發(fā)布時(shí)間：2017-08-09 10:33

  本文關(guān)鍵詞：CEA調(diào)控的溶瘤腺病毒攜帶TRAIL和MnSOD雙基因治療肺癌的研究

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【摘要】：肺癌是全球最主要的惡性腫瘤之一,其中肺腺癌是肺癌主要的亞型。在我國(guó),肺癌的發(fā)病率和死亡率位列所有癌癥的首位,其中死亡率更是高于世界平均水平。因此,探索和選擇一種安全高效的治療肺癌的方法勢(shì)在必行。近年的研究表明,癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen,CEA)是非小細(xì)胞肺癌的重要標(biāo)志物,在肺癌的診斷和預(yù)后檢測(cè)中具有一定的臨床意義,也是一種有效的癌癥治療靶標(biāo)。有報(bào)道稱CEA啟動(dòng)子介導(dǎo)的溶瘤腺病毒攜帶抗癌基因具有良好的抗癌效果。然而,溶瘤腺病毒介導(dǎo)的單基因抗癌效果有限。為了達(dá)到更好的治療效果,采用連接子連接兩種抑癌基因的癌癥靶向雙基因-病毒療法,有望達(dá)到協(xié)同治療癌癥的效果。本研究,我們通過刪除溶瘤腺病毒的E1B 55k Da基因,采用CEA作為啟動(dòng)子來控制溶瘤腺病毒E1A的表達(dá),同時(shí)利用caspase-8識(shí)別位點(diǎn)序列(IETD)連接抑癌基因TRAIL和MnSOD,構(gòu)建得到靶向雙基因-溶瘤腺病毒CD55-TRAILIETD-MnSOD。通過real-time PCR篩選出CEA陽(yáng)性的腫瘤細(xì)胞;接著利用MTT、結(jié)晶紫、Hoechst33342染色、流式細(xì)胞術(shù)和western blot等體外實(shí)驗(yàn)檢測(cè)重組溶瘤病毒抑制癌細(xì)胞增殖的能力以及引起凋亡的可能的信號(hào)通路;進(jìn)一步,我們構(gòu)建了裸鼠A549肺癌移植瘤模型,研究CD55-TRAIL-IETD-MnSOD體內(nèi)抗癌效果。體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明CD55-TRAIL-IETD-MnSOD比單基因溶瘤腺病毒CD55-TRAIL、CD55-MnSOD或其聯(lián)合處理組都具有更明顯的誘導(dǎo)凋亡的作用,同時(shí)對(duì)正常細(xì)胞無明顯毒性。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明,CD55-TRAIL-IETD-MnSOD能更好的抑制腫瘤生長(zhǎng)、誘導(dǎo)腫瘤組織凋亡,同時(shí)不引起明顯的肝、腎、脾等組織損傷。綜上,本研究構(gòu)建的癌癥靶向雙基因-病毒CD55-TRAIL-IETD-MnSOD首次運(yùn)用CEA介導(dǎo)雙基因-病毒來治療癌癥,有望為肺癌的臨床治療提供有效的治療策略。
【關(guān)鍵詞】：溶瘤腺病毒 CEA TRAIL MnSOD 肺癌
【學(xué)位授予單位】：浙江理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R734.2
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-8
• 第一章 研究概述8-13
• 1.1 前言8-9
• 1.2 腫瘤的靶向基因-病毒治療策略9-10
• 1.3 溶瘤腺病毒載體ZD55概述10-11
• 1.4 CEA啟動(dòng)子11
• 1.5 TRAIL基因11
• 1.6 MnSOD基因11-12
• 1.7 實(shí)驗(yàn)的目的及意義12-13
• 第二章 CEA調(diào)控的溶瘤腺病毒攜帶TRAIL和MnSOD雙基因治療肺癌的研究13-48
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料13-19
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑13-14
• 2.1.2 主要質(zhì)粒和菌株14
• 2.1.3 病毒14
• 2.1.4 細(xì)胞株14-15
• 2.1.5 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備15-17
• 2.1.6 實(shí)驗(yàn)主要溶液的配備17-18
• 2.1.7 引物的設(shè)計(jì)與合成18-19
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法19-35
• 2.2.1 分子克�。弘p靶向基因-病毒載體系統(tǒng)AdCEAp-D55的構(gòu)建19-24
• 2.2.2 TRAIL/MnSOD雙基因武裝化的雙靶向重組病毒的構(gòu)建24-26
• 2.2.3 重組病毒的大量擴(kuò)增、純化和鑒定26-27
• 2.2.4 溶瘤腺病毒CD55-TRAIL-IETD-MnSOD體外抗瘤效果評(píng)價(jià)27-32
• 2.2.5 溶瘤腺病毒CD55-TRAIL-IETD-MnSOD體內(nèi)抗瘤效果評(píng)價(jià)32-35
• 2.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析35
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析35-46
• 2.3.1 重組質(zhì)粒的鑒定35-38
• 2.3.2 癌癥靶向雙基因-病毒CD55-TRAIL-IETD-MnSOD的特異性鑒定38-40
• 2.3.3 腫瘤細(xì)胞中病毒早期蛋白E1A和外源基因TRAIL和MnSOD的表達(dá)40
• 2.3.4 癌癥靶向雙基因-病毒CD55-TRAIL-IETD-MnSOD體外特異性抗腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)作用40-42
• 2.3.5 癌癥靶向雙基因-病毒特異性誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡效應(yīng)42-44
• 2.3.6 癌癥靶向雙基因-病毒CD55-TRAIL-IETD-MnSOD體內(nèi)抗腫瘤效果評(píng)價(jià)44-46
• 2.4 小結(jié)46-48
• 第三章 總結(jié)與展望48-50
• 參考文獻(xiàn)50-55
• 碩士期間研究成果55-56
• 致謝56

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6 謝立移;樊e，

本文編號(hào)：644845