本文關鍵詞：瘦素及其受體在人乳頭狀甲狀腺癌K1細胞中的表達及其作用的研究

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【摘要】：目的探討不同濃度的瘦素對人乳頭狀甲狀腺癌K1細胞的增殖、遷移和侵襲能力。應用O b R基因小分子干擾RNA(a small interfering RNA,si RNA)技術,si RNA沉默瘦素受體(O b R)基因后研究對人乳頭狀甲狀腺癌K1細胞Ob R基因在m RNA水平、蛋白水平上的表達情況與O b R基因沉默后對人乳頭狀甲狀腺癌K1細胞的增殖和侵襲的影響,為甲狀腺癌的臨床研究及藥物治療提供理論依據(jù)。方法1,分別用0 ng/ml(空白對照組)、10 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml和125 ng/ml,5組不同濃度的瘦素處理人乳頭狀甲狀腺癌K1細胞,MTT實驗檢測不同濃度瘦素處理K1細胞后細胞的增殖能力、劃痕實驗檢測K1細胞遷移能力、Transwell侵襲實驗檢測K1細胞侵襲能力。2,使用帶有FAM熒光標記的陰性對照si RNA優(yōu)化轉染條件。根據(jù)最優(yōu)轉染條件將O b R si RNA通過脂質載體轉染法轉染入K1細胞。實驗設置空白對照組、陰性對照組和O b R si RNA基因沉默組。將K1細胞接種于6孔板中瞬時轉染培養(yǎng)24小時和48小時后,實時熒光定量PCR技術(Real-time PCR)和免疫印跡技術(Western Blotting)分別在m RNA水平和蛋白水平檢測Ob R si RNA是否有效抑制K1細胞內靶基因的表達;M TT實驗研究Ob R基因沉默后K1細胞的增殖能力和細胞活性;Transwell侵襲實驗檢測O b R基因沉默后K1細胞的侵襲能力。結果1 MTT實驗檢測結果顯示不同濃度的瘦素對K1細胞的增殖并沒有影響(P0.05);不同濃度的瘦素處理K1細胞24小時后劃痕實驗遷移率分別為:40.2003%、47.3832%、59.9498%、68.7323%、79.3063%;48小時劃痕實驗遷移率分別為:49.3978%、74.192%、86.7326%、87.7952%、90.0051%。Transwell侵襲實驗結果顯示,穿出的細胞數(shù)有依次增多的趨勢(P0.05)。2 si RNA瞬時轉染后,Real-time PCR實驗結果顯示,沉默O b R基因在m RNA水平上表達降低;Western Blot實驗結果顯示,沉默Ob R基因蛋白水平上有靶向抑制作用;R eal-time PCR與Western Blot實驗中Ob R si RNA基因沉默組O b R基因表達量與空白對照組和陰性對照組相比表達量下降;MTT實驗結果顯示:沉默O b R基因后對K1細胞的增殖沒有影響(P0.05);Transwell侵襲實驗結果顯示:Ob R基因沉默后K1細胞侵襲能力下降,穿過膜的細胞數(shù)量減少。結論瘦素及其受體不影響人乳頭狀甲狀腺癌K1細胞的增殖;K1細胞的遷移和侵襲能力表現(xiàn)出時間依賴性與濃度依賴性;R NAi技術沉默Ob R基因后在m RNA水平和蛋白水平上均起到靶向抑制作用;R NAi技術沉默Ob R基因后K1細胞的侵襲能力下降。
【關鍵詞】：人乳頭狀甲狀腺癌K1細胞 瘦素(Leptin) 瘦素受體(ObR) siRNA 基因沉默 細胞增殖 細胞遷移 細胞侵襲
【學位授予單位】：濟南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R736.1
【目錄】：

• 摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 主要符號表11-12
• 前言12-15
• 第一部分 瘦素對人乳頭狀甲狀腺癌K1細胞功能的影響15-26
• 1 材料15-18
• 2 方法18-23
• 3 結果23-26
• 第二部分 沉默OBR基因后對人乳頭狀甲狀腺癌K1細胞生物學行為的影響26-42
• 1 材料26-30
• 2 方法30-37
• 3 結果37-42
• 討論42-45
• 結論45-46
• 參考文獻46-49
• 綜述49-57
• 參考文獻55-57
• 在校期間發(fā)表的學術論文57
• 在校期間參加的項目57-58
• 致謝58

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