本文關(guān)鍵詞：miR-24抑制BCL2L11表達(dá)促進(jìn)胃癌生長的機(jī)制研究

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【摘要】：研究背景和目的:胃癌的發(fā)病率高,預(yù)后差,潛在發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。作為一種異質(zhì)性比較強(qiáng)的實(shí)體腫瘤,胃癌治療靶點(diǎn)的選擇困難重重。細(xì)胞凋亡貫穿腫瘤發(fā)生發(fā)展的整個過程,凋亡通路異�？赡茉趷盒阅[瘤發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用,但目前其具體機(jī)制仍不明。BCL2L11作為BCL2家族的一員,是線粒體凋亡通路中的重要分子。在包括腫瘤在內(nèi)的多種疾病中,BCL2L11表達(dá)發(fā)生異常。Micro RNA(miRNA)通過負(fù)向調(diào)控靶基因表達(dá)參與腫瘤發(fā)生發(fā)展及化療耐藥等多個病理過程。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)了胃癌中異常的miRNA表達(dá)譜,且與患者預(yù)后相關(guān)。但其具體的調(diào)控機(jī)制仍在探索中。本課題旨在研究BCL2L11表達(dá)異常在胃癌發(fā)病中的調(diào)控機(jī)制,篩選影響B(tài)CL2L11表達(dá)的上游miRNA,并探索miRNA-BCL2L11信號通路對胃癌增殖、凋亡等生物學(xué)行為的影響。研究方法:1.靶點(diǎn)預(yù)測:通過生物信息學(xué)軟件篩選出BCL2L11可能是miR-24的靶基因。2.組織實(shí)驗(yàn):胃癌組織中miR-24與BCL2L11的表達(dá)分析。收集胃腺癌組織及其配對的癌旁正常組織,用Western Blot及RT-q PCR檢測組織中BCL2L11的含量;用Taqman探針法檢測miR-24表達(dá)水平。3.體外實(shí)驗(yàn):驗(yàn)證miR-24-BCL2L11信號通路對胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。(1)利用熒光素酶報告基因驗(yàn)證miR-24與BCL2L11的調(diào)控關(guān)系。(2)利用miR-24類似物/抑制劑(mimics/inhibitors)使SGC7901細(xì)胞中miR-24上調(diào)/下調(diào)后,驗(yàn)證對BCL2L11的調(diào)控作用。(3)用功能學(xué)實(shí)驗(yàn)(CCK8增殖實(shí)驗(yàn)、transwell、劃痕實(shí)驗(yàn)及細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn))驗(yàn)證miR-24對胃癌細(xì)胞增殖、侵襲及凋亡的影響。(4)同時過表達(dá)BCL2L11及miR-24,驗(yàn)證miR-24對胃癌增殖的影響。(5)利用si RNA下調(diào)BCL2L11的表達(dá),進(jìn)一步驗(yàn)證BCL2L11的功能。4.體內(nèi)實(shí)驗(yàn):驗(yàn)證miR-24-BCL2L11信號通路對腫瘤生長的影響。裸鼠腋下植瘤(SGC7901過表達(dá)BCL2L11組、SGC7901過表達(dá)miR-24組、對照組),4周后處死小鼠,取出腫瘤。測量腫瘤大小及重量,檢測組織中BCL2L11及miR-24表達(dá)水平。研究結(jié)果:1.組織實(shí)驗(yàn):與癌旁正常組織相比,胃癌組織中BCL2L11的蛋白水平較低,但m RNA水平無明顯變化,說明某種轉(zhuǎn)錄后調(diào)控機(jī)制影響B(tài)CL2L11的表達(dá)。基于miRNA的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控作用,經(jīng)生物信息學(xué)軟件篩選得出BCL2L11可能為miR-24的靶基因。進(jìn)一步驗(yàn)證胃癌組織中miR-24的表達(dá)水平,結(jié)果發(fā)現(xiàn)相較于癌旁正常組織,胃癌組織中miR-24呈顯著高表達(dá)。2.體外實(shí)驗(yàn):(1)熒光素酶報告基因結(jié)果顯示miR-24可直接與BCL2L11的3’UTR區(qū)結(jié)合。(2)在SGC7901細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR-24 mimics/inhibitors后,細(xì)胞中miR-24表達(dá)水平上調(diào)/下調(diào)。Western Blot結(jié)果證實(shí)miR-24上調(diào)后,BCL2L11的蛋白水平下降;miR-24下調(diào)后BCL2L11的蛋白水平升高。RT-q PCR結(jié)果顯示其m RNA水平無明顯變化。(3)功能學(xué)實(shí)驗(yàn)證實(shí)miR-24可促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖和遷移,抑制其凋亡。(4)在SGC7901細(xì)胞中同時過表達(dá)BCL2L11及miR-24,BCL2L11過表達(dá)可以部分削弱miR-24促進(jìn)增殖的能力。(5)轉(zhuǎn)染si RNA可顯著抑制SGC7901細(xì)胞中BCL2L11的表達(dá)。BCL2L11下調(diào)后,細(xì)胞增殖加快,凋亡減少。3.體內(nèi)實(shí)驗(yàn):miR-24過表達(dá)組的腫瘤生長較快,并且其BCL2L11蛋白表達(dá)水平明顯下降,但m RNA水平無明顯變化。Mi R-24可以通過抑制BCL2L11的表達(dá)抑制體內(nèi)腫瘤生長。研究結(jié)論:胃癌組織中miR-24高表達(dá),BCL2L11低表達(dá)。體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)均證實(shí)在胃癌中,miR-24可以通過抑制BCL2L11表達(dá)促進(jìn)腫瘤的生長。
【關(guān)鍵詞】：胃癌 miR-24 BCL2L11 增殖 凋亡
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號說明10-11
• 前言11-16
• 研究現(xiàn)狀、成果11-15
• 研究目的、方法15-16
• 對象和方法16-34
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料16-17
• 1.1.1 組織標(biāo)本16
• 1.1.2 細(xì)胞系16
• 1.1.3 裸鼠16
• 1.1.4 常規(guī)試劑和耗材16-17
• 1.1.5 實(shí)驗(yàn)所需主要抗體17
• 1.2 各實(shí)驗(yàn)所需主要試劑及配置17-20
• 1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)所需試劑17-18
• 1.2.2 Western Blot所需主要試劑18-19
• 1.2.3 RT-qPCR所需主要試劑19
• 1.2.4 熒光素酶報告基因?qū)嶒?yàn)所需主要試劑19
• 1.2.5 細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)所需主要試劑19-20
• 1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器20
• 1.4 主要實(shí)驗(yàn)方法20-32
• 1.4.1 細(xì)胞培養(yǎng)20-23
• 1.4.2 蛋白提取23
• 1.4.3 總RNA提取23-24
• 1.4.4 Western blot24-26
• 1.4.5 mRNA的定量檢測26-27
• 1.4.6 miRNA的定量檢測27-29
• 1.4.7 熒光素酶報告基因?qū)嶒?yàn)29
• 1.4.8 功能學(xué)實(shí)驗(yàn)29-32
• 1.4.9 小鼠成瘤實(shí)驗(yàn)32
• 1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析32-34
• 結(jié)果34-48
• 2.1 胃癌組織中BCL2L11低表達(dá)，，miR-24高表達(dá)34-36
• 2.1.1 胃癌組織中BCL2L11的表達(dá)分析34-35
• 2.1.2 靶點(diǎn)預(yù)測35-36
• 2.1.3 胃癌組織中miR-24的表達(dá)分析36
• 2.2 熒光素酶報告基因?qū)嶒?yàn)證實(shí)BCL2L11是miR-24的靶基因36-38
• 2.3 miR-24參與BCL2L11的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控38-39
• 2.4 miR-24對胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響39-42
• 2.4.1 miR-24對胃癌細(xì)胞增殖能力的影響40
• 2.4.2 miR-24對胃癌細(xì)胞遷移能力的影響40-41
• 2.4.3 miR-24對胃癌細(xì)胞凋亡的影響41-42
• 2.5 BCL2L11過表達(dá)可以部分削弱miR-24促增殖的能力42-44
• 2.6 BCL2L11下調(diào)可促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖，抑制其凋亡44-45
• 2.7 miR24BCL2L11信號通路對體內(nèi)腫瘤生長的影響45-48
• 2.7.1 miR-24過表達(dá)促進(jìn)體內(nèi)腫瘤生長45-46
• 2.7.2 miR-24可通過抑制BCL2L11的表達(dá)促進(jìn)腫瘤生長46-48
• 討論48-53
• 結(jié)論53-55
• 參考文獻(xiàn)55-64
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明64-65
• 綜述 miRNA在胃癌中的研究進(jìn)展65-77
• 綜述參考文獻(xiàn)71-77
• 致謝77-78
• 個人簡歷78

本文編號：636859