發(fā)布時間：2017-08-11 13:20

  本文關(guān)鍵詞：miR-196a在肝細(xì)胞肝癌中的表達(dá)和促增殖作用研究

  更多相關(guān)文章： miR-196a 叉頭轉(zhuǎn)錄因子FOXO1 肝癌 細(xì)胞增殖

【摘要】：肝癌的診斷和治療仍是現(xiàn)今臨床中難以解決的難題，傳統(tǒng)的手術(shù)、放療和化療等方法對中晚期肝癌患者的療效并不盡人意。因此，臨床上亟待開發(fā)更為有效的治療策略。隨著腫瘤生物治療技術(shù)的不斷發(fā)展，基因治療作為肝癌生物治療的一個重要手段越來越受到臨床醫(yī)生的重視。大量的研究結(jié)果表明microRNA（miRNA）直接參與肝癌的發(fā)生和發(fā)展，并與肝癌的病理類型、惡性程度以及分級分期等臨床病理特征密切相關(guān)。表明miRNA有可能成為肝癌的診斷和預(yù)后的標(biāo)志物，而且可成為肝癌基因治療的靶標(biāo)。其中miR-196a在胰腺癌、宮頸癌、乳腺癌、胃癌和結(jié)腸癌等多種惡性腫瘤中表達(dá)上調(diào)，并通過抑制其靶基因p27、FOXO1、ING5、netrin4和IκBα等，從而促進(jìn)惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展。但目前較少有人研究肝癌中miR-196a的表達(dá)水平和其下游調(diào)控的信號通路。本論文擬通過研究miR-196a在肝癌中的表達(dá)情況，進(jìn)一步闡述miR-196a在肝癌細(xì)胞增殖過程中的生物學(xué)功能和具體分子機(jī)制。 目的：探討miR-196a在肝癌組織的表達(dá)水平和對肝癌Hep3B細(xì)胞增殖的影響，闡明其促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖的可能機(jī)制。 方法：收集20例肝癌及對應(yīng)癌旁組織，培養(yǎng)肝癌HepG2、Hep3B和SMMC-7721細(xì)胞株以及人正常肝L02細(xì)胞株，采用qRT-PCR法分別檢測miR-196a在肝癌和對應(yīng)癌旁組織及肝癌和正常肝細(xì)胞中的表達(dá)水平，培養(yǎng)處于對數(shù)生長期的人肝癌Hep3B細(xì)胞株，在此基礎(chǔ)上隨機(jī)分為對照組和miR-196amimics及miR-196a inhibitors轉(zhuǎn)染組，MTT檢測轉(zhuǎn)染后Hep3B細(xì)胞增殖活力，qRT-PCR法檢測轉(zhuǎn)染后Hep3B細(xì)胞miR-196a的表達(dá)，流式細(xì)胞術(shù)檢測并用轉(zhuǎn)染后Hep3B細(xì)胞周期，qRT-PCR和Western bloting法檢測miR-196a潛在靶點叉頭轉(zhuǎn)錄因子（FOXO1）的表達(dá)，免疫組化技術(shù)研究肝癌和對應(yīng)癌旁組織FOXO1的蛋白表達(dá)水平。 結(jié)果：在肝癌組織中miR-196a的表達(dá)顯著高于相應(yīng)癌旁組織（P 0.05），miR-196a在人肝癌HepG2、Hep3B和SMMC-7721細(xì)胞中的表達(dá)水平明顯高于人正常肝L02細(xì)胞（P 0.05）；與對照組比較，，miR-196a mimics轉(zhuǎn)染人肝癌Hep3B細(xì)胞中miR-196a的表達(dá)水平明顯升高（P 0.05），而miR-196a inhibitors轉(zhuǎn)染人肝癌Hep3B細(xì)胞中miR-196a的表達(dá)水平明顯降低（P 0.05）；與對照組比較，miR-196a通過促進(jìn)G1/S期轉(zhuǎn)換使Hep3B細(xì)胞增殖率升高（P 0.05）。與對照組比較，miR-196a mimics轉(zhuǎn)染Hep3B細(xì)胞FOXO1蛋白和mRNA的表達(dá)水平明顯降低（P 0.05），在肝癌組織中miR-196a與FOXO1表現(xiàn)出顯著的負(fù)性相關(guān)。 結(jié)論：miR-196a通過抑制靶基因FOXO1的表達(dá)，從而促進(jìn)肝癌細(xì)胞系的增殖，提示miR-196a可成為一個肝癌診斷和治療的新靶點。
【關(guān)鍵詞】：miR-196a 叉頭轉(zhuǎn)錄因子FOXO1 肝癌 細(xì)胞增殖
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 第1章 引言11-13
• 第2章 文獻(xiàn)綜述13-22
• 2.1 肝癌的診治現(xiàn)狀13-15
• 2.1.1 肝癌的發(fā)病現(xiàn)狀13
• 2.1.2 肝癌的發(fā)病機(jī)制13-14
• 2.1.3 肝癌的治療現(xiàn)狀14-15
• 2.2 miRNA 與肝癌15-19
• 2.2.1 miRNA15
• 2.2.2 miRNA 與肝癌增殖15-16
• 2.2.3 miRNA 與肝癌轉(zhuǎn)移16-17
• 2.2.4 miRNA 與肝癌診治17-19
• 2.3 miR-196a 與 FOXO119-22
• 2.3.1 miR-196a 與腫瘤19-20
• 2.3.2 FOXO1 與肝癌20-21
• 2.3.3 miR-196a 與 FOXO121-22
• 第3章 材料與方法22-36
• 3.1 實驗材料和儀器22-27
• 3.1.1 肝癌組織標(biāo)本22
• 3.1.2 肝細(xì)胞系22
• 3.1.3 主要藥品和試劑22-23
• 3.1.4 儀器23-24
• 3.1.5 主要溶液的配置24-27
• 3.2 實驗方法27-36
• 3.2.1 肝癌組織總 RNA 的提取27
• 3.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)27-28
• 3.2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染及細(xì)胞增殖率檢測28
• 3.2.4 細(xì)胞總 RNA 的提取28-29
• 3.2.5 總 RNA 的濃度的測定和鑒定29
• 3.2.6 逆轉(zhuǎn)錄 PCR 反應(yīng)29-31
• 3.2.7 實時定量 RT-PCR（qRT-PCR）31-32
• 3.2.8 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期32
• 3.2.9 細(xì)胞總蛋白的提取和 BSA 定量32-33
• 3.2.10 Western bloting 法檢測 FOXO1 蛋白表達(dá)33-34
• 3.2.11 免疫組化分析34-35
• 3.2.12 統(tǒng)計學(xué)分析35-36
• 第4章 實驗結(jié)果36-43
• 4.1 miR-196a 在肝癌組織和細(xì)胞中的表達(dá)水平顯著上調(diào)36-37
• 4.2 驗證 miR-196a mimics 和 miR-196a inhibitor 在 Hep3B 細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染效率37-38
• 4.3 miR-196a 對 Hep3B 細(xì)胞增殖的影響38-39
• 4.4 miR-196a 對 Hep3B 細(xì)胞周期的影響39-40
• 4.5 miR-196a 對 FOXO1 在 Hep3B 細(xì)胞中表達(dá)影響40-42
• 4.6 miR-196a 對 FOXO1 在肝癌組織中表達(dá)影響42-43
• 第5章 討論43-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-56
• 作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果56-57
• 致謝57

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：656346