本文關(guān)鍵詞：EPA抑制上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化介導(dǎo)的肝癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移分子機(jī)制研究

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【摘要】：研究背景肝細(xì)胞肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是一種惡性度非常高的實(shí)體腫瘤,侵襲轉(zhuǎn)移是其惡化發(fā)展的重要生物學(xué)特征,也是導(dǎo)致肝癌患者死亡的最主要原因。腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移是一個(gè)復(fù)雜的多種因素、多機(jī)制參與的共同調(diào)控進(jìn)程,現(xiàn)已證實(shí)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial mesenchymal transition,EMT)是影響肝癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移進(jìn)程的重要分子機(jī)制之一。端粒酶作為影響肝癌發(fā)展進(jìn)程的關(guān)鍵性機(jī)制酶,它的活性直接受端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(Human telomerase reverse transcriptase,h TERT)調(diào)控,h TERT作為維持端粒結(jié)構(gòu)及功能的關(guān)鍵性分子,最近研究發(fā)現(xiàn)其與腫瘤細(xì)胞EMT的發(fā)展進(jìn)程密切相關(guān)。二十碳五烯酸(EPA)是n-3多不飽和脂肪酸的一員,前期研究發(fā)現(xiàn)其能夠抑制多種惡性腫瘤的進(jìn)展,但現(xiàn)今對其抗癌效用的作用機(jī)制還不明確,尤其是EPA對肝癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響目前還未見報(bào)道。研究目的1.明確EPA對SMMC-7721肝癌細(xì)胞增殖及凋亡的影響;2.EPA能否逆轉(zhuǎn)TGF-β1誘導(dǎo)的SMMC-7721肝癌細(xì)胞EMT;3.EPA能否影響EMT介導(dǎo)的SMMC-7721肝癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移;4.探討h TERT在EPA影響EMT進(jìn)程中的作用。第一部分EPA對SMMC-7721肝癌細(xì)胞增殖及凋亡的影響不同濃度EPA(0、25、50、100、200、300、400μM)與TGF-β1(10 ng/ml)共同干預(yù)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞,檢測SMMC-7721肝癌細(xì)胞增殖與凋亡變化。研究方法1.倒置顯微鏡下觀察SMMC-7721肝癌細(xì)胞生長;2.MTT檢測SMMC-7721肝癌細(xì)胞增殖率;3.流式細(xì)胞術(shù)檢測SMMC-7721肝癌細(xì)胞凋亡;4.Western檢測SMMC-7721肝癌細(xì)胞Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.顯微鏡下初步觀察到EPA對SMMC-7721肝癌細(xì)胞具有生長抑制效果;2.MTT檢測結(jié)果證實(shí)EPA干預(yù)后SMMC-7721肝癌細(xì)胞增殖率逐漸降低,且呈現(xiàn)出時(shí)間濃度依賴性;3.流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示EPA干預(yù)48 h后SMMC-7721肝癌細(xì)胞出現(xiàn)凋亡,且凋亡率與EPA濃度呈正相關(guān);4.Western結(jié)果表明EPA干預(yù)48 h后SMMC-7721肝癌細(xì)胞促凋亡蛋白Bax表達(dá)上調(diào)而能夠下調(diào)抗凋亡Bcl-2蛋白的表達(dá)。結(jié)論EPA能夠抑制SMMC-7721肝癌細(xì)胞增殖并促使其凋亡,且抑制效果具有時(shí)間濃度依賴性。第二部分EPA對TGF-β1誘導(dǎo)的SMMC-7721肝癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響10 ng/ml TGF-β1刺激SMMC-7721肝癌細(xì)胞,誘導(dǎo)SMMC-7721肝癌細(xì)胞發(fā)生EMT。用50μM、200μM EPA干預(yù)TGF-β1誘導(dǎo)的SMMC-7721肝癌細(xì)胞檢測其侵襲轉(zhuǎn)移能力的變化。研究方法1.倒置顯微鏡下觀察人肝癌SMMC-7721細(xì)胞形態(tài)的改變;2.Western檢測SMMC-7721肝癌細(xì)胞E-cadherin、N-cadherin蛋白表達(dá);3.劃痕實(shí)驗(yàn)檢測SMMC-7721肝癌細(xì)胞遷移率;4.Transwell檢測SMMC-7721肝癌細(xì)胞侵襲率;5.ELISA檢測SMMC-7721肝癌細(xì)胞MMP-2、MMP-9表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.顯微鏡下初步觀察到EPA能夠抑制TGF-β1誘導(dǎo)的SMMC-7721肝癌細(xì)胞EMT;2.Western結(jié)果驗(yàn)證了EPA能夠逆轉(zhuǎn)TGF-β1誘導(dǎo)的SMMC-7721肝癌細(xì)胞EMT;3.劃痕實(shí)驗(yàn)證實(shí)EPA能夠明顯降低TGF-β1誘導(dǎo)的SMMC-7721肝癌細(xì)胞的遷移能力,且抑制效果存在時(shí)間濃度依賴;4.Transwell實(shí)驗(yàn)證實(shí)EPA能夠明顯降低TGF-β1誘導(dǎo)的SMMC-7721肝癌細(xì)胞的侵襲能力,且抑制效果也存在時(shí)間濃度依賴;5.ELISA檢測結(jié)果表明EPA能夠抑制TGF-β1誘導(dǎo)的SMMC-7721肝癌細(xì)胞分泌基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2和MMP-9。結(jié)論10 ng/ml TGF-β1能夠誘導(dǎo)SMMC-7721肝癌細(xì)胞發(fā)生EMT。EPA可以逆轉(zhuǎn)TGF-β1介導(dǎo)的EMT,并抑制SMMC-7721肝癌細(xì)胞MMP-2和MMP-9的分泌從而降低其侵襲轉(zhuǎn)移能力。第三部分EPA對TGF-β1誘導(dǎo)的SMMC-7721肝癌細(xì)胞端粒酶活性的影響50μM、200μM EPA作用于TGF-β1誘導(dǎo)的SMMC-7721肝癌細(xì)胞,檢測SMMC-7721肝癌細(xì)胞端粒酶的活性及端粒酶調(diào)控蛋白h TERT的表達(dá)。研究方法1.ELISA檢測人肝癌SMMC-7721細(xì)胞端粒酶活性;2.Western檢測SMMC-7721肝癌細(xì)胞h TERT蛋白表達(dá);3.Real-time PCR檢測SMMC-7721肝癌細(xì)胞h TERT m RNA表達(dá);4.細(xì)胞免疫熒光法觀察SMMC-7721肝癌細(xì)胞h TERT熒光強(qiáng)度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.EPA能夠抑制TGF-β1誘導(dǎo)的SMMC-7721肝癌細(xì)胞的端粒酶活性,且抑制效果具有時(shí)間濃度依賴性;2.EPA能夠明顯降低TGF-β1誘導(dǎo)的SMMC-7721肝癌細(xì)胞h TERT蛋白表達(dá);3.EPA能夠明顯降低TGF-β1誘導(dǎo)的SMMC-7721肝癌細(xì)胞h TERT m RNA表達(dá);4.細(xì)胞免疫熒光結(jié)果顯示EPA能夠降低TGF-β1誘導(dǎo)的SMMC-7721肝癌細(xì)胞h TERT熒光強(qiáng)度。結(jié)論EPA能夠抑制TGF-β1誘導(dǎo)的SMMC-7721肝癌細(xì)胞hTERT蛋白及其mRNA的表達(dá),進(jìn)而降低SMMC-7721肝癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移。h TERT可能是EPA發(fā)揮其抗癌效用并抑制肝癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵作用靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：EPA 轉(zhuǎn)化生長因子-β1 肝細(xì)胞肝癌 侵襲轉(zhuǎn)移 hTERT
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 縮略語表4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 前言12-13
• 文獻(xiàn)回顧13-26
• 第一部分 EPA對SMMC-7721肝癌細(xì)胞增殖及凋亡的影響26-38
• 1 材料26-29
• 2 方法29-33
• 3 結(jié)果33-36
• 4 討論36-38
• 第二部分 EPA對TGF-β1 誘導(dǎo)SMMC-7721肝癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響38-48
• 1 材料38-39
• 2 方法39-42
• 3 結(jié)果42-46
• 4 討論46-48
• 第三部分 EPA對TGF-β1 誘導(dǎo)SMMC-7721肝癌細(xì)胞端粒酶活性的影響48-56
• 1 材料48-49
• 2 方法49-52
• 3 結(jié)果52-55
• 4 討論55-56
• 小結(jié)56-57
• 參考文獻(xiàn)57-66
• 個(gè)人簡歷和研究成果66-67
• 致謝67

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1 巨邦律,方馳華;納米技術(shù)在肝癌外科中的應(yīng)用前景[J];外科理論與實(shí)踐;2004年04期

2 沈衛(wèi)東,黃介飛;肝癌特異性GGT診斷肝癌的研究進(jìn)展[J];世界華人消化雜志;2005年09期

3 張立潔;楊春;;化學(xué)性藥物誘發(fā)肝癌模型的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)研究雜志;2009年06期

4 薛慧婷;黃曉丹;季國忠;;血管內(nèi)皮生長因子在肝癌診治中的作用[J];醫(yī)學(xué)綜述;2012年16期

5 潘赫男;姚運(yùn)平;;動(dòng)物肝癌模型研究現(xiàn)狀[J];傳染病信息;1995年04期

6 鄭青平;倪秉強(qiáng);;血管內(nèi)皮生長因子與肝癌[J];醫(yī)學(xué)綜述;2009年04期

7 王剛;連忠輝;田文洪;董小巖;尉遲捷;吳小兵;;建立分泌型熒光素酶基因標(biāo)記的原位肝癌模型及用于干擾素β基因治療評價(jià)[J];生物工程學(xué)報(bào);2012年10期

8 遲秀婷;沈加林;;肝癌TACE治療效果的影像學(xué)評估[J];介入放射學(xué)雜志;2013年08期

9 張靚;王光明;潘云;杜偉;;實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肝癌模型的建立[J];醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐;2013年16期

10 姚登福,徐克成,孟憲鏞;肝癌γ-谷氨酰移換酶的研究進(jìn)展[J];臨床檢驗(yàn)雜志;1991年03期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 史衛(wèi)衛(wèi);劉秀筠;張秀敏;何琪楊;;白藜蘆醇增強(qiáng)吉西他濱抗肝癌活性的機(jī)制[A];2009醫(yī)學(xué)前沿論壇暨第十一屆全國腫瘤藥理與化療學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

2 鄔雄飛;任進(jìn);戚新明;;短期大鼠致肝癌模型肝臟線粒體損傷的研究[A];2007年全國藥物毒理學(xué)會(huì)議論文集[C];2007年

3 徐紹斌;全顯躍;孫希杰;;兔VX2種植型肝癌模型動(dòng)態(tài)磁共振張量成像的量化研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十三屆全國放射學(xué)大會(huì)論文匯編（下冊）[C];2006年

4 董鳳林;查月琴;劉哲嬰;董彥;朱利霞;王阿軍;李智;肖榮;;超聲引導(dǎo)下建立兔VX2肝癌模型的實(shí)驗(yàn)研究[A];第二屆長三角超聲醫(yī)學(xué)論壇暨2009年浙江省超聲醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

5 賈洪順;全顯躍;孫濤;;兔VX2肝癌MRI征象與病理對照研究[A];全國醫(yī)學(xué)影像技術(shù)學(xué)術(shù)會(huì)議（CMIT-2004）論文匯編[C];2004年

6 陳晟;鄧鋼;牛煥章;何仕誠;方文;郭金和;朱光宇;余輝;李國昭;滕皋軍;;兔VX2肝癌模型的經(jīng)股動(dòng)脈插管技術(shù)探討及對肝腎功能的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十三屆全國放射學(xué)大會(huì)論文匯編（下冊）[C];2006年

7 黃智銘;陳旭艷;王劍虹;陳周峰;吳金明;吳建勝;陳向榮;蔡勇;;CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在肝癌免疫中的研究[A];首屆浙江省消化病學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2008年

8 黃智銘;陳旭艷;;CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在肝癌免疫中的研究[A];2008年浙江省內(nèi)科學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2008年

9 羅仕華;鄭傳勝;馮敢生;;重組人P53腺病毒基因經(jīng)介入方法治療肝癌的的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究[A];第十一次全國中西醫(yī)結(jié)合影像學(xué)術(shù)研討會(huì)暨全國中西醫(yī)結(jié)合影像學(xué)研究進(jìn)展學(xué)習(xí)班資料匯編[C];2010年

10 張玄;鄭翔;何凡;陳知水;;移植肝肝癌中IL-17A的表達(dá)及意義的研究[A];2012中國器官移植大會(huì)論文匯編[C];2012年

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1 戴麗昕;肝癌的克星[N];上�？萍紙�(bào);2007年

2 記者 錢海紅 鄭莉麗;我國肝癌肝炎研究國際領(lǐng)先[N];健康報(bào);2000年

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1 唐建華;三維肝癌類組織體模型建立及肺侵襲關(guān)聯(lián)蛋白篩查[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

2 趙蔭農(nóng);消融聯(lián)合瘤周注射免疫佐劑誘導(dǎo)小鼠抗肝癌主動(dòng)免疫效應(yīng)系列研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2015年

3 王寧;肝癌介入治療與肝癌多藥耐藥實(shí)驗(yàn)研究[D];吉林大學(xué);2005年

4 謝萌;基于介孔二氧化硅的控釋靶向給藥系統(tǒng)的構(gòu)建及對肝癌的藥效學(xué)研究[D];浙江大學(xué);2013年

5 孫希杰;兔VX2肝癌模型動(dòng)態(tài)量化磁共振擴(kuò)散、張量成像與病理的對照研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2005年

6 閻雄;抑癌基因maspin在肝癌中的作用及機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2006年

7 全顯躍;兔VX2肝癌模型動(dòng)態(tài)量化磁共振灌注成像與病理的對照研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2006年

8 莊鵬遠(yuǎn);干擾素α對肝癌生長和肺轉(zhuǎn)移影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

9 姜慧杰;肝癌多層螺旋CT灌注成像實(shí)驗(yàn)和臨床應(yīng)用研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2005年

10 廖成功;Basigin選擇性剪接體的鑒定及其在肝癌增殖和侵襲中的功能[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

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1 段崇玲;活體成像技術(shù)監(jiān)測肝癌Endgolin靶向放射性免疫治療的實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2015年

2 楊巧麗;諾帝—褐藻酸鈉微球治療兔VX2肝癌的實(shí)驗(yàn)研究[D];四川醫(yī)科大學(xué);2015年

3 張磊;EPA抑制上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化介導(dǎo)的肝癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移分子機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

4 王英新;活體觀測骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對肝癌微循環(huán)的作用及影響[D];大連醫(yī)科大學(xué);2012年

5 程寶興;碘-125組織間植入治療肝癌的實(shí)驗(yàn)研究[D];蘇州大學(xué);2001年

6 王為;基于磁共振圖像的肝癌識(shí)別技術(shù)研究[D];大連理工大學(xué);2008年

7 張志培;肝癌細(xì)胞在不同免疫力小鼠中生長特點(diǎn)與免疫細(xì)胞間的關(guān)系[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2001年

8 廖維榮;二氧化碳對肝癌細(xì)胞體外侵襲作用的研究[D];南昌大學(xué);2010年

9 李廣欣;肝癌放療靶區(qū)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2008年

10 朱求實(shí);RCAS1mRNA在肝癌表達(dá)的意義[D];華中科技大學(xué);2007年

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