本文關(guān)鍵詞：基于尿液代謝組學(xué)方法篩選膀胱癌診斷標(biāo)志物

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【摘要】：目的:采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用的代謝組學(xué)技術(shù)方法分析膀胱癌患者與正常人的尿液中內(nèi)源性代謝物水平差異,尋找膀胱癌相關(guān)潛在的診斷生物標(biāo)志物,進(jìn)而對(duì)膀胱癌疾病發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移機(jī)制有更深入的了解,為膀胱癌的早期診斷和預(yù)后監(jiān)測(cè)提供新的策略。研究方法:本研究分為兩個(gè)階段:即發(fā)現(xiàn)階段和驗(yàn)證階段。發(fā)現(xiàn)階段中共納入符合標(biāo)準(zhǔn)的研究對(duì)象32例膀胱癌患者作為實(shí)驗(yàn)組,21例健康人作為正常對(duì)照組。收集對(duì)照組人群和膀胱癌患者的晨尿,做好前期處理和登記。收集到的尿液樣本采用硅烷化衍生作為預(yù)處理,運(yùn)用GC-MS代謝組學(xué)技術(shù)平臺(tái)檢測(cè),利用標(biāo)準(zhǔn)化合物數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)代謝物色譜峰進(jìn)行定量和定性分析,鑒定出腫瘤組和對(duì)照組尿液樣本的內(nèi)源性差異性代謝物。采用主成分分析(PCA)和正交偏最小方差判別分析(OPLS-DA)對(duì)兩組多元數(shù)據(jù)進(jìn)行分析并做統(tǒng)計(jì),同時(shí)評(píng)估內(nèi)源性差異代謝物的診斷能力并運(yùn)用二分類(lèi)Logistic回歸建立膀胱癌診斷模型,以期提高膀胱癌早期診斷靈敏度和特異度。驗(yàn)證階段擴(kuò)大樣本量對(duì)前一階段的結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證,納入符合標(biāo)準(zhǔn)的79例膀胱癌患者和51例健康人,研究技術(shù)和方法與發(fā)現(xiàn)階段相同。結(jié)果:在發(fā)現(xiàn)階段中,通過(guò)GC-MS技術(shù)平臺(tái)分離鑒定出22種差異代謝物,這些物質(zhì)是:琥珀酸、麥芽糖、甘油-1-磷酸、鄰苯二甲酸二乙酯、3-甲基戊二酸、甘氨酸、肌酐、含羞草堿、6-去氧-L-甘露糖、4-氨基丁酸、磷酸鹽、黃尿酸、犬尿酸、谷氨酸、烯醇-丙酮酸、吡咯烷酮羧酸、腺嘌呤、3-磷酸甘油酸、N-乙�；�-天門(mén)冬氨酸、2-氨基-4,6-二羥基嘧啶、甲基枸櫞酸和胞嘧啶。PCA、OPLS-DA進(jìn)行多變量數(shù)據(jù)分析,結(jié)果提示膀胱癌實(shí)驗(yàn)組與正常對(duì)照組尿液代謝譜有明顯差異。對(duì)22種尿液內(nèi)源性差異代謝物進(jìn)行診斷效能的檢測(cè),結(jié)果提示它們的ROC曲線下面積(AUC)在0.7-0.9之間,診斷價(jià)值中等。采用二分類(lèi)Logistic回歸統(tǒng)計(jì)分析,將麥芽糖(B)、鄰苯二甲酸二酯(D)、3-甲基戊二酸(E)、甘氨酸(F)、吡咯烷酮羧酸(P)和3-磷酸甘油酸(R)這6種差異代謝物納入診斷模型中,Y=1.4835-7.94B×10-6-6.391D×10-5-1.005E×10-5-9.727F×10-8+2.071P×10-6-5.875R×10-5。其AUC=0.94,靈敏度提高到76.19%,特異度提高到100%,陽(yáng)性預(yù)測(cè)值高達(dá)100%,陰性預(yù)測(cè)值為86.5%,減少誤診率。后續(xù)的驗(yàn)證階段中,分離鑒定出14種差異代謝物,它們是琥珀酸、甘油-1-磷酸、甘氨酸、含羞草堿、6-去氧-L-甘露糖、4-氨基丁酸、磷酸鹽、犬尿酸、烯醇-丙酮酸、3-磷酸甘油酸、N-乙酰基-天門(mén)冬氨酸、2-氨基-4,6-二羥基嘧啶、甲基枸櫞酸和胞嘧啶,有趣的是,這些內(nèi)源性差異代謝物與發(fā)現(xiàn)階段的差異代謝物完全吻合。14種差異代謝物AUC在0.60-0.8之間,診斷價(jià)值中等,采用二分類(lèi)Logistic回歸將差異代謝物聯(lián)用制定診斷模型,Y=1.0894-1.607B×10-6-2.049I×10-7-5.051K×10-6+1.644L×10-5。將甘油-1-磷酸(B)、烯醇-丙酮酸(I)、N-乙�；�-天門(mén)冬氨酸(N)和2-氨基-4,6-二羥基嘧啶(L)最終納入聯(lián)合診斷模型中,AUC=0.78,靈敏度為73.4%,特異度為68.6%,陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為78.4%,陰性預(yù)測(cè)值為62.5%,診斷價(jià)值顯著提高。對(duì)腫瘤組進(jìn)行亞組分析,發(fā)現(xiàn)3-磷酸甘油酸、胞嘧啶的含量可能用于預(yù)測(cè)膀胱癌分期,甘油-1-磷酸、含羞草堿、4-氨基丁酸、3-磷酸甘油酸、N-乙�；�-天門(mén)冬氨酸和胞嘧啶可能用于預(yù)測(cè)膀胱癌分級(jí)。結(jié)論:本研究揭示了氣相色譜-質(zhì)譜代謝組學(xué)技術(shù)用于膀胱癌代謝譜的分析是可行的。琥珀酸、麥芽糖、甘油-1-磷酸、鄰苯二甲酸二乙酯、3-甲基戊二酸、甘氨酸、肌酐、含羞草堿、6-去氧-L-甘露糖、4-氨基丁酸、磷酸鹽、黃尿酸、犬尿酸、谷氨酸、烯醇-丙酮酸、吡咯烷酮羧酸、腺嘌呤、3-磷酸甘油酸、N-乙�；�-天門(mén)冬氨酸、2-氨基-4,6-二羥基嘧啶、甲基枸櫞酸和胞嘧啶是篩選出的內(nèi)源性差異代謝物,它們可能成為診斷膀胱癌的潛在生物標(biāo)志物。此外,將麥芽糖、鄰苯二甲酸二脂、3-甲基戊二酸、甘氨酸、吡咯烷酮羧酸和3-磷酸甘油酸這6種差異代謝物聯(lián)用,構(gòu)建出膀胱癌的診斷模型,提高膀胱癌的診斷率。但是,仍然需要后續(xù)的多中心、大樣本的研究進(jìn)一步驗(yàn)證和檢驗(yàn),尋找診斷價(jià)值更高的差異代謝物。
【關(guān)鍵詞】：代謝組學(xué) 膀胱癌 氣相色譜-質(zhì)譜 生物標(biāo)志物
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R737.14
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 英文縮略詞表8-9
• 前言9-14
• 參考文獻(xiàn)11-14
• 第一部分 篩選尿液代謝物用于膀胱癌診斷標(biāo)志物—Training Phase14-36
• 一、材料儀器、研究對(duì)象15-17
• 二、實(shí)驗(yàn)方法17-19
• 三、統(tǒng)計(jì)分析19-20
• 四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果20-30
• 五、分析與討論30-32
• 六、結(jié)論32
• 參考文獻(xiàn)32-36
• 第二部分 驗(yàn)證尿液代謝物用于膀胱癌診斷標(biāo)志物—Test Phase36-58
• 一、材料儀器和研究對(duì)象37-39
• 二、實(shí)驗(yàn)方法39-41
• 三、統(tǒng)計(jì)分析41-42
• 四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果42-54
• 五、討論與分析54-55
• 六、結(jié)論55-56
• 參考文獻(xiàn)56-58
• 綜述：代謝組學(xué)在膀胱癌中的研究進(jìn)展58-68
• 參考文獻(xiàn)64-68
• 在讀期間發(fā)表論文和科研工作情況68-69
• 致謝69-70

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 Angela W Chan;Richdeep S Gill;Daniel Schiller;Michael B Sawyer;;Potential role of metabolomics in diagnosis and surveillance of gastric cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2014年36期

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本文編號(hào)：647165