本文關鍵詞：感染期子宮頸癌U14細胞荷瘤小鼠抑制巨噬細胞CCL5分泌的機制研究

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【摘要】：目的:探討感染期子宮頸癌U14細胞荷瘤小鼠抑制巨噬細胞分泌正常T細胞表達和分泌趨化因子5(RANTES/CCL5)的機制。方法:取6-8周齡的雌性C57BL/6小鼠,隨機分為4組,每組6只。無瘤組:皮下注射培養(yǎng)基;荷瘤組:皮下注射U14細胞;無瘤+脂多糖(LPS;用于誘導小鼠感染)組:皮下注射培養(yǎng)基,腹腔內(nèi)注射LPS;荷瘤+LPS組:皮下注射U14細胞,腹腔內(nèi)注射LPS。1采用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)法及熒光定量PCR(Q-PCR)技術檢測各組小鼠血清及炎性細胞中CCL5和前列腺素2(PGE2)的表達。2提取感染期荷瘤小鼠血清制備腫瘤條件培養(yǎng)基(TCM),在體外誘導巨噬細胞,檢測誘導感染前、后各組上清液和巨噬細胞中CCL5、PGE2和環(huán)磷酸腺苷(c AMP)的表達。3選用環(huán)氧化酶2(COX-2)抑制劑-NS-398阻斷PGE2的產(chǎn)生,檢測誘導感染前、后各組上清液和巨噬細胞中CCL5、PGE2和環(huán)c AMP的表達。4選用蛋白激酶A(PKA)阻滯劑-H89阻斷c AMP/PKA信號通路,檢測各組上清液和巨噬細胞中PGE2、CCL5和c AMP的表達。結果:1荷瘤組小鼠血清中CCL5蛋白含量及巨噬細胞中CCL5 m RNA的表達水平(151.34±35.355 pg/ml;1)均明顯低于無瘤組(690.81±84.852 pg/ml;4.53±0.848),差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。其血清中PGE2蛋白含量及巨噬細胞中PGE2 m RNA的表達水平(1198.49±82.731 pg/ml;5.75±0.777)均明顯高于無瘤組(186.84±25.455 pg/ml;1),差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。無瘤+LPS組小鼠血清中CCL5蛋白含量及巨噬細胞中CCL5 m RNA的表達水平(4049.34±141.421 pg/ml;31.49±1.980)均高于明顯高于荷瘤+LPS組(1950.68±70.71 pg/ml;12.11±2.828),差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。,血清中PGE2蛋白含量及巨噬細胞中PGE2m RNA的表達水平(676.5±70.003 pg/ml;3.35±0.353)均低于荷瘤+LPS組(2550±381.837 pg/ml;11.55±0.949),差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。2各組小鼠血清制備的腫瘤條件培養(yǎng)基在體外培養(yǎng)巨噬細胞時,荷瘤組小鼠TCM對培養(yǎng)基中蛋白含量及巨噬細胞中CCL5 m RNA的表達水平(1625.70±176.776 pg/ml;28.65±1.202)高于無瘤組TCM(27.43±2.828pg/ml;1),差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。TCM中PGE2蛋白含量及巨噬細胞中PGE2 m RNA的表達水平(790.49±155.563 pg/ml;1.67±0.247)均明顯高于無瘤組TCM(448.30±114.551 pg/ml;1),差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。TCM中c AMP蛋白含量及巨噬細胞中c AMP m RNA的表達水平(164.48±29.698 pg/ml;1.59±0.268)均明顯高于無瘤組TCM(117.54±24.748 pg/ml;1),差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。無瘤+LPS組TCM對培養(yǎng)基中蛋白含量及巨噬細胞中CCL5 m RNA的表達水平(10475.12±742.46 pg/ml;212.01±5.734)均高于明顯高于荷瘤+LPS組TCM(6375.09±530.33 pg/ml;142.28±2.545),差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。無瘤+LPS組TCM中PGE2蛋白含量及巨噬細胞中PGE2 m RNA的表達水平(2437.54±95.459 pg/ml;4.31±0.707)均低于荷瘤+LPS組(3440.56±162.634 pg/ml;5.94±0.283),差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。無瘤+LPS組TCM中c AMP蛋白含量及巨噬細胞中c AMP m RNA的表達水平(339.53±13.435 pg/ml;4.055±0.353)均明顯低于荷瘤+LPS組TCM(541.50±41.719 pg/ml;5.35±0.495),差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。3在荷瘤+LPS組基礎上使用COX-2抑制劑NS398后,培養(yǎng)基中CCL5蛋白含量及巨噬細胞中CCL5 m RNA的表達水平升高7690.58±268.70 pg/ml;158.95±8.910),PGE2蛋白含量及巨噬細胞中PGE2 m RNA的表達水平降低(2819.96±152.027 pg/ml;4.94±0.283),而c AMP蛋白含量及巨噬細胞中c AMP m RNA的表達水平也有所降低(464.57±7.778pg/ml;4.26±0.424)。在荷瘤+LPS組+NS398基礎上使用PKA抑制劑H89后,培養(yǎng)基中CCL5蛋白含量及巨噬細胞中CCL5 m RNA的表達水平進一步升高(8375.09±520.33 pg/ml;177.05±8.838),PGE2蛋白含量及巨噬細胞中PGE2 m RNA的表達水平也有所降低(2650.34±35.355 pg/ml;4.66±0.424),而c AMP蛋白含量及巨噬細胞中c AMP m RNA的表達水平進一步降低(367.53±13.435 pg/ml;3.11±0.707)。結論:感染期子宮頸癌U14細胞荷瘤小鼠血清可在體外抑制巨噬細胞CCL5的產(chǎn)生,這種抑制效應通過c AMP/PKA通路受PGE2的調(diào)控。
【關鍵詞】：U14細胞 CCL5 cAMP/PKA通路 PEG2 COX-2
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文縮寫10-11
• 前言11-12
• 材料與方法12-18
• 結果18-21
• 附圖21-24
• 附表24-26
• 討論26-28
• 結論28-29
• 參考文獻29-33
• 綜述 乳酸桿菌與宮頸癌的研究進展33-40
• 參考文獻36-40
• 致謝40-41
• 個人簡歷41

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 逯彩虹;程建新;周艾琳;戴衛(wèi)紅;高麗彩;李秀娟;;乳酸菌抗腫瘤作用的概況與應用進展[J];實用腫瘤雜志;2009年01期

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本文編號：604540