本文關鍵詞：多個候選基因啟動子區(qū)域DNA甲基化與結直腸癌的相關性研究

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【摘要】：目的:結直腸癌的演變是一個多步驟、涉及遺傳和表觀遺傳改變的復雜過程。其中,DNA甲基化是其發(fā)生發(fā)展中重要的表觀遺傳調(diào)控機制。PCDH-γ-A12,SLC19A1,CREB和CYLD啟動子甲基化可調(diào)控其基因表達水平,但其在結直腸癌發(fā)生發(fā)展中的調(diào)控機制尚不明確。因此,本研究探討PCDH-γ-A12,SLC19A1,CREB和CYLD基因啟動子甲基化與結直腸癌發(fā)生發(fā)展的相關性。方法:1、收集結直腸癌組織及正常對照組織各42例,整理臨床病理資料。2、提取基因組DNA,并測定DNA濃度及質(zhì)量。3、將基因組DNA進行亞硫酸鹽修飾。4、修飾后的基因組DNA予以甲基化特異性PCR擴增,并將MSP產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳。5、隨機抽取3份MSP擴增產(chǎn)物進行DNA甲基化測序。6、采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù),分析與結直腸癌發(fā)生、轉移的關聯(lián)性,采用χ2檢驗,P0.05有統(tǒng)計學意義。結果:通過甲基化特異性PCR和瓊脂糖凝膠電泳,分析得出結直腸癌組織PCDH-γ-A12、SLC19A1基因啟動子DNA甲基化程度高于正常組織,有統(tǒng)計學意義(83.33%vs 57.14%,p=0.009;78.57%vs 45.24%,p=0.002);CREB、CYLD基因啟動子DNA甲基化程度在結直腸癌組織與正常組織差異無統(tǒng)計學意義(26.19%vs 11.90%,p=0.095;14.29%vs 11.90%,p=0.746)。結直腸癌淋巴結轉移組織PCDH-γ-A12、SLC19A1基因啟動子DNA甲基化程度高于淋巴結未轉移組織,有統(tǒng)計學意義(100.00%vs 66.67%,p=0.013;95.24%vs 61.90%,p=0.024);CREB、CYLD基因啟動子DNA甲基化程度在結直腸癌淋巴結轉移組織與淋巴結未轉移組織差異無統(tǒng)計學意義(33.33%vs 19.05%,p=0.292;19.05%vs 9.52%,p=0.659)。通過DNA甲基化測序得出結直腸癌組織PCDH-γ-A12、SLC19A1的甲基化特異性PCR擴增產(chǎn)物胞嘧啶保持不變,未轉換成胸腺嘧啶,結直腸癌組織PCDH-γ-A12,SLC19A1基因啟動子區(qū)高甲基化;結直腸癌組織CREB、CYLD的甲基化特異性PCR擴增產(chǎn)物胞嘧啶轉變成胸腺嘧啶,結直腸癌組織CREB、CYLD基因啟動子區(qū)未甲基化。并且我們研究得出PCDH-γ-A12,SLC19A1,CREB和CYLD基因甲基化水平與結直腸癌臨床特征均無顯著相關性。結論:PCDH-γ-A12、SLC19A1啟動子高甲基化可促進結直腸癌的發(fā)生和轉移,而CREB、CYLD啟動子甲基化程度與結直腸癌則不具有顯著相關性。這些發(fā)現(xiàn)可能為早期發(fā)現(xiàn)及治療結直腸癌提供新線索,并且PCDH-γ-A12、SLC19A1啟動子甲基化狀態(tài)可作為結直腸癌早期診斷的腫瘤標志物,以此為靶點的藥物可成為結直腸癌治療的一種新手段。
【關鍵詞】：結直腸癌 甲基化特異性PCR PCDH-γ-A12 SLC19A1
【學位授予單位】：寧波大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.34
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 引言10-12
• 1 實驗目的12-13
• 2 研究對象及臨床資料的收集13-14
• 3 材料與方法14-22
• 3.1 實驗材料14-15
• 3.1.1 結直腸癌組織、正常對照組織14
• 3.1.2 主要實驗儀器14-15
• 3.1.3 主要實驗試劑15
• 3.2 實驗方法15-21
• 3.2.1 收集樣本、整理信息15-17
• 3.2.2 提取基因組DNA17
• 3.2.3 測定DNA濃度及質(zhì)量17-18
• 3.2.4 亞硫酸鹽修飾18-19
• 3.2.5 甲基化特異性PCR19-20
• 3.2.6 電泳20
• 3.2.7 甲基化測序20-21
• 3.3 統(tǒng)計分析21-22
• 4 實驗結果22-31
• 4.1 PCDH-γ-A12, SLC19A1, CREB和CYLD基因甲基化檢測22-25
• 4.1.1 PCDH-γ-A12, SLC19A1, CREB和CYLD基因甲基化電泳23-24
• 4.1.2 PCDH-γ-A12, SLC19A1, CREB和CYLD基因甲基化測序24-25
• 4.2 PCDH-γ-A12, SLC19A1, CREB和CYLD基因甲基化與臨床特征的關系25-31
• 4.2.1 結直腸癌和正常組織PCDH-γ-A12, SLC19A1, CREB和CYLD基因甲基化的比較25-26
• 4.2.2 結直腸癌淋巴轉移和淋巴未轉移組織 PCDH-γ-A12, SLC19A1, CREB 和 CYLD 基因甲基化的比較26-27
• 4.2.3 結直腸癌組織 PCDH-γ-A12, SLC19A1, CREB 和 CYLD 基因甲基化狀態(tài)與其他臨床特征的關系27-31
• 5 討論31-33
• 6 結論33-34
• 參考文獻34-38
• 附錄A 中英文對照表38-39
• 附錄B 文獻綜述39-52
• 參考文獻48-52
• 在學研究成果52-54
• 致謝54

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 熊莉麗;張寶;郭志云;;MicroRNA與轉錄因子調(diào)控網(wǎng)絡綜述[J];重慶大學學報;2014年06期

2 韓昂軒;禹莉;;Ph陽性急性淋巴細胞白血病研究進展[J];內(nèi)科;2014年02期

3 盧凱;許斌;陳恕求;張磊;劉春輝;趙宇明;陳明;;miR-19a對于去勢抵抗性前列腺癌細胞的增殖及凋亡的調(diào)控[J];現(xiàn)代醫(yī)學;2013年09期

4 何興蘭;林小龍;王佐;;miRNA-轉錄因子-靶基因前饋環(huán)路:腫瘤與動脈粥樣硬化調(diào)控新機制[J];生命的化學;2013年06期

5 張熠;楊靖;呂運成;鐘警;文格波;;hsa-miR-20a低表達慢病毒載體的構建及其表達鑒定[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2015年05期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 劉曉雯;PTD4-apoptin融合蛋白治療宮頸癌的應用研究及機制初探[D];華中科技大學;2013年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 王芳;miR-19a/b與胃癌細胞多藥耐藥的關系[D];寧夏醫(yī)科大學;2013年

2 胡慶昌;miR-19在雞毒支原體感染中的作用研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2014年

3 彭星宇;p15、Syk基因啟動子甲基化與直腸癌的相關性研究[D];南昌大學;2014年

4 牛文艷;慢病毒載體(miRNA Sponge)介導miR-17、miR-20a基因沉默的抗白血病作用機制研究[D];福建醫(yī)科大學;2014年

5 王媛媛;上調(diào)miR-429表達對食管癌細胞凋亡和侵襲的作用[D];鄭州大學;2014年

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本文編號：602015