本文關(guān)鍵詞：TF10促進糖代謝及乳腺癌細胞增殖的相關(guān)研究

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【摘要】：目的：糖代謝異常在腫瘤發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。轉(zhuǎn)錄因子TF10過表達時,可引起多種腫瘤的發(fā)生,促進其轉(zhuǎn)移和浸潤等,導(dǎo)致不良預(yù)后。目前對TF10在腫瘤細胞糖代謝方面的作用還未報道。我們通過基因芯片技術(shù)探索TF10能否調(diào)控乳腺癌細胞糖代謝并研究其調(diào)控機制。同時探索TF10能否通過糖代謝途徑來調(diào)控乳腺癌細胞的增殖,明確TF10在乳腺癌中的表達情況。方法：1、運用基因芯片技術(shù),明確TF10是否參與糖代謝途徑的調(diào)控；2、通過啟動子活性檢測、CHIP實驗、糖代謝產(chǎn)物檢測等,探索TF10調(diào)控糖代謝途徑的機制：3、乳腺癌細胞過表達TF10后,分別經(jīng)過2-DG抑制糖代謝和敲低LDHA表達處理,通過檢測細胞生長曲線,觀察TF10能否通過糖代謝途徑來調(diào)控乳腺癌細胞的增殖；4、通過免疫組化染色實驗,明確TF10在乳腺癌中的表達情況。結(jié)果：1、基因芯片差異功能聚類分析顯示,TF10對乳腺癌細胞糖代謝具有促進作用，，可促進PFKL、PKM2、LDHA的轉(zhuǎn)錄表達；2、TF10可促進PFKL、PKM2、 LDHA的啟動子活性,并可直接募集到三者的啟動子上,同時,TF10可促進乳腺癌細胞攝取葡萄糖,促進丙酮酸、乳酸的生成；3、TF10可通過促進糖代謝途徑來乳腺癌細胞的增殖，并且依賴于LDHA的表達；4、TF10在乳腺癌組織較癌旁組織高表達,并且與PKM2、LDHA的表達成正相關(guān)。結(jié)論：我們首次發(fā)現(xiàn)TF10與糖代謝密切相關(guān),可通過促進PFKL、PKM2、LDHA的轉(zhuǎn)錄表達來進行。并且TF10可通過促進糖代謝來促進乳腺癌細胞的增殖。這一發(fā)現(xiàn)開拓了TF10的功能研究,為TF10促癌生長的機制研究提供了新視角,有待我們繼續(xù)深入研究。
【關(guān)鍵詞】：TF10 乳腺癌 糖代謝
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9
【目錄】：

• 縮略詞表6-7
• 中文摘要7-8
• Abstract8-10
• 前言10-12
• 材料與方法12-20
• 1. 材料12-13
• 1.1 細胞株與菌株12
• 1.2 質(zhì)粒12
• 1.3 常用分子生物學(xué)試劑12
• 1.4 細胞培養(yǎng)試劑12-13
• 1.5 主要實驗儀器13
• 2. 方法13-20
• 2.1 細胞培養(yǎng)13
• 2.2 重組質(zhì)粒構(gòu)建與鑒定13-14
• 2.3 真核細胞的轉(zhuǎn)染14
• 2.4 免疫共沉淀實驗(IP實驗)14-15
• 2.5 實時熒光定量(Real-Time)RT-PCR15
• 2.6 啟動子活性分析實驗15-16
• 2.7 慢病毒包裝16
• 2.8 細胞穩(wěn)定克隆的制備16
• 2.9 轉(zhuǎn)染小干擾RNA即siRNA16-17
• 2.10 染色質(zhì)免疫共沉淀(CHIP)17
• 2.11 葡萄糖消耗測定17-18
• 2.12 丙酮酸含量測定18
• 2.13 乳酸含量測定18
• 2.14 細胞生長曲線分析18
• 2.15 免疫組織化學(xué)18-19
• 2.16 免疫組化染色、評分、相關(guān)性分析19
• 2.17 統(tǒng)計分析19-20
• 結(jié)果20-28
• 1. TF10調(diào)控乳腺癌細胞糖代謝的基因篩選20-22
• 1.1 TF10基因外源低表達乳腺癌細胞模型的建立20-21
• 1.2 基因芯片差異功能聚類分析21-22
• 2. TF10促進PFKL、PKM2、LDHA的mRNA水平表達22-25
• 2.1 TF10促進PFKL、PKM2、LDHA的啟動子活性22-23
• 2.2 TF10可募集到PFKL、PKM2、LDHA啟動子上23-24
• 2.3 TF10調(diào)控乳腺癌細胞糖代謝的代謝產(chǎn)物24-25
• 3. TF10促進乳腺癌細胞的增殖25-27
• 3.1 TF10可通過促進糖代謝過程來促進乳腺癌細胞增殖25-26
• 3.2 TF10促進乳腺癌細胞的增殖依賴于LDHA的表達26-27
• 4. TF10在乳腺癌組織中的表達情況27-28
• 4.1 TF10在乳腺癌組織中較癌旁組織高表達27
• 4.2 TF10與PKM2、LDHA在乳腺癌組織中呈正相關(guān)27-28
• 討論28-30
• 結(jié)論30-31
• 參考文獻31-35
• 文獻綜述35-44
• 參考文獻40-44
• 發(fā)表文章44-45
• 致謝45

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本文編號：654062