本文關(guān)鍵詞：LY294002增強(qiáng)吡柔比星抗人骨肉瘤細(xì)胞惡性表型的體外研究

  更多相關(guān)文章： 骨肉瘤 轉(zhuǎn)移 LY294002 吡柔比星 協(xié)同作用

【摘要】：目的:本研究旨在體外研究吡柔比星(THP、PI)和LY294002(LY)聯(lián)合使用對(duì)骨肉瘤細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲和遷移的作用,為臨床上骨肉瘤的治療提供新思路。方法:①M(fèi)TT法檢測(cè)吡柔比星和LY294002單獨(dú)和聯(lián)合使用24小時(shí)對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞株U2-OS細(xì)胞和MG63細(xì)胞增殖的影響。分別求出單藥物和聯(lián)合用藥的IC50,用聯(lián)合指數(shù)(CI)值公式來評(píng)價(jià)聯(lián)合用藥效率。②DAPI染色法檢測(cè)一定濃度吡柔比星和LY294002單獨(dú)和聯(lián)合使用24小時(shí)對(duì)U2-OS、MG63細(xì)胞凋亡的影響。用金氏Q值公式來評(píng)價(jià)聯(lián)合用藥效率。③劃痕和Transwell實(shí)驗(yàn)法檢測(cè)一定濃度吡柔比星和LY294002單獨(dú)和聯(lián)合使用24小時(shí)對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞株U2-OS細(xì)胞和MG63細(xì)胞遷移和侵襲的影響。結(jié)果:1、U2-OS和MG63接受單藥和聯(lián)合用藥物刺激后細(xì)胞增殖均明顯受到抑制,并呈劑量依賴性。其中U2-OS單獨(dú)給藥組,吡柔比星和LY294002的IC50分別為0.47±0.05μg/ml和19.71±1.87μg/ml,而聯(lián)合用藥組中,不同藥物比例吡柔比星:LY294002=1:25、1:50、1:100的IC50分別為6.54±0.62、9.15±1.21、11.28±1.32ug/ml,相應(yīng)的聯(lián)合指數(shù)CI=0.74±0.05,0.81±0.07和0.87±0.06;MG63單獨(dú)給藥組,吡柔比星和LY294002的IC50分別為3.61±0.35ug/ml,17.36±2.07ug/ml,而聯(lián)合用藥組中,不同藥物比例吡柔比星:LY294002=1:5、1:10、1:20分別對(duì)應(yīng)的IC50分別為=5.56±0.65,5.04±0.55和5.36±0.62μg/ml,,相應(yīng)的聯(lián)合指數(shù)CI=0.54±0.08,0.37±0.06,0.39±0.07,所有CI值均小于0.95。2、MG63和U2-OS接受單藥和聯(lián)合用藥物刺激后藥物濃度的增加,凋亡細(xì)胞逐漸增多。MG63單獨(dú)給藥組,吡柔比星藥物濃度為0.25、0.5、1μg/ml時(shí),MG63的凋亡率分別為7.5±1.9%、14.5±3.2%、24±5.4%,LY294002藥物濃度為5、10、20μg/ml時(shí),MG63的凋亡率分別是10.5±2.1.%、8.9±3.5%、42.4±5.1%。聯(lián)合用藥時(shí),吡柔比星+LY294002為0.25+5、1+5、1+20μg/ml,凋亡率分別為30.8±4.2%、39.5±5.4%、和74.5±8.9%,相應(yīng)Q值分別為1.31±0.21、1.24±0.23和1.33±0.25;U2-OS聯(lián)合用藥組,吡柔比星+LY294002為0.1+5、0.2+5和0.2+20 ug/ml時(shí),凋亡率分別為25.6±3.2%、33.5±4.5%和79.4±9.6%,相應(yīng)Q值分別為1.5±0.28、1.23±0.25和1.49±0.32,所有Q值均大于1.15。3、MG63和U2-OS在對(duì)照組、吡柔比星組、LY294002組、聯(lián)合給藥組細(xì)胞遷移率分別為82±12%、35±7%、41±8%、12±3%和0.75±14%、33±8%、26±6%、10±3%,聯(lián)合給藥組遷移率明顯高于單用藥組(p0.05)。4、MG63和U2-OS在對(duì)照組、吡柔比星組、LY294002組、聯(lián)合給藥組中侵襲的細(xì)胞數(shù)分別為165±22、72±8、63±7、28±3和155±20、68±8、52±6、25±4,均顯示聯(lián)合給藥組細(xì)胞的侵襲數(shù)量較單獨(dú)給藥組顯著減少(p0.05)。結(jié)論:LY294002能明顯增強(qiáng)吡柔比星抗骨肉瘤細(xì)胞惡性表型的影響,從而有效地抑制細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲,促進(jìn)細(xì)胞的凋亡。二者表現(xiàn)為協(xié)同作用,這將為后續(xù)的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)提供了一定的理論基礎(chǔ),也為臨床骨肉瘤的新的化療方案提供了新的參考。
【關(guān)鍵詞】：骨肉瘤 轉(zhuǎn)移 LY294002 吡柔比星 協(xié)同作用
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R738.1
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 中英文縮略詞表10-11
• 第1章 前言11-13
• 第2章 材料與方法13-22
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料、試劑和儀器13-14
• 2.1.1 細(xì)胞13
• 2.1.2 主要藥物13
• 2.1.3 主要試劑13-14
• 2.2 主要軟件14
• 2.3 主要儀器14-15
• 2.4 主要試劑的配制15-16
• 2.4.1 細(xì)胞培養(yǎng)主要試劑的配制15
• 2.4.2 LY294002 的溶解吡柔比星的配制15-16
• 2.4.3 MTT溶液的配制16
• 2.4.4 4%多聚甲醛的配制16
• 2.5 實(shí)驗(yàn)方法16-21
• 2.5.1 細(xì)胞復(fù)蘇、傳代、凍存16-17
• 2.5.2 MTT法測(cè)骨肉瘤細(xì)胞增殖17-18
• 2.5.3 DAPI染色法檢測(cè)骨肉瘤細(xì)胞凋亡18-19
• 2.5.4 劃痕愈合實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移19-20
• 2.5.5 Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲性20-21
• 2.6 統(tǒng)計(jì)方法21-22
• 第3章 結(jié)果22-29
• 3.1 LY294002 協(xié)同吡柔比星對(duì)骨肉瘤細(xì)胞增殖的抑制作用22-24
• 3.2 LY294002 顯著增強(qiáng)吡柔比星促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞凋亡的作用24-26
• 3.3 LY294002、吡柔比星單獨(dú)給藥和聯(lián)合給藥對(duì)U2OS、MG63 細(xì)胞遷移能力的影響26-29
• 第4章 討論29-32
• 第5章 結(jié)論與展望32-33
• 致謝33-34
• 參考文獻(xiàn)34-38
• 綜述38-45
• 參考文獻(xiàn)42-45

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