本文關(guān)鍵詞：PTEN及其假基因PTENP1在胃癌組織及細(xì)胞中的表達(dá)及臨床意義

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【摘要】：目的:1.檢測36對(duì)胃癌組織和相應(yīng)癌旁正常組織中PTEN和PTENP1的表達(dá)水平,并分析PTEN和PTENP1表達(dá)水平之間的差異和相互關(guān)系;2.分析PTEN和PTENP1與患者臨床病理特征的關(guān)系;3.構(gòu)建質(zhì)粒,采用慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)建立過表達(dá)PTENP1的胃癌細(xì)胞系,為深入研究PTEN及PTENP1在胃癌中的作用機(jī)制奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。材料與方法:1.收集天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院2014年10月-2015年1月期間手術(shù)的36例胃癌患者的腫瘤組織及癌旁正常組織標(biāo)本(所有患者均為初治患者)。本課題的研究目的及方法已詳盡告知患者,并通過天津醫(yī)科大學(xué)倫理委員會(huì)審核。研究內(nèi)容如下:(1)詳盡統(tǒng)計(jì)和分析所有患者臨床病理特征。(2)提取上述組織的RNA,通過Realtime-PCR檢測PTEN和PTENP1的表達(dá)情況。(3)提取上述組織的總蛋白,通過western blot檢測PTEN蛋白的表達(dá)情況。(4)分析胃癌組織中PTEN和PTENP1表達(dá)水平的相關(guān)性。(5)分析PTEN和PTENP1的表達(dá)水平與患者臨床病理特征的關(guān)系。P值0.05即為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。所有數(shù)據(jù)均選用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。2.構(gòu)建過表達(dá)PTENP1的慢病毒質(zhì)粒,應(yīng)用此慢病毒質(zhì)粒和包裝質(zhì)粒,經(jīng)轉(zhuǎn)染試劑LipofectamineTM2000包裝293T細(xì)胞,合成具有穩(wěn)定過表達(dá)PTENP1基因的慢病毒顆粒,用這種慢病毒顆粒分別感染MGC-803和MKN-45細(xì)胞,構(gòu)建穩(wěn)定過表達(dá)PTENP1的細(xì)胞株模型。(2)利用Realtime-PCR檢測篩選后細(xì)胞中PTENP1 m RNA的表達(dá)水平及其對(duì)PTEN的調(diào)控作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:1.胃癌組織中PTEN和PTENP1的m RNA水平及PTEN的蛋白水平均顯著低于癌旁正常胃黏膜組織;2.在胃癌組織中,PTEN和PTENP1的表達(dá)水平具有正相關(guān)性,相關(guān)系數(shù)為rs=0.7889;P0.05。3.PTEN和PTENP1的表達(dá)水平與患者性別、年齡、是否有腫瘤家族史、吸煙飲酒史、組織學(xué)分級(jí)、分化程度、是否遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、腫瘤位置等因素?zé)o顯著相關(guān)性(P0.05);PTEN和PTENP1的表達(dá)與腫瘤大小(長徑是否≥5cm)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、侵犯深度和腫瘤TNM分期具有顯著相關(guān)性。大腫瘤體積組(長徑≥5cm)患者PTEN和PTENP1的表達(dá)水平顯著低于小腫瘤體積組(長徑5cm),P值分別為P=0.027,P=0.031;發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組患者的PTEN和PTENP1的表達(dá)水平顯著低于未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組,P值分別為P=0.018,P=0.032;侵犯深度越深,PTEN和PTENP1的表達(dá)水平越低,P值分別為P=0.008,P=0.001;TNM分期為Ⅰ、Ⅱ期的患者PTEN和PTENP1的表達(dá)水平顯著高于Ⅲ、Ⅳ期患者,P值分別為P=0.002,P=0.025。4.成功構(gòu)建過表達(dá)PTENP1的質(zhì)粒。慢病毒顆粒感染MGC-803和MKN-45細(xì)胞系,Realtime-PCR證實(shí)PTENP1的表達(dá)水平顯著增高,并且可以使其同源基因PTEN的m RNA表達(dá)水平增高。結(jié)論:1.PTEN和PTENP1在胃癌組織中的表達(dá)水平具有正相關(guān)性;2.PTEN和PTENP1在胃癌組織中的表達(dá)水平顯著低于癌旁正常組織;胃癌組織中PTEN和PTENP1的表達(dá)與腫瘤體積大小(長徑是否≥5cm)、是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤侵犯深度和TNM分期具有顯著相關(guān)性。PTEN和PTENP1可能成為胃癌診斷和治療的新靶點(diǎn)。3.在胃癌細(xì)胞系MGC-803和MKN-45中,假基因PTENP1對(duì)其同源基因PTEN在轉(zhuǎn)錄水平上具有調(diào)控作用,過表達(dá)PTENP1基因可以使PTEN基因的m RNA表達(dá)水平上調(diào)。
【關(guān)鍵詞】：PTEN PTENP1 胃癌 慢病毒
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號(hào)說明10-12
• 前言12-16
• 研究現(xiàn)狀、成果12-14
• 研究目的、方法14-16
• 一、PTEN和PTENP1在胃癌及癌旁組織中的表達(dá)和臨床意義16-31
• 1.1 對(duì)象和方法16-23
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象16
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器16-17
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)材料17-18
• 1.1.4 實(shí)驗(yàn)方法18-23
• 1.2 結(jié)果23-27
• 1.2.1 胃癌組織和癌旁組織中PTEN和PTENP1 mRNA的表達(dá)差異23-24
• 1.2.2 胃癌組織和癌旁正常組織中PTEN蛋白的表達(dá)差異24
• 1.2.3 PTEN和PTENP1 mRNA的表達(dá)水平與患者臨床病理學(xué)資料之間的關(guān)系24-27
• 1.3 討論27-30
• 1.4 小結(jié)30-31
• 二、胃癌細(xì)胞系中PTENP1對(duì)PTEN的調(diào)控作用的探索31-47
• 2.1 對(duì)象和方法31-42
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象31
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器31
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)材料31-33
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)方法33-42
• 2.2 結(jié)果42-43
• 2.2.1 重組PTENP1質(zhì)粒的構(gòu)建成功42
• 2.2.2 穩(wěn)定過表達(dá)PTENP1的胃癌MGC-803和MKN-45細(xì)胞株的建立42-43
• 2.2.3 PTNEP1過表達(dá)可以導(dǎo)致PTEN mRNA表達(dá)量升高43
• 2.3 討論43-46
• 2.4 小結(jié)46-47
• 結(jié)論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-56
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明56-57
• 附錄57-59
• 綜述 胃癌中的PTEN基因與其假基因PTENPl的作用及相互影響59-70
• 綜述參考文獻(xiàn)66-70
• 致謝70-71
• 個(gè)人簡歷71

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本文編號(hào)：633070