本文關(guān)鍵詞：腫瘤全抗原負(fù)載D-CIK對肝癌細(xì)胞特異性殺傷作用的實驗研究

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【摘要】：目的探討抗原負(fù)載類型的優(yōu)化方案以及不同來源的D-CIK的抗腫瘤效應(yīng)的差異,為尋找臨床上抗腫瘤作用最佳的細(xì)胞類型提供新的方法。方法1.腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)及腫瘤抗原制備利用組織酶消化法從新鮮肝癌組織中培養(yǎng)出自體肝癌細(xì)胞,反復(fù)凍融法制備自體肝癌細(xì)胞全抗原和購買的異體肝癌細(xì)胞系(BEL-7402)抗原。2.DC的誘導(dǎo)培養(yǎng)、抗原負(fù)載及表型分析抽取肝癌病人50ml外周血,密度梯度離心法搜集單個核細(xì)胞(PBMCs),經(jīng)2h培養(yǎng)后,貼壁細(xì)胞可經(jīng)GM-CSF、IL-4、TNF-α誘導(dǎo)成熟成為DC細(xì)胞。將方法1制備的腫瘤抗原于第6日和DCs混合培養(yǎng)以負(fù)載DCs細(xì)胞。收集第8日DCs進(jìn)行表型檢測。3.CIK細(xì)胞的誘導(dǎo)培養(yǎng)、D-CIK細(xì)胞培養(yǎng)及表型分析上述非貼壁細(xì)胞經(jīng)IFN-γ、CD3Mb、IL-2誘導(dǎo)成為CIKs,第8日將負(fù)載抗原的DC與CIKs混合培養(yǎng)從而形成D-CIK細(xì)胞,動態(tài)觀察CIKs細(xì)胞的增殖情況。收集第15日CIKs行流式細(xì)胞檢測。4.CIK細(xì)胞殺傷試驗檢測將CIKs分為三組:單純CIKs、異體Ag-D-CIK、自體Ag-D-CIK,MTT法檢測三種CIKs對原代肝癌細(xì)胞的殺瘤效用及其發(fā)揮作用的量效關(guān)系,分別通過對肝癌及乳腺癌的殺傷活性觀察CIKs的靶向特異性。結(jié)果1.DC細(xì)胞形態(tài)及表型分析DCs于誘導(dǎo)第3日出現(xiàn)細(xì)胞突起,呈現(xiàn)不規(guī)則形狀,第5日細(xì)胞呈多角形改變,第7日經(jīng)腫抗原負(fù)載及TNF-α誘導(dǎo)成熟,胞體呈現(xiàn)明顯的樹突狀改變。經(jīng)流式檢測結(jié)果顯示經(jīng)抗原負(fù)載的DC表面標(biāo)志CD80、CD83表達(dá)率較無負(fù)載組高(p0.01)。2.CIK細(xì)胞形態(tài)、增殖速度及表型分析初始的CIKs細(xì)胞小而圓,胞質(zhì)較少,細(xì)胞數(shù)量較少,CIKs細(xì)胞的增殖在第3d開始明顯變化,胞體逐漸增大,胞漿豐富,懸浮細(xì)胞出現(xiàn)集簇生長,數(shù)量開始增加,第8d加入抗原負(fù)載的DCs后,細(xì)胞擴(kuò)增速率達(dá)到最高,第21日后細(xì)胞擴(kuò)增速度明顯減緩。與單純CIKs組、異體Ag-D-CIK相比,自體Ag-D-CIK組CD3+CD8+、CD3+CD56+的表達(dá)比例最高。3.細(xì)胞殺傷實驗相同效靶比下三組CIKs細(xì)胞殺傷活性有顯著差異,抗原負(fù)載組大于單純CIKs組,而自體抗原負(fù)載組大于異體抗原負(fù)載組且各組細(xì)胞溶瘤活性隨效靶比的提高而逐漸提高。效靶比為20:1時,自體抗原負(fù)載D-CIK對肝癌細(xì)胞殺傷活性(56.24±0.56%)優(yōu)于乳腺癌細(xì)胞殺傷活性(31.18±0.54%)。結(jié)論1.抗原的負(fù)載能夠誘導(dǎo)DCs的成熟,提高DCs免疫表型的表達(dá),增強(qiáng)DCs的抗原呈遞功能。2.將抗原致敏的DCs與CIKs共培養(yǎng)的D-CIK具有更強(qiáng)大的增值能力及殺傷力。3.經(jīng)新鮮腫瘤細(xì)胞全抗原負(fù)載的DCs誘導(dǎo)培養(yǎng)的D-CIK能夠發(fā)揮特異性的抗腫瘤作用。
【關(guān)鍵詞】：肝癌 樹突狀細(xì)胞 細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞 腫瘤免疫
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 主要中英文縮略語表10-11
• 前言11-13
• 實驗材料與方法13-21
• 結(jié)果21-26
• 討論26-28
• 結(jié)論28-29
• 參考文獻(xiàn)29-33
• 附圖33-37
• 綜述37-44
• References41-44
• 在學(xué)期間研究成果44-45
• 致謝45-46
• 個人簡介46

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3 主鴻鵠,潘秀英,劉軍權(quán),陳復(fù)興,黃一虹,何徐彭,徐開林;抗原負(fù)載的樹突狀細(xì)胞介導(dǎo)的抗慢性粒細(xì)胞白血病作用[J];白血病.淋巴瘤;2001年05期

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