態(tài)尚好,肉眼可明顯觀察到移植瘤形成,瘤體取出后測(cè)重量結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。6、蛋白印跡結(jié)果顯示：與A549細(xì)胞組、A549克隆球細(xì)胞組相比,A549克隆球細(xì)胞經(jīng)過淋巴內(nèi)皮培養(yǎng)基誘導(dǎo)分化后的五組細(xì)胞,其淋巴內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志VEGFR2、 VEGFR3、PROX1、LYVE1的表達(dá)明顯升高,差異(P0.05)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；淋巴內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志蛋白的表達(dá)與誘導(dǎo)分化的時(shí)間(肺癌干樣細(xì)胞空白組1 vs較肺癌干樣細(xì)胞空白組2)、是否加入淋巴內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)因子(肺癌干樣細(xì)胞空白組2 vs肺癌干樣細(xì)胞TNF-α組、肺癌干樣細(xì)胞VEGF-C組、肺癌干樣細(xì)胞TNF-α+VEGF-C組)密切相關(guān),差異(P0.05)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而淋巴內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志蛋白的表達(dá)似乎與加入的誘導(dǎo)因子關(guān)系密切(肺癌干樣細(xì)胞TNF-α組vs肺癌干樣細(xì)胞VEGF-C組vs肺癌干樣細(xì)胞TNF-α +VEGF-C組),但差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：1、淋巴內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志VEGFR2、VEGFR3、PROX1、LYVE1的表達(dá)與患者的TNM分期、是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)；VEGFR2、VEGFR3、LYVE1的高表達(dá)預(yù)示著更短的無疾病生存時(shí)間；2、順鉑化療富集聯(lián)合無血清懸浮培養(yǎng)法分離篩選肺腺癌干樣細(xì)胞,其干細(xì)胞比例高,干性強(qiáng),技術(shù)可行,可作為日后干細(xì)胞研究的基礎(chǔ)方法;3、利用淋巴內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境,肺腺癌干樣細(xì)胞可以誘導(dǎo)分化為淋巴內(nèi)皮細(xì)胞。
【關(guān)鍵詞】：肺癌 腫瘤干樣細(xì)胞 淋巴內(nèi)皮細(xì)胞 分化
【學(xué)位授予單位】：福建中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R734.2
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• Abstract9-12
• 前言12-14
• 第一章 NSCLC淋巴內(nèi)皮細(xì)胞異常增生的臨床病理特征14-26
• 1. 研究的目的及意義14
• 2. 研究過程14-16
• 2.1 研究對(duì)象14
• 2.2 所需材料14
• 2.3 研究方法14-15
• 2.4 研究?jī)?nèi)容15
• 2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)15-16
• 3. 結(jié)果16-24
• 3.1 NSCLC淋巴內(nèi)皮細(xì)胞異常增生標(biāo)志VEGFR2、VEGFR3、PROX1、LYVE1的表達(dá)16-19
• 3.2 VEGFR2、VEGFR3、PROX1、LYVE1的表達(dá)與NSCLC臨床病理特征的相關(guān)性19-20
• 3.3 VEGFR2、VEGFR3、PROX1、LYVE1的表達(dá)與NSCLC預(yù)后的相關(guān)性20-24
• 4. 討論24-25
• 5. 小結(jié)25-26
• 第二章 NSCLC淋巴內(nèi)皮細(xì)胞異常增生形成的可能機(jī)制26-44
• 1. 研究的目的及意義26
• 2. 材料與方法26-34
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料26-28
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法28-34
• 3. 結(jié)果34-38
• 3.1 A549細(xì)胞在化療富集聯(lián)合無血清懸浮培養(yǎng)環(huán)境下的生長(zhǎng)狀態(tài)34
• 3.2 CCK-8法檢測(cè)不同時(shí)間下A549細(xì)胞、A549克隆球細(xì)胞的增殖能力34-35
• 3.3 流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)A549細(xì)胞、A549克隆球細(xì)胞的干細(xì)胞表面標(biāo)記物比較35-36
• 3.4 體內(nèi)裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)比較A549細(xì)胞、A549克隆球細(xì)胞的裸鼠成瘤能力36-38
• 3.5 免疫印跡法檢測(cè)A549克隆球細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)分化后相關(guān)蛋白的表達(dá)情況38
• 4. 討論38-42
• 5. 小結(jié)42-43
• 結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-47
• 附錄47-48
• 致謝48-49
• 文獻(xiàn)綜述49-53
• 參考文獻(xiàn)51-53
• 作者簡(jiǎn)歷53

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 Yin-Ge Li;Xiang Gao;;Epidemiologic studies of particulate matter and lung cancer[J];Chinese Journal of Cancer;2014年08期

2 高德榮;韓雅玲;溫珍平;馮鐵虹;李紅;王磊;;門冬氨酸鉀鎂與葡萄糖酸鈣聯(lián)用防治奧沙利鉑神經(jīng)毒性的臨床觀察[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2007年03期

3 I-Shyan Sheen;;Is the vascular endothelial growth factor messenger RNA expression in resectable hepatocellular carcinoma of prognostic value after resection?[J];World Journal of Gastroenterology;2004年05期

4 ;Serum HIF-1α and VEGF Levels Pre-and Post-TACE in Patients with Primary Liver Cancer[J];Chinese Medical Sciences Journal;2011年03期

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本文編號(hào)：656398