本文關(guān)鍵詞：人源性肝癌組織凍存復(fù)蘇皮下移植模型的初步建立

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【摘要】：研究目的：將手術(shù)切除的新鮮人肝癌組織凍存復(fù)蘇后移植于免疫缺陷裸鼠皮下以建立人源性肝癌組織凍存復(fù)蘇皮下移植模型并初步評估其應(yīng)用價值。材料與方法：取5例原發(fā)性肝細胞癌患者手術(shù)切除的新鮮肝癌組織,分別標記為HCC01, HCC02, HCC03, HCC04, HCC05腫塊離體30min內(nèi)完成家屬標本過目和病理科取材后,各例肝癌組織用Hanks平衡液沖洗后按照不同凍存時間分別隨機分為A組(7d),B組(30d),C組(90d),D組(180d)四組。放入凍存管中標記凍存時間,液氮中保存?zhèn)溆糜诟伟﹥龃鎻?fù)蘇皮下移植模型的建立。按照各例肝癌組織凍存時間分組將凍存的人肝癌組織復(fù)蘇后移植于裸鼠皮下以建立人源性肝癌組織凍存復(fù)蘇皮下移植模型。5例原代人肝癌組織和各組皮下移植瘤常規(guī)浸泡于福爾馬林、中性甲醛溶液中固定,進行石蠟包埋切片、HE染色用于病理學(xué)形態(tài)觀察,免疫組化測定肝細胞抗原(Hep Par 1)、甲胎蛋白(a-fetoprotein,AFP)、CD34的表達。觀察記錄A組(7d),B組(30d),C組(90d),D組(180d)復(fù)蘇后裸鼠皮下移植的成瘤率、生長速度、瘤體體積,通過對比各組皮下移植瘤的大體觀形態(tài)、鏡下病理組織特點、免疫組化Hep Par 1、AFP、CD34的表達,以及對比同種肝癌組織各組皮下移植瘤與原代肝癌的微血管密度(microvascular decompression,MVD)計數(shù)對人源性肝癌組織凍存復(fù)蘇皮下移植瘤模型進行初步的評價。結(jié)果：5例手術(shù)切除的原發(fā)性肝癌組織,術(shù)后經(jīng)病理確診為原發(fā)性肝細胞癌。各例肝癌的A組(7d),B組(30d),C組(90d),D組(180d)凍存的肝癌組織經(jīng)復(fù)蘇后共移植至60只雄性裸鼠皮下,其中51只可見肉眼皮下成瘤,總成瘤率達85.0%。4組瘤體生長速度基本相同(P=0.9540.05),最終成瘤體積A組(867.24±29.81),B組(889.30±13.88),C組(862.10±29.41),D組(856.30±25.25)均無明顯差異,但D組(180d)較A組(7d)裸鼠皮下瘤體的生長潛伏期長。人源性肝癌組織凍存復(fù)蘇皮下移植瘤體在裸鼠體內(nèi)可以保持穩(wěn)定生長,未出現(xiàn)成瘤后自行消退。4組肝癌凍存復(fù)蘇裸鼠皮下移植瘤HE染色均示腫瘤呈癌巢狀分布、核質(zhì)比例失調(diào),細胞核明顯異形改變,免疫組化染色Hep Par1、AFP、CD34呈陽性,微血管密度較原代肝癌組織無差異。各組移植瘤鏡下病理組織形態(tài)、免疫組化結(jié)果均能與人肝癌組織生物學(xué)特性保持一致。結(jié)論：成功建立了人源性肝癌組織凍存復(fù)蘇裸鼠皮下移植模型,使用低溫凍存技術(shù)保存的人肝癌組織,經(jīng)復(fù)蘇后能夠成功建立人肝癌裸鼠皮下荷瘤模型。不同的凍存時間對皮下移植瘤生物學(xué)特性無明顯影響,提示了肝癌組織低溫凍存的可行性和人肝癌組織凍存復(fù)蘇皮下移植模型的初步建立,也為臨床肝癌組織保存、肝癌組織標本庫的建立提供了應(yīng)用價值。
【關(guān)鍵詞】：肝癌 異種移植 動物模型
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 本文主要英漢縮略名詞對照表11-12
• 前言12-15
• 實驗方案流程圖15-16
• 1. 材料和方法16-22
• 1.1 實驗動物16
• 1.2 實驗材料16-17
• 1.3 肝癌組織的凍存17-18
• 1.4 凍存肝癌組織復(fù)蘇18
• 1.5 人源性肝癌凍存復(fù)蘇皮下移植模型的建立18-20
• 1.6 HE染色20
• 1.7 Hep Par 1、AFP、CD34蛋白水平的表達20-21
• 1.8 結(jié)果的判定21
• 1.9 統(tǒng)計學(xué)方法21-22
• 2. 結(jié)果22-29
• 2.1 一般情況及大體觀察22
• 2.2 裸鼠皮下成瘤率22
• 2.3 皮下移植瘤生長情況22-24
• 2.4 裸鼠肝癌皮下移植瘤大體觀察24
• 2.5 HE染色病理結(jié)果24-25
• 2.6 Hep Par 1、AFP、CD34的表達及血管密度MVD的測定25-29
• 3. 討論29-33
• 4. 結(jié)論33-34
• 參考文獻34-38
• 綜述38-46
• 參考文獻43-46
• 攻讀學(xué)位期間的科研成果46-47
• 致謝47

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本文編號：621872