本文關(guān)鍵詞：miR-145作用于靶基因PAK4調(diào)控結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制

  更多相關(guān)文章： 結(jié)直腸癌 mi R-145 PAK4 LIMK1 cofilin 增殖 遷移 侵襲

【摘要】：目的:本研究擬在體外細(xì)胞水平驗(yàn)證mi R-145作用的靶基因?yàn)镻AK4,明確mi R-145通過(guò)調(diào)控PAK4而影響腸癌細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲能力,進(jìn)一步探討mi R-145/PAK4對(duì)下游信號(hào)通路LIMK1/cofilin的調(diào)控。方法:1.通過(guò)螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)方法分析mi R-145與PAK4間的相互影響。2.構(gòu)建過(guò)表達(dá)mi R-145、沉默PAK4穩(wěn)定腸癌細(xì)胞株,利用MTT、Transwell、Transwell with matrigel方法檢測(cè)腸癌細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲能力改變。3.利用western blotting方法檢測(cè)mi R-145過(guò)表達(dá)和PAK4沉默后對(duì)下游LIMK1/cofilin信號(hào)通路蛋白的影響。結(jié)果:1.構(gòu)建野生型報(bào)告基因質(zhì)粒psi CHECK2-PAK4-WT和突變型報(bào)告基因質(zhì)粒psi CHECK2-PAK4-MUT,過(guò)表達(dá)mi R-145的質(zhì)粒p CDH-mi R-145和空白質(zhì)粒p CDH-V,將psi CHECK2-PAK4-WT或psi CHECK2-PAK4-MUT與p CDH-mi R-145或p CDH-V共轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞株,報(bào)告基因檢測(cè)結(jié)果顯示,mi R-145能抑制野生型報(bào)告基因psi CHECK2-PAK4-WT的螢光素酶活性,但對(duì)突變型報(bào)告基因psi CHECK2-PAK4-MUT螢光素酶活性無(wú)明顯影響。構(gòu)建p CDH-anti-mi R-145質(zhì)粒,將psi CHECK2-PAK4WT或psi CHECK2-PAK4-MUT與p CDH-anti-mi R-145或p CDH-V共轉(zhuǎn)染NCM460細(xì)胞株,報(bào)告基因檢測(cè)結(jié)果顯示,anti-mi R-145能上調(diào)野生型報(bào)告基因psi CHECK2-PAK4-WT的螢光素酶活性,但對(duì)突變型報(bào)告基因psi CHECK2-PAK4-MUT螢光素酶活性無(wú)明顯影響。2.構(gòu)建過(guò)表達(dá)mi R-145的SW1116穩(wěn)定細(xì)胞株和沉默PAK4的SW1116穩(wěn)定細(xì)胞株,利用MTT、Transwell、Transwell with matrigel方法檢測(cè)過(guò)表達(dá)mi R-145和沉默PAK4對(duì)腸癌細(xì)胞SW1116增殖、遷移、侵襲能力的影響,結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,過(guò)表達(dá)mi R-145能抑制腸癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力,沉默PAK4同樣也能抑制腸癌細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲。3.利用western blotting方法分析,發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)mi R-145后LIMK1和cofilin磷酸化水平明顯降低,沉默PAK4后同樣發(fā)現(xiàn)LIMK1和cofilin磷酸化水平明顯降低。結(jié)論:1.mi R-145作用的靶基因?yàn)镻AK4。2.mi R-145通過(guò)作用于PAK4抑制腸癌細(xì)胞的增殖、遷移與侵襲。3.mi R-145作用于靶基因PAK4下調(diào)信號(hào)通路LIMK1/confilin抑制結(jié)直腸癌的侵襲轉(zhuǎn)移。
【關(guān)鍵詞】：結(jié)直腸癌 mi R-145 PAK4 LIMK1 cofilin 增殖 遷移 侵襲
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.34
【目錄】：

• 摘要5-7
• abstract7-11
• 緒論11-28
• 1 結(jié)直腸癌的發(fā)病情況和影響因素11-13
• 2 miRNAs的研究現(xiàn)狀13-15
• 3 PAK4的研究現(xiàn)狀15-16
• 4 LIMK1/cofilin 信號(hào)通路的研究現(xiàn)狀16-17
• 5 前期工作和本實(shí)驗(yàn)研究?jī)?nèi)容17-19
• 參考文獻(xiàn)19-28
• 實(shí)驗(yàn)材料28-31
• 實(shí)驗(yàn)方法31-48
• 1 細(xì)胞培養(yǎng)31-32
• 2 載體構(gòu)建32-40
• 3 慢病毒包裝和穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建40-42
• 4 細(xì)胞增殖檢測(cè)42
• 5 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)42-43
• 6 細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)43
• 7 報(bào)告基因檢測(cè)43
• 8 western blotting檢測(cè)43-45
• 9 細(xì)胞RNA提取45-46
• 10 逆轉(zhuǎn)錄46-47
• 11 q-PCR47-48
• 12 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法48
• 結(jié)果48-56
• 1 miR-145 靶基因的驗(yàn)證48-50
• 2 miR-145 通過(guò)調(diào)控PAK4對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲的影響50-55
• 3 miR-145 調(diào)控靶基因下游LIMK1/cofilin信號(hào)通路55-56
• 討論56-64
• 參考文獻(xiàn)64-69
• 結(jié)論69-70
• 致謝70-71
• 發(fā)表論文情況71

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 周志剛;秦晶;姜浩;蘇琦;;LIMK與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)研究雜志;2014年05期

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本文編號(hào)：605479