本文關鍵詞：miR-24抑制BCL2L11表達促進胃癌生長的機制研究

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【摘要】：研究背景和目的:胃癌的發(fā)病率高,預后差,潛在發(fā)病機制尚未完全闡明。作為一種異質(zhì)性比較強的實體腫瘤,胃癌治療靶點的選擇困難重重。細胞凋亡貫穿腫瘤發(fā)生發(fā)展的整個過程,凋亡通路異常可能在惡性腫瘤發(fā)病機制中發(fā)揮重要作用,但目前其具體機制仍不明。BCL2L11作為BCL2家族的一員,是線粒體凋亡通路中的重要分子。在包括腫瘤在內(nèi)的多種疾病中,BCL2L11表達發(fā)生異常。Micro RNA(miRNA)通過負向調(diào)控靶基因表達參與腫瘤發(fā)生發(fā)展及化療耐藥等多個病理過程。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)了胃癌中異常的miRNA表達譜,且與患者預后相關。但其具體的調(diào)控機制仍在探索中。本課題旨在研究BCL2L11表達異常在胃癌發(fā)病中的調(diào)控機制,篩選影響B(tài)CL2L11表達的上游miRNA,并探索miRNA-BCL2L11信號通路對胃癌增殖、凋亡等生物學行為的影響。研究方法:1.靶點預測:通過生物信息學軟件篩選出BCL2L11可能是miR-24的靶基因。2.組織實驗:胃癌組織中miR-24與BCL2L11的表達分析。收集胃腺癌組織及其配對的癌旁正常組織,用Western Blot及RT-q PCR檢測組織中BCL2L11的含量;用Taqman探針法檢測miR-24表達水平。3.體外實驗:驗證miR-24-BCL2L11信號通路對胃癌細胞生物學行為的影響。(1)利用熒光素酶報告基因驗證miR-24與BCL2L11的調(diào)控關系。(2)利用miR-24類似物/抑制劑(mimics/inhibitors)使SGC7901細胞中miR-24上調(diào)/下調(diào)后,驗證對BCL2L11的調(diào)控作用。(3)用功能學實驗(CCK8增殖實驗、transwell、劃痕實驗及細胞凋亡實驗)驗證miR-24對胃癌細胞增殖、侵襲及凋亡的影響。(4)同時過表達BCL2L11及miR-24,驗證miR-24對胃癌增殖的影響。(5)利用si RNA下調(diào)BCL2L11的表達,進一步驗證BCL2L11的功能。4.體內(nèi)實驗:驗證miR-24-BCL2L11信號通路對腫瘤生長的影響。裸鼠腋下植瘤(SGC7901過表達BCL2L11組、SGC7901過表達miR-24組、對照組),4周后處死小鼠,取出腫瘤。測量腫瘤大小及重量,檢測組織中BCL2L11及miR-24表達水平。研究結果:1.組織實驗:與癌旁正常組織相比,胃癌組織中BCL2L11的蛋白水平較低,但m RNA水平無明顯變化,說明某種轉(zhuǎn)錄后調(diào)控機制影響B(tài)CL2L11的表達�；趍iRNA的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控作用,經(jīng)生物信息學軟件篩選得出BCL2L11可能為miR-24的靶基因。進一步驗證胃癌組織中miR-24的表達水平,結果發(fā)現(xiàn)相較于癌旁正常組織,胃癌組織中miR-24呈顯著高表達。2.體外實驗:(1)熒光素酶報告基因結果顯示miR-24可直接與BCL2L11的3’UTR區(qū)結合。(2)在SGC7901細胞中轉(zhuǎn)染miR-24 mimics/inhibitors后,細胞中miR-24表達水平上調(diào)/下調(diào)。Western Blot結果證實miR-24上調(diào)后,BCL2L11的蛋白水平下降;miR-24下調(diào)后BCL2L11的蛋白水平升高。RT-q PCR結果顯示其m RNA水平無明顯變化。(3)功能學實驗證實miR-24可促進胃癌細胞的增殖和遷移,抑制其凋亡。(4)在SGC7901細胞中同時過表達BCL2L11及miR-24,BCL2L11過表達可以部分削弱miR-24促進增殖的能力。(5)轉(zhuǎn)染si RNA可顯著抑制SGC7901細胞中BCL2L11的表達。BCL2L11下調(diào)后,細胞增殖加快,凋亡減少。3.體內(nèi)實驗:miR-24過表達組的腫瘤生長較快,并且其BCL2L11蛋白表達水平明顯下降,但m RNA水平無明顯變化。Mi R-24可以通過抑制BCL2L11的表達抑制體內(nèi)腫瘤生長。研究結論:胃癌組織中miR-24高表達,BCL2L11低表達。體內(nèi)和體外實驗均證實在胃癌中,miR-24可以通過抑制BCL2L11表達促進腫瘤的生長。
【關鍵詞】：胃癌 miR-24 BCL2L11 增殖 凋亡
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號說明10-11
• 前言11-16
• 研究現(xiàn)狀、成果11-15
• 研究目的、方法15-16
• 對象和方法16-34
• 1.1 實驗材料16-17
• 1.1.1 組織標本16
• 1.1.2 細胞系16
• 1.1.3 裸鼠16
• 1.1.4 常規(guī)試劑和耗材16-17
• 1.1.5 實驗所需主要抗體17
• 1.2 各實驗所需主要試劑及配置17-20
• 1.2.1 細胞培養(yǎng)所需試劑17-18
• 1.2.2 Western Blot所需主要試劑18-19
• 1.2.3 RT-qPCR所需主要試劑19
• 1.2.4 熒光素酶報告基因?qū)嶒炈柚饕噭?/span>19
• 1.2.5 細胞功能學實驗所需主要試劑19-20
• 1.3 主要實驗儀器20
• 1.4 主要實驗方法20-32
• 1.4.1 細胞培養(yǎng)20-23
• 1.4.2 蛋白提取23
• 1.4.3 總RNA提取23-24
• 1.4.4 Western blot24-26
• 1.4.5 mRNA的定量檢測26-27
• 1.4.6 miRNA的定量檢測27-29
• 1.4.7 熒光素酶報告基因?qū)嶒?/span>29
• 1.4.8 功能學實驗29-32
• 1.4.9 小鼠成瘤實驗32
• 1.5 統(tǒng)計學分析32-34
• 結果34-48
• 2.1 胃癌組織中BCL2L11低表達，，miR-24高表達34-36
• 2.1.1 胃癌組織中BCL2L11的表達分析34-35
• 2.1.2 靶點預測35-36
• 2.1.3 胃癌組織中miR-24的表達分析36
• 2.2 熒光素酶報告基因?qū)嶒炞C實BCL2L11是miR-24的靶基因36-38
• 2.3 miR-24參與BCL2L11的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控38-39
• 2.4 miR-24對胃癌細胞生物學行為的影響39-42
• 2.4.1 miR-24對胃癌細胞增殖能力的影響40
• 2.4.2 miR-24對胃癌細胞遷移能力的影響40-41
• 2.4.3 miR-24對胃癌細胞凋亡的影響41-42
• 2.5 BCL2L11過表達可以部分削弱miR-24促增殖的能力42-44
• 2.6 BCL2L11下調(diào)可促進胃癌細胞的增殖，抑制其凋亡44-45
• 2.7 miR24BCL2L11信號通路對體內(nèi)腫瘤生長的影響45-48
• 2.7.1 miR-24過表達促進體內(nèi)腫瘤生長45-46
• 2.7.2 miR-24可通過抑制BCL2L11的表達促進腫瘤生長46-48
• 討論48-53
• 結論53-55
• 參考文獻55-64
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明64-65
• 綜述 miRNA在胃癌中的研究進展65-77
• 綜述參考文獻71-77
• 致謝77-78
• 個人簡歷78

本文編號：636859