發(fā)布時(shí)間：2017-08-07 02:14

  本文關(guān)鍵詞：hDOT1L基因在急性白血病發(fā)病機(jī)制中的作用及其臨床意義

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【摘要】：目的:白血病的發(fā)生和發(fā)展與表觀遺傳修飾異常密切相關(guān),是細(xì)胞遺傳和表觀遺傳共同改變的結(jié)果。研究證實(shí),白血病細(xì)胞周期調(diào)節(jié)異常、增殖失控與細(xì)胞周期蛋白異常表達(dá)或缺失有關(guān),而凋亡受抑與促凋亡基因過(guò)甲基化和抗凋亡基因低甲基化息息相關(guān)。研究人員發(fā)現(xiàn)人類DOT1酶(h DOT1L)是一類新的組蛋白賴氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶,通過(guò)誘導(dǎo)組蛋白H3K79高甲基化活化急性髓系白血病(AML)中起關(guān)鍵作用的一套基因促使白血病的發(fā)生。本研究通過(guò)比較初治白血病患者和緩解后患者及復(fù)發(fā)患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞(bone marrow mononuclear cells,BMMNC)中h DOT1L基因及其相關(guān)分子的表達(dá)和H3K79組蛋白的甲基化水平,并檢測(cè)PI3K/AKT信號(hào)通路中關(guān)鍵分子的表達(dá)變化分析兩者之間的關(guān)系,探討h DOT1L在白血病發(fā)病機(jī)制中的作用和臨床意義,并分析其可能的作用機(jī)制,以期揭示白血病治療的新靶點(diǎn),為白血病的新藥研發(fā)及預(yù)后判斷提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。標(biāo)本采集:收集和提取健康志愿者、急性髓系白血病(AML)患者、急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)患者、AML及ALL復(fù)發(fā)患者(AL-relapse)及緩解者(AL-CR)的BMMNC,骨髓標(biāo)本均來(lái)自于2013年-2014年河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院血液科住院患者共82例。其中,AML組20例,ALL組20例,AL-relapse組22例(AML復(fù)發(fā)12例,ALL復(fù)發(fā)10例),AL-CR組共20例(其中AML-CR 10例,ALL-CR 10例),正常對(duì)照組健康志愿者20例。實(shí)驗(yàn)組82例患者中,男45例,女37例,年齡17-78歲,中位年齡47.5歲,對(duì)照組共20例,男8例,女12例,年齡23-68歲,中位年齡45.5歲。所有患者均經(jīng)過(guò)MICM即細(xì)胞形態(tài)學(xué)(Morphology,M)、免疫學(xué)(Immunology,I)、細(xì)胞遺傳學(xué)(Cytogenetics,C)和分子生物學(xué)(Molecular,M)診斷,符合2008年WHO急性白血病診斷標(biāo)準(zhǔn)。緩解患者均經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)方案一個(gè)療程化療達(dá)完全緩解。所有骨髓標(biāo)本提取單個(gè)核細(xì)胞,并于-80℃冰箱凍存。方法:1 Realtime-PCR(RT-PCR)檢測(cè)各組BMMNC內(nèi)h DOT1L、HOXA9、HOXA10、MLL-AF10(MLLT10)的m RNA表達(dá)水平。2 Western Blot法檢測(cè)各組h DOT1L蛋白的表達(dá)及H3K79甲基化水平。3 Western Blot法檢測(cè)各組PI3K、AKT、CDK4及Cyclin D1蛋白的表達(dá)水平。4分析細(xì)胞周期與h DOT1L及PI3K/AKT信號(hào)通路的相關(guān)性,探討h DOT1L信號(hào)通路與PI3K/AKT信號(hào)通路之間的內(nèi)在聯(lián)系。5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析數(shù)據(jù)。結(jié)果:1 h DOT1L、HOXA9、HOXA10、MLL-AF10基因的m RNA表達(dá)水平。RT-PCR結(jié)果顯示,所有患者BMMNC中h DOT1L、HOXA9、HOXA10、MLL-AF10基因在m RNA水平均有表達(dá),AML組、ALL組及AL-relapse組BMMNC中上述基因m RNA水平明顯高于正常對(duì)照組和AL-CR,且差異顯著(P0.01);AML組、ALL組及AL-ralapse組組間比較及AL-CR組與正常對(duì)照組比較均無(wú)明顯差異(P0.05)。2 h DOT1L的蛋白的表達(dá)及H3K79甲基化水平Western Blot檢測(cè)結(jié)果表明,AML組和ALL組及AL復(fù)發(fā)組BMMNC中h DOT1L和H3K79-me2(雙甲基)蛋白表達(dá)水平顯著高于正常對(duì)照組和AL緩解組,并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);AML組和ALL組及AL復(fù)發(fā)組之間比較及AL緩解組與正常對(duì)照組比較上述蛋白表達(dá)水平均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。3 PI3K、AKT、CDK4、Cyclin D1蛋白的表達(dá)水平Western Blot檢測(cè)結(jié)果提示,AML組、ALL組及AL-relapse組患者BMMNC中PI3K、AKT蛋白表達(dá)水平較正常對(duì)照組和AL-CR組明顯升高(P0.01);CDK4、Cyclin D1蛋白在AML組、ALL組和AL-relapse組表達(dá)水平顯著高于正常對(duì)照組和AL-CR組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。AML組、ALL組和AL-relapse之間比較及AL-CR組與正常對(duì)照組比較上述蛋白表達(dá)水平均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:1 h DOT1L是一種新型的組蛋白賴氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶,它通過(guò)提高H3K79的甲基化水平并誘導(dǎo)其下游HOXA9、HOXA10、MLL-AF10基因的表達(dá)參與了急性白血病的發(fā)病機(jī)制,并與疾病的預(yù)后息息相關(guān);阻斷此通路可能是治療白血病的一個(gè)新思路。2 PI3K/AKT信號(hào)通路在白血病發(fā)病及預(yù)后中發(fā)揮著重要作用,該通路中與細(xì)胞增殖、凋亡和細(xì)胞周期分布相關(guān)的四種關(guān)鍵分子PI3K、AKT、CDK4、Cyclin D1與h DOT1L信號(hào)通路之間的HOXA9、HOXA10、MLL-AF10基因的表達(dá)變化一致,提示它們之間可能存在一定聯(lián)系,但其內(nèi)在的相關(guān)性還需要進(jìn)一步深入研究。
【關(guān)鍵詞】：H3K79 hDOT1L基因 甲基化 急性白血病 DNA
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R733.71
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文縮寫10-11
• 前言11-12
• 材料與方法12-22
• 結(jié)果22-24
• 附圖24-26
• 附表26-28
• 討論28-30
• 結(jié)論30-31
• 參考文獻(xiàn)31-34
• 綜述 惡性血液病與DNA甲基化34-44
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 致謝44-45
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷45

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 杜婷婷;黃秋花;;組蛋白賴氨酸甲基化在表觀遺傳調(diào)控中的作用[J];遺傳;2007年04期

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本文編號(hào)：632413