本文關(guān)鍵詞：K562細(xì)胞外泌體抑制骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞黏附功能的實驗研究

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【摘要】：背景:慢性粒細(xì)胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)是一類造血干細(xì)胞增殖異常的獲得性惡性血液腫瘤,其病因是融合基因BCR/ABL編碼的融合蛋白P210具有強烈酪氨酸激酶活性,引發(fā)造血細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化。CML是一種相對少見的惡性腫瘤,大約占所有癌癥的0.3%,占成人白血病的20%。根據(jù)骨髓中白血病細(xì)胞的數(shù)量和癥狀的嚴(yán)重程度,可將CML分為三個期:慢性期、加速期和急變期。CML進(jìn)展緩慢,但隨著時間推移病程逐漸出現(xiàn)進(jìn)展表現(xiàn),大量CML細(xì)胞進(jìn)入外周血并浸潤髓外臟器。究其原因,主要是骨髓微環(huán)境(microenvironment)的黏附功能降低,未成熟造血細(xì)胞得以穿越髓血屏障而逃逸。目前,唯一可能徹底治愈CML的方法是異基因造血干細(xì)胞移植,近來研究發(fā)現(xiàn),正常造血干細(xì)胞植入CML患者后其歸巢、黏附、定植于骨髓微環(huán)境的能力不足,是移植治療失敗的重要原因,進(jìn)一步說明CML骨髓微環(huán)境的黏附功能存在缺陷。外泌體是一類直徑為30-120nm的有膜囊泡,可由多種細(xì)胞分泌釋放入體內(nèi),攜帶有蛋白、核酸等生物活性分子,能在細(xì)胞間信號傳遞、信息交流中發(fā)揮一定作用。因此,本研究主要從CML細(xì)胞釋放的外泌體對骨髓微環(huán)境黏附功能的影響來闡述CML的進(jìn)展機制,為深入理解疾病進(jìn)展及提高療效提供新的研究方向。目的:探討CML細(xì)胞K562分泌的外泌體對小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)黏附功能的影響,為慢性粒細(xì)胞白血病的疾病進(jìn)展機制提供新的思路。方法:提取K562細(xì)胞外泌體及分離培養(yǎng)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs),將外泌體與BMSCs細(xì)胞共培養(yǎng)后,檢測BMSCs細(xì)胞黏附人臍血單個核細(xì)胞的能力,通過western blot與RT-PCR技術(shù)檢測BMSCs細(xì)胞黏附相關(guān)分子CD44與CXCL-12的表達(dá),最后利用芯片分析和q RT-PCR技術(shù)檢測外泌體mi R-711的表達(dá)。結(jié)果:(1)成功提取出K562細(xì)胞分泌的外泌體,培養(yǎng)出BMSCs細(xì)胞;(2)BMSCs細(xì)胞能攝取K562細(xì)胞外泌體;(3)K562細(xì)胞外泌體處理24h后,BMSCs細(xì)胞黏附人臍血單個核細(xì)胞的能力明顯受到抑制;(4)BMSCs細(xì)胞的黏附相關(guān)分子CD44和CXCL-12的表達(dá)明顯下調(diào)(P0.05)。(5)K562細(xì)胞外泌體中mi R-711的表達(dá)明顯高于K562細(xì)胞,達(dá)到13.28±1.73倍。結(jié)論:本研究提示慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞能通過其分泌的外泌體作用于骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,下調(diào)其黏附分子表達(dá),從而降低對造血干細(xì)胞的黏附能力,這可能與外泌體介導(dǎo)傳遞高濃度的mi R-711至BMSCs細(xì)胞有關(guān),為慢性粒細(xì)胞白血病的進(jìn)展機制提供新思路。
【關(guān)鍵詞】：慢性粒細(xì)胞白血病 外泌體 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 黏附 miR-711
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R733.72
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文縮略詞表9-10
• 第1章 引言10-12
• 第2章 材料與方法12-24
• 2.1 材料12-14
• 2.1.1 實驗細(xì)胞12
• 2.1.2 主要試劑12-13
• 2.1.3 主要儀器設(shè)備及耗材13
• 2.1.4 常用的自配試劑13-14
• 2.2 方法14-24
• 2.2.1 BMSCs細(xì)胞的分離和培養(yǎng)14
• 2.2.2 K562細(xì)胞外泌體的提取14-15
• 2.2.3 K562細(xì)胞外泌體的鑒定15
• 2.2.4 K562細(xì)胞外泌體攜帶核酸分子細(xì)胞間轉(zhuǎn)運的分析15-16
• 2.2.5 外泌體共孵育對BMSCs黏附功能的影響16-17
• 2.2.6 BMSCs細(xì)胞黏附分子總RNA檢測17-18
• 2.2.7 RT-PCR擴增18-19
• 2.2.8 BMSCs細(xì)胞黏附分子蛋白質(zhì)檢測19-21
• 2.2.9 外泌體miR-711的檢測21-23
• 2.2.10 統(tǒng)計學(xué)處理23-24
• 第3章 結(jié)果24-34
• 3.1 BMSCs的培養(yǎng)和鑒定24-25
• 3.2 K562細(xì)胞外泌體的分離和鑒定25-27
• 3.3 K562細(xì)胞外泌體能被BMSCs細(xì)胞攝取27-28
• 3.4 K562細(xì)胞外泌體抑制BMSCs細(xì)胞的黏附功能28-29
• 3.5 K562細(xì)胞外泌體下調(diào)BMSCs細(xì)胞黏附分子的表達(dá)29-30
• 3.5.1 RT-PCR檢測29-30
• 3.5.2 western blot檢測30
• 3.6 外泌體miR-711的檢測結(jié)果30-34
• 第4章 討論34-37
• 第5章 結(jié)論37-38
• 致謝38-39
• 參考文獻(xiàn)39-41
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果41-42
• 綜述42-57
• References53-57

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