本文關(guān)鍵詞：ME1和ME2在腎癌中的表達及其功能研究

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【摘要】：腫瘤是常見的人類疾病,腎癌是其中之一,組織較多的脂質(zhì)堆積,其代謝的異常特點能夠引起人們對其代謝機制進行探索。蘋果酸酶在細胞內(nèi)催化蘋果酸轉(zhuǎn)化成丙酮酸,產(chǎn)生NADPH或者NADH。據(jù)報道,ME1和ME2在癌癥中存在表達差異,與腫瘤相關(guān)基因的調(diào)控存在聯(lián)系,因此其生物學(xué)功能作用愈發(fā)凸顯,主要表現(xiàn)在肝癌、乳腺癌和鼻炎癌等腫瘤中。目前為止,腎癌中ME1和ME2的細胞生物學(xué)特點基本沒人報道。本論文主要針對ME1和ME2在腎癌中的作用,做出以下研究內(nèi)容。利用腎癌組織和腎癌細胞系,研究ME1和ME2在腎癌中的表達差異。主要利用q RT-PCR實驗檢測腎癌中ME1和ME2的RNA水平的變化;利用western blot實驗檢測腎癌中ME1和ME2的蛋白變化;利用免疫組化實驗檢測腎癌切片中ME1和ME2的分布特點及表達特點;另外,從腎正常細胞系和腎癌細胞系中對照比較ME1和ME2的變化。實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn),與正常組織相比,ME1和ME2在腎癌中表達是降低的,而ME1的降低程度更加明顯。細胞系是脫離體內(nèi)組織的生物環(huán)境,其相關(guān)基因的表達差異與組織不太一樣。為了探索ME1在腎癌中的功能,主要利用與組織特點相符表達的腎癌細胞系RC2,通過病毒包裝,感染腎癌細胞系,促使腎癌細胞系RC2中ME1過表達,檢測細胞的增殖、凋亡、周期和ROS的水平變化。實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn),過表達ME1后,RC2細胞的增殖能力明顯下降,通過流式細胞儀檢測,過表達ME1對腎癌細胞系RC2在凋亡方面沒有影響,同時,檢測細胞周期發(fā)現(xiàn),過表達ME1能夠引起細胞的周期阻滯,停滯于G1期。據(jù)報道,ROS能夠誘導(dǎo)細胞增殖也促進細胞凋亡,過表達ME1的RC1細胞,其ROS水平明顯高于對照組細胞,具體ME1誘導(dǎo)ROS的產(chǎn)生對腫瘤的發(fā)生發(fā)展有何作用有待于進一步研究。腎癌中ME1能夠抑制細胞周期的循環(huán)與腎癌組織腫瘤的特點相符,可進一步探究ME1在調(diào)控細胞周期方面的影響。ROS是腫瘤檢測的功能指標,研究ME1誘導(dǎo)ROS產(chǎn)生的具體機制是下一步工作的重點。
【關(guān)鍵詞】：腎癌 細胞周期 蘋果酸酶 ROS
【學(xué)位授予單位】：哈爾濱工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.11
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-9
• 第1章 緒論9-16
• 1.1 腫瘤中代謝的研究進展9-10
• 1.2 蘋果酸酶(ME) 在癌癥中的研究進展10-11
• 1.3 腎癌的研究基礎(chǔ)及其分子機制11-14
• 1.4 技術(shù)路線圖14
• 1.5 課題主要研究內(nèi)容14-16
• 第2章 材料與方法16-32
• 2.1 實驗材料與試劑16-19
• 2.1.1 實驗材料16
• 2.1.2 實驗試劑16-19
• 2.2 實驗方法和步驟19-32
• 2.2.1 細胞復(fù)蘇與傳代培養(yǎng)19
• 2.2.2 RNA提取步驟19-21
• 2.2.3 q RT-PCR實驗21
• 2.2.4 腎癌蛋白及細胞蛋白提取21-22
• 2.2.5 Western blot實驗22-23
• 2.2.6 免疫組化實驗(IHC)23-24
• 2.2.7 慢病毒載體PLKO.1-sh RNA的構(gòu)建24-25
• 2.2.8 逆轉(zhuǎn)錄病毒載體p HR-ME1 和p HR-ME2 的構(gòu)建25-26
• 2.2.9 293T細胞中病毒包裝及感染腎癌細胞系26-28
• 2.2.10 酶活測定28-29
• 2.2.11 MTT法檢測細胞增殖29-30
• 2.2.12 流式細胞儀檢測細胞周期30
• 2.2.13 流式細胞儀檢測細胞凋亡30-31
• 2.2.14 流式細胞儀檢測細胞ROS31-32
• 第3章 ME1 和ME2 在腎癌中的表達差異32-42
• 3.1 腎癌組織中ME1 和ME2 的RNA水平的改變32-33
• 3.2 ME1 和ME2 在腎癌組織中蛋白水平的差異33-35
• 3.3 免疫組化方法檢測腎癌組織樣本之間的差異35-38
• 3.4 腎癌細胞系中的表達差異38-41
• 3.5 本章小結(jié)41-42
• 第4章 ME1 在腎癌細胞內(nèi)生物學(xué)功能研究42-49
• 4.1 ME1 在腎癌細胞系增殖方面的影響42-44
• 4.2 ME1 在細胞凋亡方面的影響44-46
• 4.3 ME1 在細胞周期阻滯方面的影響46-47
• 4.4 ME1 對腎癌細胞中ROS的影響47
• 4.5 本章小結(jié)47-49
• 結(jié)論49
• 展望49-50
• 實驗數(shù)據(jù)50-54
• 參考文獻54-60
• 致謝60

【相似文獻】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 蔣詩健;ME1和ME2在腎癌中的表達及其功能研究[D];哈爾濱工業(yè)大學(xué);2015年

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本文編號：653526