本文關(guān)鍵詞：MTT法體外藥敏試驗在優(yōu)化急性髓系白血病治療方案中的應(yīng)用

  更多相關(guān)文章： 急性髓系白血病(AML) MTT 地西他濱(DAC) 逆轉(zhuǎn)耐藥 K562/A02細(xì)胞株

【摘要】：目的:多藥耐藥是急性髓系白血病(AML)治療失敗最主要的因素,克服并逆轉(zhuǎn)耐藥是成功治療復(fù)發(fā)難治AML的關(guān)鍵所在。異常的DNA甲基化與白血病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),因此DNA甲基化成為抗腫瘤藥物的良好靶點。DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的有效抑制劑地西他濱,對腫瘤細(xì)胞具有雙重影響,高劑量時可表現(xiàn)出細(xì)胞毒作用,加速細(xì)胞凋亡,低劑量時可以改變基因的表達(dá)模式,促進(jìn)細(xì)胞的分化。目前已經(jīng)成功用于臨床高危MDS、老年AML的治療。并對復(fù)發(fā)難治AML的治療有一定的增敏及逆轉(zhuǎn)耐藥的作用。本實驗旨在探討臨床治療AML常用化療藥物的體外藥敏實驗與臨床療效的關(guān)系,探索以地西他濱為主的聯(lián)合方案作用于耐藥髓系白血病細(xì)胞及復(fù)發(fā)難治AML原代細(xì)胞的作用機(jī)制及療效,優(yōu)化治療方案,指導(dǎo)臨床難治性AML治療。方法:取2014-04至2015-01期間在河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院住院治療的48例AML患者骨髓液(初治43例、復(fù)發(fā)難治5例),所有患者均按臨床表現(xiàn)、骨髓形態(tài)學(xué)檢查、免疫學(xué)分型和染色體檢查符合AML診斷標(biāo)準(zhǔn)(參照張之南,沈悌血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn),第三版,科學(xué)出版社)確診。利用MTT法評價43例AML患者原代細(xì)胞對常用化療藥物組合(DNR+Ara-C、THP+Ara-C、MIT+Ara-C、IDA+Ara-C、HHT+Ara-C)敏感性與臨床療效的相關(guān)性。結(jié)合白血病預(yù)后分層指標(biāo)能有效地對白血病體內(nèi)療效及預(yù)后情況進(jìn)行預(yù)測。選取地西他濱、柔紅霉素、阿糖胞苷單藥或者聯(lián)合作用對K562/A02耐藥細(xì)胞株的增殖影響,并通過復(fù)發(fā)難治AML原代細(xì)胞進(jìn)行驗證。所有數(shù)據(jù)采用Graph Pad Prism 5.0(San Diego,CA,USA)軟件分析。化療藥物的抑制率以`X±S表示,兩組均數(shù)比較采用t檢驗,多組均數(shù)間比較采用SNK檢驗,單因素分析、兩個率的比較采用卡方檢驗。多因素分析采用Logistic回歸分析。設(shè)定P0.05作為具有統(tǒng)計學(xué)意義的標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果:1聯(lián)合用藥對初治AML原代細(xì)胞抑制率和臨床治療療效關(guān)系1.1 6種單一化療藥物的IC50值:高三尖杉酯堿0.45μg/ml,米托蒽醌0.88μg/ml,柔紅霉素0.49μg/ml,吡柔比星0.36μg/ml,去甲氧柔紅霉素0.25μg/ml,阿糖胞苷1.2μg/ml。1.2臨床常用5種聯(lián)合方案對初治AML原代細(xì)胞的抑制率:高三尖杉酯堿+阿糖胞苷(HA方案):敏感組(56.69±9.45)%、耐藥組(22.92±2.32)%;米托蒽醌+阿糖胞苷(MA方案):敏感組(54.21±1.05)%、耐藥組(21.38±1.40)%;柔紅霉素+阿糖胞苷(DA方案):敏感組(53.59±11.21)%、耐藥組(22.83±1.85)%;吡柔比星+阿糖胞苷(TA方案):敏感組(53.78±9.57)%、耐藥組(21.68±1.66)%;去甲氧柔紅霉素+阿糖胞苷(IA方案):敏感組(60.78±11.28)%、耐藥組(21.16±1.68)%。1.3 43例初治AML患者中,體外敏感者35例,體外耐藥8例,體外藥敏結(jié)果與體內(nèi)療效的關(guān)系為:S/S 32例,S/R 3例,R/S 1例,R/R 7例,總符合率為90.70%,陽性符合率為91.43%,陰性符合率為87.50%,表明體外藥敏實驗對化療藥物的體內(nèi)療效有很好的預(yù)測價值。1.4新鮮原代細(xì)胞與凍存復(fù)蘇后細(xì)胞抑制率的比較:采用臺盼藍(lán)拒染實驗統(tǒng)計43例AML患者的新鮮原代細(xì)胞及凍存復(fù)蘇后細(xì)胞的細(xì)胞活力。新鮮原代細(xì)胞的平均活細(xì)胞率為(96.69±1.39)%,復(fù)蘇后平均活細(xì)胞率為(79.09±6.02)%,兩者比較P=0.000,說明經(jīng)過復(fù)蘇后的細(xì)胞較新鮮原代細(xì)胞活性下降。將各聯(lián)合用藥作用于復(fù)蘇后的細(xì)胞,MTT法測定其細(xì)胞生長抑制率,HA方案:敏感組(60.84±8.51)%、耐藥組(27.53±1.22)%;MA方案:敏感組(59.23±7.94)%、耐藥組(26.53±3.86)%;DA方案:敏感組(59.76±9.12)%、耐藥組(27.38±1.31)%;TA方案:敏感組(58.60±8.92)%、耐藥組(28.52±1.49)%;IA方案:敏感組(68.38±9.82)%、耐藥組(27.21±0.98)%,分別與新鮮原代細(xì)胞的抑制率進(jìn)行比較,P0.05,化療方案作用于新鮮原代細(xì)胞與復(fù)蘇后細(xì)胞的抑制率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。43例AML原代細(xì)胞復(fù)蘇后體外藥敏實驗結(jié)果與體內(nèi)療效的關(guān)系為:S/S 32例,S/R 10例,R/S 1例,R/R 0例,總符合率為74.42%。將新鮮原代細(xì)胞與復(fù)蘇后細(xì)胞體內(nèi)外總符合率進(jìn)行比較,P0.05,兩者差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。若將復(fù)蘇后細(xì)胞替代新鮮原代細(xì)胞進(jìn)行體外藥敏實驗,體內(nèi)外一致性受到影響,因此本實驗均采用新鮮原代細(xì)胞。1.5根據(jù)體外藥敏實驗和臨床療效結(jié)果分為敏感組(S/S)及耐藥組(R/R),按照年齡(≥60歲)、白細(xì)胞計數(shù)(≥100×109/L)、危險度分層(低危、中危、高危)、是否緩解、是否復(fù)發(fā)進(jìn)行單因素分析,結(jié)果提示體外實驗敏感組體內(nèi)緩解率高,復(fù)發(fā)率低,體外實驗?zāi)退幗M體內(nèi)緩解率低,復(fù)發(fā)率高,并且白細(xì)胞計數(shù)、危險度分層與化療敏感性及疾病復(fù)發(fā)有關(guān)(P0.05)。將單因素分析結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意義的指標(biāo)進(jìn)行賦值,并進(jìn)行Logistic多因素回歸分析,結(jié)果提示:危險度分層為患者對化療是否敏感及是否易復(fù)發(fā)的獨立危險因素。2單藥或聯(lián)合藥物對白血病K562/A02耐藥細(xì)胞株增殖的影響2.1 MTT法檢測K562/A02耐藥細(xì)胞對阿霉素耐藥倍數(shù)的結(jié)果:阿霉素作用于K562/A02細(xì)胞24小時的IC50值為12.38μg/ml,作用于K562細(xì)胞24小時的IC50值為0.14μg/ml,兩樣本t檢驗示,K562/A02細(xì)胞對阿霉素的敏感性低于K562細(xì)胞(P0.05),K562/A02細(xì)胞的耐藥倍數(shù)是K562細(xì)胞的87倍,可繼續(xù)用于實驗。2.2不同濃度單藥對K562/A02耐藥細(xì)胞株增殖的影響:不同濃度地西他濱作用于K562/A02細(xì)胞株48h,各組抑制率分別為(19.94±0.12)%、(34.05±0.11)%、(52.23±0.10)%、(60.10±0.07)%,實驗結(jié)果表明不同濃度地西他濱對K562/A02細(xì)胞增殖有抑制作用,且呈劑量依賴性,隨著濃度的升高,抑制率逐漸升高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。不同濃度柔紅霉素作用于K562/A02細(xì)胞48h,各組抑制率分別為(6.97±2.32)%、(15.10±1.93)%、(25.11±2.11)%、(30.52±1.76)%。不同濃度阿糖胞苷作用于K562/A02細(xì)胞48h各組抑制率分別為(9.20±2.68)%、(19.08±2.11)%、(25.39±1.75)%、(36.15±3.14)%。2.3單藥及聯(lián)合藥物對K562/A02耐藥細(xì)胞株增殖的影響:分別計算出地西他濱的IC50值為0.77μg/ml,柔紅霉素的IC50值為7.57μg/ml,阿糖胞苷的IC50值為5.48μg/ml。地西他濱、柔紅霉素、阿糖胞苷各單藥作用于K562/A02細(xì)胞48h抑制率分別為(45.22±2.07)%、(26.82±1.94)%、(22.29±3.01)%。地西他濱+柔紅霉素作用于K562/A02細(xì)胞48h抑制率為(76.32±1.75)%,地西他濱+阿糖胞苷作用于K562/A02細(xì)胞48h抑制率為(79.02±2.30)%,柔紅霉素+阿糖胞苷作用于K562/A02細(xì)胞48h抑制率為(28.05±1.20)%。地西他濱+柔紅霉素處理組較柔紅霉素、地西他濱單藥處理組均有顯著差異(P=0.000),地西他濱+阿糖胞苷處理組較地西他濱、阿糖胞苷單藥處理組均有顯著差異(P=0.000),地西他濱+柔紅霉素處理組、地西他濱+阿糖胞苷處理組均較柔紅霉素+阿糖胞苷處理組有統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.000)。3單藥或聯(lián)合用藥對復(fù)發(fā)難治性AML原代細(xì)胞增殖的影響3.1單藥對復(fù)發(fā)難治AML原代細(xì)胞增殖的影響:地西他濱單藥處理5例復(fù)發(fā)難治性AML原代細(xì)胞的抑制率分別為:(40.95±3.42)%、(42.12±2.34)%、(40.91±3.26)%(40.14±3.20)%、(42.56±3.55)%;柔紅霉素單藥處理的抑制率分別為(20.25±2.84)%、(20.80±3.06)%(21.19±3.57)%、(19.68±3.24)%、(20.87±4.18)%;阿糖胞苷單藥處理組的抑制率分別為(17.19±2.97)%、(17.30±3.20)%、(15.30±2.25)%、(17.36±1.72)%、(17.95±2.23)%。3.2地西他濱為主聯(lián)合藥物對復(fù)發(fā)難治AML原代細(xì)胞增殖的影響:地西他濱聯(lián)合柔紅霉素處理5例復(fù)發(fā)難治AML原代細(xì)胞的抑制率分別為:(73.08±1.69)%、(72.80±1.07)%、(73.88±1.71)%、(73.98±1.45)%、(73.15±2.12)%;地西他濱聯(lián)合阿糖胞苷處理的抑制率分別為:(75.78±3.06)%、(75.56±2.29)%、(74.55±2.87)%、(76.23±2.21)%、(75.66±2.52)%。柔紅霉素聯(lián)合阿糖胞苷處理的抑制率分別為:(27.06±1.82)%、(27.72±1.88)%、(27.70±1.63)%、(26.39±1.27)%、(25.18±2.24)%。地西他濱+柔紅霉素處理組均較地西他濱、柔紅霉素單藥處理組有顯著差異(P=0.000),地西他濱+阿糖胞苷處理組均較地西他濱、阿糖胞苷單藥處理組有顯著差異(P=0.000),地西他濱聯(lián)合藥物處理組較柔紅霉素+阿糖胞苷處理組有顯著差異(P=0.000)。地西他濱、柔紅霉素、阿糖胞苷各單藥及地西他濱+柔紅霉素、地西他濱+阿糖胞苷、柔紅霉素+阿糖胞苷聯(lián)合用藥處理K562/A02細(xì)胞及難治原代細(xì)胞,兩樣本t檢驗表明,兩種細(xì)胞的增殖抑制率存在顯著差異(P0.01),說明K562/A02細(xì)胞對藥物的敏感性高于難治原代細(xì)胞。結(jié)論:1體外藥敏實驗與臨床療效相關(guān)性好,對于耐藥患者可根據(jù)體外藥敏實驗結(jié)果選擇最佳化療方案,調(diào)整治療。2敏感組(S/S)臨床完全緩解率高,復(fù)發(fā)率低,耐藥組(R/R)臨床完全緩解率低,復(fù)發(fā)率高。危險度分層為患者對化療是否敏感及是否易復(fù)發(fā)的獨立危險因素。3地西他濱能逆轉(zhuǎn)耐藥細(xì)胞株K562/A02對阿糖胞苷、柔紅霉素的耐藥性,同時能逆轉(zhuǎn)復(fù)發(fā)、難治AML對阿糖胞苷、柔紅霉素的耐藥性。地西他濱為主的聯(lián)合化療方案對于復(fù)發(fā)難治性AML應(yīng)用前景良好。
【關(guān)鍵詞】：急性髓系白血病(AML) MTT 地西他濱(DAC) 逆轉(zhuǎn)耐藥 K562/A02細(xì)胞株
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R733.71
【目錄】：

• 中文摘要4-9
• 英文摘要9-14
• 英文縮寫14-15
• 前言15
• 材料與方法15-21
• 結(jié)果21-25
• 附圖25-29
• 附表29-33
• 討論33-35
• 結(jié)論35-36
• 參考文獻(xiàn)36-38
• 綜述 急性髓系白血病耐藥機(jī)制研究進(jìn)展38-49
• 參考文獻(xiàn)45-49
• 致謝49-50
• 個人簡歷50

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 成志勇;李琳;王亞麗;李華;顏曉燕;蔣麗媛;田赫;賈志強(qiáng);潘];;PTEN基因逆轉(zhuǎn)白血病多因素多藥耐藥機(jī)制探討[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2013年02期

2 謝雙鋒;尹松梅;李丹;李益清;聶大年;馬麗萍;肖潔;王秀菊;;白血病K562細(xì)胞XIAP表達(dá)RNAi下調(diào)對凋亡及化療敏感性影響的研究[J];中華腫瘤防治雜志;2013年06期

3 羅梅華,卞壽庚,馮敏,孟慶祥,秘營昌,趙春亭,王冬梅,吳克復(fù);藥敏試驗MTT法對急性白血病化療療效的預(yù)示價值[J];實驗血液學(xué)雜志;1995年01期

4 康睿;曹勵之;俞燕;胡婷;王卓;許望瓊;謝岷;;WAVE1基因在K562/A02白血病細(xì)胞多藥耐藥中的作用[J];中華血液學(xué)雜志;2007年06期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 付雪;地西他濱對K562細(xì)胞增殖、凋亡及WAVE1基因表達(dá)的影響[D];鄭州大學(xué);2014年

，

本文編號：651903