本文關(guān)鍵詞：生物鐘基因Bmal1對(duì)口腔鱗癌細(xì)胞影響的初步研究

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【摘要】：口腔癌(oral cancer)指的是發(fā)生于口腔及其鄰近解剖部位的惡性腫瘤,約占全身惡性腫瘤的2%-3%,其發(fā)病率高,據(jù)統(tǒng)計(jì)在全球范圍約為4.7~32.2/10萬(wàn),其中90%為鱗狀細(xì)胞癌(oral squamous cancer cell,OSCC),位居世界常見(jiàn)癌癥的第六位。其主要的治療手段為手術(shù)以及放化療治療,雖然目前取得了較為肯定的進(jìn)展,但其患者的5年總生存率依舊徘徊在50%~60%。而且口腔癌的位置特殊,導(dǎo)致患者進(jìn)食,說(shuō)話,顏面部美觀等都受到極大的影響,生活質(zhì)量嚴(yán)重下降。生物體在睡眠/覺(jué)醒、進(jìn)食等行為以及各種生理、生化、代謝過(guò)程遵循著約24小時(shí)的周期性變化,稱(chēng)為晝夜節(jié)律(Circadian rhythms)。晝夜節(jié)律的紊亂會(huì)導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生,同時(shí)也發(fā)現(xiàn)一些腫瘤細(xì)胞中生物鐘相關(guān)基因表達(dá)異常。Bmal1作為生物鐘系統(tǒng)中重要的正反饋原件,位于該系統(tǒng)的上游,在維持晝夜節(jié)律中起著重要作用。近年來(lái)研究認(rèn)為Bmal1與腫瘤的發(fā)生發(fā)展存在著密切聯(lián)系,現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)Bmal與結(jié)腸癌,乳腺癌,血液淋巴瘤等的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后有重要作用,尚未見(jiàn)關(guān)于Bmal1與口腔鱗癌關(guān)系的研究報(bào)道,故本實(shí)驗(yàn)通過(guò)構(gòu)建Bmal1超表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染口腔鱗癌細(xì)胞SCC-15,構(gòu)建Bmal1超表達(dá)穩(wěn)定細(xì)胞株,觀察其對(duì)鱗癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響,以及對(duì)其他生物鐘相關(guān)因子的影響,為口腔鱗癌的靶向治療提供新的理念和思路。目的通過(guò)構(gòu)建Bmal1超表達(dá)載體,慢病毒轉(zhuǎn)染口腔鱗癌細(xì)胞SCC-15,構(gòu)建Bmal1超表達(dá)穩(wěn)定細(xì)胞株,觀察其對(duì)鱗癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響,以及超表達(dá)Bmal1對(duì)其下游基因,幾個(gè)重要的細(xì)胞增殖和凋亡基因表達(dá)的影響,為口腔鱗癌的靶向治療提供新的理念和思路。方法(1)培養(yǎng)口腔鱗癌細(xì)胞株SCC-15和CAL-27以及正常對(duì)照組Ha Cat細(xì)胞,半定量PCR以及Western蛋白印跡方法檢測(cè)Bmal1的表達(dá)量;(2)構(gòu)建Bmal1超表達(dá)載體,慢病毒轉(zhuǎn)染口腔鱗癌細(xì)胞SCC-15,設(shè)立SCC-15/vector空載體對(duì)照組和SCC-15/Lv-Bmal1實(shí)驗(yàn)組,培養(yǎng)72h,CCK-8檢測(cè),克隆形成實(shí)驗(yàn),檢測(cè)各組細(xì)胞的增長(zhǎng)速率。(3)培養(yǎng)對(duì)照組SCC-15/vector和實(shí)驗(yàn)組SCC-15/Lv-Bmal1細(xì)胞,處理后行流式細(xì)胞儀檢測(cè)其周期和凋亡。(4)實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time Polymerase chain reaction,RT-PCR)檢測(cè)超表達(dá)Bmal1對(duì)Bax,P53,Rb,cyclin B1和CDC2表達(dá)量的影響。結(jié)果(1)與對(duì)照組Ha Cat細(xì)胞相比,Bmal1在OSCC細(xì)胞(SCC-15和CAL-27)表達(dá)下降,特別是SCC-15(P0.01);(2)構(gòu)建SCC-15/Lv-Bmal1穩(wěn)定細(xì)胞株,通過(guò)CCK-8檢測(cè),SCC-15/lv-Bmal1組細(xì)胞增殖與SCC-15/vector組相比,明顯減少(P0.05)。SCC-15組和SCC-15/vector組各時(shí)間點(diǎn)在細(xì)胞增殖無(wú)顯著性差異。克隆形成實(shí)驗(yàn),SCC-15/lv-Bmal1組與對(duì)照組相比細(xì)胞克隆數(shù)減少約50%(P0.01)。(3)流式細(xì)胞儀檢測(cè),SCC-15/lv-Bmal1組細(xì)胞周期阻滯在G1/S檢驗(yàn)點(diǎn),與SCC-15/vector組相比,細(xì)胞積累在在G1/G0期(P0.05),S期細(xì)胞比例減少(P0.05),G2/M期細(xì)胞比例減少(P0.01)。細(xì)胞凋亡檢測(cè)表明,SCC-15/lv-Bmal1組細(xì)胞凋亡率明顯高于對(duì)照組(P0.01),分別為20.91±3.13%和6.92±1.15%。(4)通過(guò)q RT-PCR分析發(fā)現(xiàn),Bmal1超表達(dá)的SCC-15/lv-Bmal1組與對(duì)照組相比,促凋亡基因P53,Bax和Rb增加,促細(xì)胞增殖基因cyclin B1和CDC2減少。結(jié)論在口腔鱗癌細(xì)胞中,Bmal1呈低表達(dá)狀態(tài),Bmal1能抑制SCC-15細(xì)胞的生長(zhǎng),促進(jìn)細(xì)胞的凋亡,提示Bmal1在SCC-15中充當(dāng)抑癌基因的作用,為口腔鱗癌的靶向治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)以及新的理念和思路。
【關(guān)鍵詞】：Bmal1 口腔鱗癌 增殖 凋亡 超表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R739.85
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-14
• 1 材料與方法14-21
• 2 結(jié)果21-27
• 3 討論27-31
• 全文總結(jié)31-32
• 參考文獻(xiàn)32-36
• 附錄36-40
• 文獻(xiàn)綜述40-49
• 參考文獻(xiàn)45-49
• 致謝49-51
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文51

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1 萬(wàn)學(xué)勤,李宏鳴,龍敏,張炳團(tuán),劉愛(ài)平;雞新城疫病毒對(duì)人類(lèi)口腔鱗癌細(xì)胞的殺傷作用[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2004年04期

2 陳軍;趙建江;王治平;盤(pán)杰;黃宇華;;量子點(diǎn)對(duì)口腔鱗癌細(xì)胞活性的影響[J];廣東醫(yī)學(xué);2010年20期

3 王曉里;陳瑞梅;王植三;陳文磊;;口腔鱗癌細(xì)胞增殖特性的流式細(xì)胞光度分析[J];現(xiàn)代口腔醫(yī)學(xué)雜志;1989年01期

4 金曉明,李金榮,李雅馨,李祖兵;外源性轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1對(duì)口腔鱗癌細(xì)胞中相關(guān)基因表達(dá)的影響[J];實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志;2003年06期

5 孫毅;尚政軍;;內(nèi)皮前體細(xì)胞與口腔鱗癌細(xì)胞自發(fā)性融合的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國(guó)美容醫(yī)學(xué);2013年15期

6 申俊;柏景坪;王維倩;顧亞軍;;組蛋白去乙�；敢种苿┡c順鉑聯(lián)用激活線粒體信號(hào)通路誘導(dǎo)口腔鱗癌細(xì)胞的凋亡[J];醫(yī)學(xué)研究雜志;2011年02期

7 宿穎;葛麗華;苗聰聰;張敏;張辛燕;;三氧化二砷對(duì)口腔鱗癌細(xì)胞裸鼠移植瘤的抑制作用[J];北京口腔醫(yī)學(xué);2013年01期

8 黃曉君;葉茂昌;李容新;王來(lái)平;;姜黃素對(duì)口腔鱗癌細(xì)胞生長(zhǎng)增殖及相關(guān)蛋白影響的實(shí)驗(yàn)研究[J];口腔醫(yī)學(xué)研究;2007年02期

9 ;Possible Mechanism Responsible for Changes of β-dystroglycanin Oral Squamous Cell Carcinoma[J];口腔醫(yī)學(xué)研究;2006年01期

10 李德超;李善昌;關(guān)鍵;;口腔鱗癌細(xì)胞缺氧誘導(dǎo)因子表達(dá)水平與其對(duì)順鉑敏感性的研究[J];臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2007年11期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

1 龐寶興;金曉明;尚偉;;姜黃素對(duì)口腔鱗癌細(xì)胞的增殖抑制作用及相關(guān)機(jī)制研究[A];第八次全國(guó)口腔頜面—頭頸腫瘤會(huì)議論文匯編[C];2009年

2 張志光;張謙;何一青;陳詩(shī)書(shū);;細(xì)胞因子基因修飾人口腔鱗癌細(xì)胞的體外生物學(xué)行為[A];第一屆全國(guó)口腔頜面部腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年

3 何地;陳萬(wàn)濤;;藤黃酸對(duì)口腔鱗癌細(xì)胞體外作用的研究[A];第五次全國(guó)口腔頜面—頭頸腫瘤學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2006年

4 張壯;潘劍;李龍江;;高淋巴道轉(zhuǎn)移的口腔鱗癌細(xì)胞對(duì)淋巴管生成的影響[A];第五次全國(guó)口腔頜面—頭頸腫瘤學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2006年

5 羅清瓊;胡水清;陳福祥;;TLR3在口腔鱗癌細(xì)胞中作用的初步研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中國(guó)醫(yī)院協(xié)會(huì)臨床檢驗(yàn)管理專(zhuān)業(yè)委員會(huì)第六屆全國(guó)臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

6 阮敏;季彤;楊雯君;張陳平;;紫草素誘導(dǎo)口腔鱗癌細(xì)胞Tca-8113凋亡及相關(guān)機(jī)制的的研究[A];海峽兩岸2008口腔癌診治與修復(fù)重建新進(jìn)展研討會(huì)論文集[C];2008年

7 李春陽(yáng);程斌;洪筠;楊靈瀾;葉萍;馮崇錦;;cdc25A-Fas嵌合基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定[A];中華口腔醫(yī)學(xué)會(huì)第六屆全國(guó)口腔黏膜病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2004年

8 張敏;張辛燕;;三氧化二砷和放療結(jié)合對(duì)口腔癌治療作用的體外研究[A];第七屆全國(guó)口腔黏膜病暨第五屆口腔中西醫(yī)結(jié)合大會(huì)論文匯編[C];2008年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 王莉莉;microRNA-188作用于靶基因SIX1負(fù)調(diào)控ERK信號(hào)通路抑制口腔鱗癌細(xì)胞的增殖侵襲[D];中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2016年

2 柴娟;P12~(CDK2-AP1)與CD82相互作用對(duì)口腔鱗癌細(xì)胞OSCC-15及裸鼠移植瘤生長(zhǎng)作用的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2016年

3 申俊;組蛋白去乙酰化酶抑制劑與順鉑聯(lián)用對(duì)口腔鱗癌細(xì)胞作用的體外研究[D];四川大學(xué);2007年

4 高揚(yáng);RNA干涉抑制STAT3基因誘導(dǎo)口腔鱗癌細(xì)胞發(fā)生凋亡的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究[D];吉林大學(xué);2011年

5 張文超;構(gòu)建人CXCL12-KDEL融合基因抑制CXCL12-CXCR4生物軸對(duì)口腔鱗癌細(xì)胞趨化轉(zhuǎn)移作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2008年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 高敬;生物鐘基因Bmal1對(duì)口腔鱗癌細(xì)胞影響的初步研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

2 龐寶興;姜黃素對(duì)人口腔鱗癌細(xì)胞的增殖抑制作用及機(jī)制研究[D];青島大學(xué);2010年

3 黃曉君;姜黃素對(duì)口腔鱗癌細(xì)胞生長(zhǎng)增殖及相關(guān)蛋白影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2007年

4 李棟;Fat-1對(duì)人口腔鱗癌細(xì)胞影響的研究[D];吉林大學(xué);2011年

5 陳軍;利用量子點(diǎn)探針對(duì)口腔鱗癌細(xì)胞中多種特定蛋白進(jìn)行實(shí)時(shí)空間動(dòng)態(tài)示蹤的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2010年

6 石芳瓊;MICA基因修飾的口腔鱗癌細(xì)胞疫苗誘導(dǎo)抗腫瘤免疫應(yīng)答的實(shí)驗(yàn)研究[D];中南大學(xué);2011年

7 盤(pán)杰;量子點(diǎn)熒光技術(shù)標(biāo)記口腔鱗癌細(xì)胞中bcl-2、bax蛋白的應(yīng)用研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2009年

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