發(fā)布時(shí)間：2017-08-02 19:41

  本文關(guān)鍵詞：瘦素及其受體在人乳頭狀甲狀腺癌K1細(xì)胞中的表達(dá)及其作用的研究

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【摘要】：目的探討不同濃度的瘦素對(duì)人乳頭狀甲狀腺癌K1細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力。應(yīng)用O b R基因小分子干擾RNA(a small interfering RNA,si RNA)技術(shù),si RNA沉默瘦素受體(O b R)基因后研究對(duì)人乳頭狀甲狀腺癌K1細(xì)胞Ob R基因在m RNA水平、蛋白水平上的表達(dá)情況與O b R基因沉默后對(duì)人乳頭狀甲狀腺癌K1細(xì)胞的增殖和侵襲的影響,為甲狀腺癌的臨床研究及藥物治療提供理論依據(jù)。方法1,分別用0 ng/ml(空白對(duì)照組)、10 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml和125 ng/ml,5組不同濃度的瘦素處理人乳頭狀甲狀腺癌K1細(xì)胞,MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度瘦素處理K1細(xì)胞后細(xì)胞的增殖能力、劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)K1細(xì)胞遷移能力、Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)K1細(xì)胞侵襲能力。2,使用帶有FAM熒光標(biāo)記的陰性對(duì)照si RNA優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件。根據(jù)最優(yōu)轉(zhuǎn)染條件將O b R si RNA通過(guò)脂質(zhì)載體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染入K1細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)設(shè)置空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組和O b R si RNA基因沉默組。將K1細(xì)胞接種于6孔板中瞬時(shí)轉(zhuǎn)染培養(yǎng)24小時(shí)和48小時(shí)后,實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)(Real-time PCR)和免疫印跡技術(shù)(Western Blotting)分別在m RNA水平和蛋白水平檢測(cè)Ob R si RNA是否有效抑制K1細(xì)胞內(nèi)靶基因的表達(dá);M TT實(shí)驗(yàn)研究Ob R基因沉默后K1細(xì)胞的增殖能力和細(xì)胞活性;Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)O b R基因沉默后K1細(xì)胞的侵襲能力。結(jié)果1 MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果顯示不同濃度的瘦素對(duì)K1細(xì)胞的增殖并沒(méi)有影響(P0.05);不同濃度的瘦素處理K1細(xì)胞24小時(shí)后劃痕實(shí)驗(yàn)遷移率分別為:40.2003%、47.3832%、59.9498%、68.7323%、79.3063%;48小時(shí)劃痕實(shí)驗(yàn)遷移率分別為:49.3978%、74.192%、86.7326%、87.7952%、90.0051%。Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,穿出的細(xì)胞數(shù)有依次增多的趨勢(shì)(P0.05)。2 si RNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染后,Real-time PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,沉默O b R基因在m RNA水平上表達(dá)降低;Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,沉默Ob R基因蛋白水平上有靶向抑制作用;R eal-time PCR與Western Blot實(shí)驗(yàn)中Ob R si RNA基因沉默組O b R基因表達(dá)量與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組相比表達(dá)量下降;MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:沉默O b R基因后對(duì)K1細(xì)胞的增殖沒(méi)有影響(P0.05);Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:Ob R基因沉默后K1細(xì)胞侵襲能力下降,穿過(guò)膜的細(xì)胞數(shù)量減少。結(jié)論瘦素及其受體不影響人乳頭狀甲狀腺癌K1細(xì)胞的增殖;K1細(xì)胞的遷移和侵襲能力表現(xiàn)出時(shí)間依賴(lài)性與濃度依賴(lài)性;R NAi技術(shù)沉默Ob R基因后在m RNA水平和蛋白水平上均起到靶向抑制作用;R NAi技術(shù)沉默Ob R基因后K1細(xì)胞的侵襲能力下降。
【關(guān)鍵詞】：人乳頭狀甲狀腺癌K1細(xì)胞 瘦素(Leptin) 瘦素受體(ObR) siRNA 基因沉默 細(xì)胞增殖 細(xì)胞遷移 細(xì)胞侵襲
【學(xué)位授予單位】：濟(jì)南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R736.1
【目錄】：

• 摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 主要符號(hào)表11-12
• 前言12-15
• 第一部分 瘦素對(duì)人乳頭狀甲狀腺癌K1細(xì)胞功能的影響15-26
• 1 材料15-18
• 2 方法18-23
• 3 結(jié)果23-26
• 第二部分 沉默OBR基因后對(duì)人乳頭狀甲狀腺癌K1細(xì)胞生物學(xué)行為的影響26-42
• 1 材料26-30
• 2 方法30-37
• 3 結(jié)果37-42
• 討論42-45
• 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-49
• 綜述49-57
• 參考文獻(xiàn)55-57
• 在校期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文57
• 在校期間參加的項(xiàng)目57-58
• 致謝58

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