本文關(guān)鍵詞：DC疫苗聯(lián)合麻腮風佐劑對乳腺癌荷瘤小鼠免疫治療的研究

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【摘要】：眾所周知,在女性群體中,乳腺癌是發(fā)病率最高的一種癌癥,且近年來的發(fā)病率還在不斷上升。原位的乳腺癌并不會危及生命,但癌細胞一旦轉(zhuǎn)移到其他組織就會有致命的危險。隨著對乳腺癌認識的不斷深入,乳腺癌治療理念也不斷更新,治療方法也更加多元化,其中免疫治療是近來年癌癥研究最為活躍的領(lǐng)域之一,可以通過對癌細胞的主動治療來實現(xiàn)消滅其的目的。樹突狀細胞(Dendritic cells, DC)是目前為止所發(fā)現(xiàn)的最強有力的抗原呈遞細胞,同時也是體內(nèi)僅有的能夠激活原初型T細胞的免疫細胞。人體內(nèi)樹突狀細胞的數(shù)目很少,且由于成熟度低導致功能受到了抑制。隨著對DC研究的不斷詳盡,DC體外擴增培養(yǎng)技術(shù)也日趨成熟,為臨床上使用DC疫苗進行腫瘤的免疫治療提供了依據(jù)。免疫佐劑,別稱非特異性免疫增生劑,當其同負載抗原DC疫苗提前或者一起注射進入機體內(nèi)時,免疫佐劑可以增強抗原的免疫原性,使機體產(chǎn)生高效、持久并具有記憶性的免疫應(yīng)答。本實驗旨在尋找到一種新型佐劑,增進負載腫瘤抗原的DC疫苗的免疫學功能,為臨床上針對乳腺癌的免疫治療奠定實驗基礎(chǔ)。本文擬采用的免疫佐劑是麻腮風聯(lián)合減毒活疫苗(Measles,Mumps and Rubella combined vaccine),它是目前中國廣泛用于預(yù)防麻疹、流行性腮腺炎、風疹三種兒童常見呼吸道傳染病的疫苗。[目的]探討DC疫苗聯(lián)合麻腮風佐劑對實驗動物Balb/c荷瘤鼠的免疫治療能否有效果。1.用乳腺癌4T1細胞裂解物致敏DC疫苗,研究4T1細胞裂解物對DC疫苗成熟度的影響；2.建立小鼠乳腺癌原位模型,探討麻腮風佐劑聯(lián)合DC疫苗對小鼠的乳腺癌能否有治療效果；3.按照不同方式用麻腮風佐劑免疫小鼠,研究麻腮風提前免疫和麻腮風聯(lián)合DC疫苗實時治療對荷瘤小鼠免疫格局的影響。[方法]1.用含10%FBS的RPMI-1640培養(yǎng)基來培養(yǎng)小鼠乳腺癌4T1細胞,并采用液氮、37℃反復凍融的方法制備4T1細胞裂解液。2.從Balb/c小鼠骨髓中提取出骨髓細胞懸液,經(jīng)紅細胞裂解液處理后,將剩下的單核細胞用含12%FBS的RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng),培養(yǎng)基中加入終濃度均為10ng/ml的細胞因子rmGM-CSF和rmIL-4刺激分化,用10ng/ml的細胞因子rmTNF-α刺激DC成熟。3.用4T1腫瘤細胞裂解液致敏DC細胞,制作負載腫瘤抗原的DC疫苗。4.在小鼠皮下乳房墊處原位種植4T1細胞5×104個,建立小鼠乳腺癌荷瘤模型。5.在不同的時間點用麻腮風免疫Balb/c小鼠。治療組：在接種4T1腫瘤細胞7天、14天、21天各進行一次治療,每只小鼠背部皮下注射50 μ l麻腮風疫苗工作液,同時在腋下淋巴結(jié)附近接種負載腫瘤抗原DC疫苗1×106個�；貞洃�(yīng)答組：在接種4T1腫瘤細胞前28天給小鼠進行麻腮風免疫,每只小鼠背部皮下注射50 μ l麻腮風疫苗工作液,14天后加強一次,接著給每只小鼠接種4T1腫瘤細胞,接種7天、14天、21天各進行一次治療,每只小鼠背部皮下注射50 μ l麻腮風疫苗工作液,同時在腋下淋巴結(jié)附近接種負載腫瘤抗原DC疫苗1×106個。每天觀察小鼠腫瘤生長狀況,比較其腫瘤體積以及小鼠的生存時間。6.小鼠經(jīng)心臟穿刺取血,4℃靜置過夜,3OOOr/min離心10min,分離出血清備用。用Elisa試劑盒檢測血清中細胞因子IL-12、TNF-α的含量。7.處死小鼠后取出瘤體,稱重,并計算各組相對于對照組的抑瘤率。[結(jié)果]1.用4T1腫瘤細胞裂解液致敏的DC細胞具有典型的形態(tài)學特征。2.所有組別的Balb/c小鼠在接種5×101個4T1細胞后,100%成瘤。小鼠的生存周期為4-14周。3.麻腮風聯(lián)合DC疫苗治療組和麻腮風聯(lián)合DC疫苗回憶應(yīng)答組小鼠腫瘤體積顯著低于對照組,且小鼠生存時間延長。4.麻腮風聯(lián)合DC疫苗治療組和麻腮風聯(lián)合DC疫苗回憶應(yīng)答組小鼠腫瘤重量顯著低于對照組,且抑瘤率分別達到46%和71%。5.麻腮風聯(lián)合DC疫苗治療組和麻腮風聯(lián)合DC疫苗回憶應(yīng)答組小鼠血清中IL-12、TNF-α水平顯著高于對照組,且麻腮風聯(lián)合DC疫苗回憶應(yīng)答組小鼠血清中IL-12、TNF-α水平最高。結(jié)論：麻腮風聯(lián)合減毒活疫苗聯(lián)合DC疫苗能促進細胞因子IL-12、TNF-α的分泌,減緩小鼠腫瘤的生長速度,延長小鼠的生存時間。提示麻腮風減毒活疫苗可以作為一種新型佐劑應(yīng)用于乳腺癌的免疫治療上。
【關(guān)鍵詞】：乳腺癌 免疫治療 樹突狀細胞 DC疫苗 免疫佐劑 麻腮風減毒活疫苗 細胞因子
【學位授予單位】：安徽大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9
【目錄】：

• 摘要3-6
• Abstract6-12
• 中英文縮略詞表12-14
• 前言14-22
• 1. 乳腺癌的免疫逃逸機制14-15
• 2. DC的來源及生物學特征15-16
• 3. DC的成熟16-17
• 4. DC及對抗原的攝取加工及呈遞17
• 5. DC的抗腫瘤免疫機制17-18
• 6. DC疫苗18-20
• 7. 免疫佐劑20-22
• 材料和方法22-33
• 1. 材料22-24
• 1.1 實驗細胞及動物22
• 1.2 儀器與設(shè)備22-23
• 1.3 藥品與試劑23
• 1.4 其他耗材23
• 1.5 溶液的配置23-24
• 2. 實驗方法24-33
• 2.1 4T1細胞的復蘇24
• 2.2 4T1細胞的傳代培養(yǎng)24-25
• 2.3 細胞計數(shù)25
• 2.4 臺盼藍染色25
• 2.5 4T1細胞的凍存25-26
• 2.6 4T1細胞裂解液的制備26
• 2.7 小鼠骨髓源樹突狀細胞的分離培養(yǎng)26-28
• 2.8 荷瘤小鼠模型的建立28-29
• 2.9 Balb/c小鼠的分組及免疫治療29-31
• 2.10 小鼠血清中IL-12和TNF-α含量的測定31-33
• 結(jié)果33-46
• 1. 體外培養(yǎng)4T1細胞的生長狀況33
• 2. DC的形態(tài)觀察33-36
• 3. 荷瘤小鼠乳腺癌模型36-37
• 4. 荷瘤小鼠腫瘤的生長狀況37-40
• 5. 麻腮風聯(lián)合DC疫苗對荷瘤小鼠的免疫治療效果40-42
• 6. 免疫治療后小鼠血清中的細胞因子IL-12和TNF-α的含量42-46
• 討論46-51
• 1. DC細胞的提取培養(yǎng)46-47
• 2. DC疫苗的制備47-48
• 3. 乳腺癌荷瘤小鼠模型的建立48
• 4. DC疫苗對乳腺癌荷瘤小鼠的免疫治療48-51
• 結(jié)論51-52
• 參考文獻52-56
• 致謝56-57

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 戚美芬;周薇;;術(shù)后擇時注射DC疫苗對乳腺癌患者免疫應(yīng)答影響的研究[J];護士進修雜志;2011年22期

2 沈晨陽,劉軍,王丹蕾,趙輝,張國良,蔡鵬,童春容,王俊;肺癌gp96-多肽復合物/DC疫苗體外誘導CTL反應(yīng)的實驗研究[J];中國肺癌雜志;2002年06期

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4 崔晶;林阿麗;劉群;孫青;;負載hGM-CSF基因的慢病毒載體介導的宮頸癌DC疫苗抗腫瘤活性的初步研究[J];現(xiàn)代婦產(chǎn)科進展;2010年06期

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6 喻t熑，

本文編號：644829