本文關(guān)鍵詞：高危型人乳頭瘤病毒檢測方法研究

  更多相關(guān)文章： 人乳頭瘤病毒 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 芯片電泳 環(huán)介導(dǎo)等溫擴增 可視化檢測

【摘要】：人乳頭瘤病毒(HPV)是一種DNA病毒,主要感染人的皮膚和粘膜,高危型人乳頭瘤病毒的持續(xù)感染與宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān),因此建立一種快速簡便的檢測高危型HPV的方法具有十分重要的意義。本研究的主要內(nèi)容如下：第一章,簡要介紹了人乳頭瘤病毒及其與宮頸癌的關(guān)系,總結(jié)了HPV的檢測方法,詳細闡述了一些核酸等溫擴增方法及其應(yīng)用,提出了本課題的研究思路及方法。第二章,建立了基于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)和芯片電泳檢測的高危型人乳頭瘤病毒HPV16和HPV18的檢測方法,分別使用了通用型引物和特異性引物對HPV DNA進行擴增以達到可以檢測的含量,擴增產(chǎn)物的DNA測序結(jié)果證實了兩種擴增的準(zhǔn)確性。使用微芯片電泳系統(tǒng)檢測PCR產(chǎn)物,實現(xiàn)了DNA樣品的快速高通量分析,單個樣品檢測時間約為2-3分鐘,最少樣品消耗量約為2μL,靈敏度可以達到102個細胞。第三章,建立了基于環(huán)介導(dǎo)等溫擴增(LAMP)的可視化高危型人乳頭瘤病毒HPV16和HPV18的檢測方法,產(chǎn)物可以使用可視化方法檢測。與傳統(tǒng)檢測方法相比,所有反應(yīng)物事先加好,整個反應(yīng)過程中不需要打開蓋子,結(jié)束后無需額外加入熒光染料,避免了可能造成的交叉污染,同時大大縮短了反應(yīng)時間,提高了反應(yīng)的準(zhǔn)確性,有望用于輔助宮頸癌早期篩查,具有實際應(yīng)用前景。
【關(guān)鍵詞】：人乳頭瘤病毒 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 芯片電泳 環(huán)介導(dǎo)等溫擴增 可視化檢測
【學(xué)位授予單位】：北京化工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.33;R730.43
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-12
• 第一章 緒論12-24
• 1.1 人乳頭瘤病毒概述12-14
• 1.1.1 HPV及其亞型12
• 1.1.2 HPV結(jié)構(gòu)12-13
• 1.1.3 HPV感染和宮頸癌的關(guān)系13-14
• 1.2 HPV檢測方法14-16
• 1.3 核酸等溫擴增技術(shù)16-22
• 1.3.1 核酸擴增技術(shù)發(fā)展概述16-17
• 1.3.2 核酸等溫擴增技術(shù)及其應(yīng)用17-22
• 1.4 本課題的提出及意義22-24
• 第二章 基于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)和芯片電泳檢測的高危型人乳頭瘤病毒檢測方法24-39
• 2.1 引言24-25
• 2.2 實驗部分25-32
• 2.2.1 實驗所需的儀器和試劑25-26
• 2.2.2 宮頸癌細胞培養(yǎng)26-27
• 2.2.3 宮頸癌細胞系基因組DNA提取及濃度檢測27-28
• 2.2.4 HPV通用引物PCR擴增28-29
• 2.2.5 HPV特異性引物PCR擴增29-31
• 2.2.6 PCR產(chǎn)物檢測31-32
• 2.3 結(jié)果與討論32-38
• 2.3.1 HPV通用引物PCR擴增32-34
• 2.3.2 HPV特異性引物PCR擴增34-38
• 2.4 本章小結(jié)38-39
• 第三章 基于環(huán)介導(dǎo)等溫擴增的可視化高危型人乳頭瘤病毒檢測方法39-52
• 3.1 引言39-41
• 3.2 實驗部分41-43
• 3.2.1 實驗所需的儀器和試劑41
• 3.2.2 HPV環(huán)介導(dǎo)等溫擴增41-43
• 3.2.3 環(huán)介導(dǎo)等溫擴增產(chǎn)物檢測43
• 3.3 結(jié)果與討論43-50
• 3.3.1 HPV環(huán)介導(dǎo)等溫擴增43-45
• 3.3.2 臨床樣品檢測45-50
• 3.4 本章小結(jié)50-52
• 第四章 結(jié)論52-53
• 參考文獻53-59
• 致謝59-60
• 研究成果及發(fā)表的學(xué)術(shù)論文60-61
• 作者及導(dǎo)師簡介61-62
• 附件62-63

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本文編號：645565