本文關(guān)鍵詞：多個候選基因啟動子區(qū)域DNA甲基化與結(jié)直腸癌的相關(guān)性研究

  更多相關(guān)文章： 結(jié)直腸癌 甲基化特異性PCR PCDH-γ-A12 SLC19A1

【摘要】：目的:結(jié)直腸癌的演變是一個多步驟、涉及遺傳和表觀遺傳改變的復(fù)雜過程。其中,DNA甲基化是其發(fā)生發(fā)展中重要的表觀遺傳調(diào)控機制。PCDH-γ-A12,SLC19A1,CREB和CYLD啟動子甲基化可調(diào)控其基因表達(dá)水平,但其在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中的調(diào)控機制尚不明確。因此,本研究探討PCDH-γ-A12,SLC19A1,CREB和CYLD基因啟動子甲基化與結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性。方法:1、收集結(jié)直腸癌組織及正常對照組織各42例,整理臨床病理資料。2、提取基因組DNA,并測定DNA濃度及質(zhì)量。3、將基因組DNA進(jìn)行亞硫酸鹽修飾。4、修飾后的基因組DNA予以甲基化特異性PCR擴增,并將MSP產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。5、隨機抽取3份MSP擴增產(chǎn)物進(jìn)行DNA甲基化測序。6、采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù),分析與結(jié)直腸癌發(fā)生、轉(zhuǎn)移的關(guān)聯(lián)性,采用χ2檢驗,P0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:通過甲基化特異性PCR和瓊脂糖凝膠電泳,分析得出結(jié)直腸癌組織PCDH-γ-A12、SLC19A1基因啟動子DNA甲基化程度高于正常組織,有統(tǒng)計學(xué)意義(83.33%vs 57.14%,p=0.009;78.57%vs 45.24%,p=0.002);CREB、CYLD基因啟動子DNA甲基化程度在結(jié)直腸癌組織與正常組織差異無統(tǒng)計學(xué)意義(26.19%vs 11.90%,p=0.095;14.29%vs 11.90%,p=0.746)。結(jié)直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織PCDH-γ-A12、SLC19A1基因啟動子DNA甲基化程度高于淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移組織,有統(tǒng)計學(xué)意義(100.00%vs 66.67%,p=0.013;95.24%vs 61.90%,p=0.024);CREB、CYLD基因啟動子DNA甲基化程度在結(jié)直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織與淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移組織差異無統(tǒng)計學(xué)意義(33.33%vs 19.05%,p=0.292;19.05%vs 9.52%,p=0.659)。通過DNA甲基化測序得出結(jié)直腸癌組織PCDH-γ-A12、SLC19A1的甲基化特異性PCR擴增產(chǎn)物胞嘧啶保持不變,未轉(zhuǎn)換成胸腺嘧啶,結(jié)直腸癌組織PCDH-γ-A12,SLC19A1基因啟動子區(qū)高甲基化;結(jié)直腸癌組織CREB、CYLD的甲基化特異性PCR擴增產(chǎn)物胞嘧啶轉(zhuǎn)變成胸腺嘧啶,結(jié)直腸癌組織CREB、CYLD基因啟動子區(qū)未甲基化。并且我們研究得出PCDH-γ-A12,SLC19A1,CREB和CYLD基因甲基化水平與結(jié)直腸癌臨床特征均無顯著相關(guān)性。結(jié)論:PCDH-γ-A12、SLC19A1啟動子高甲基化可促進(jìn)結(jié)直腸癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移,而CREB、CYLD啟動子甲基化程度與結(jié)直腸癌則不具有顯著相關(guān)性。這些發(fā)現(xiàn)可能為早期發(fā)現(xiàn)及治療結(jié)直腸癌提供新線索,并且PCDH-γ-A12、SLC19A1啟動子甲基化狀態(tài)可作為結(jié)直腸癌早期診斷的腫瘤標(biāo)志物,以此為靶點的藥物可成為結(jié)直腸癌治療的一種新手段。
【關(guān)鍵詞】：結(jié)直腸癌 甲基化特異性PCR PCDH-γ-A12 SLC19A1
【學(xué)位授予單位】：寧波大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.34
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 引言10-12
• 1 實驗?zāi)康?/span>12-13
• 2 研究對象及臨床資料的收集13-14
• 3 材料與方法14-22
• 3.1 實驗材料14-15
• 3.1.1 結(jié)直腸癌組織、正常對照組織14
• 3.1.2 主要實驗儀器14-15
• 3.1.3 主要實驗試劑15
• 3.2 實驗方法15-21
• 3.2.1 收集樣本、整理信息15-17
• 3.2.2 提取基因組DNA17
• 3.2.3 測定DNA濃度及質(zhì)量17-18
• 3.2.4 亞硫酸鹽修飾18-19
• 3.2.5 甲基化特異性PCR19-20
• 3.2.6 電泳20
• 3.2.7 甲基化測序20-21
• 3.3 統(tǒng)計分析21-22
• 4 實驗結(jié)果22-31
• 4.1 PCDH-γ-A12, SLC19A1, CREB和CYLD基因甲基化檢測22-25
• 4.1.1 PCDH-γ-A12, SLC19A1, CREB和CYLD基因甲基化電泳23-24
• 4.1.2 PCDH-γ-A12, SLC19A1, CREB和CYLD基因甲基化測序24-25
• 4.2 PCDH-γ-A12, SLC19A1, CREB和CYLD基因甲基化與臨床特征的關(guān)系25-31
• 4.2.1 結(jié)直腸癌和正常組織PCDH-γ-A12, SLC19A1, CREB和CYLD基因甲基化的比較25-26
• 4.2.2 結(jié)直腸癌淋巴轉(zhuǎn)移和淋巴未轉(zhuǎn)移組織 PCDH-γ-A12, SLC19A1, CREB 和 CYLD 基因甲基化的比較26-27
• 4.2.3 結(jié)直腸癌組織 PCDH-γ-A12, SLC19A1, CREB 和 CYLD 基因甲基化狀態(tài)與其他臨床特征的關(guān)系27-31
• 5 討論31-33
• 6 結(jié)論33-34
• 參考文獻(xiàn)34-38
• 附錄A 中英文對照表38-39
• 附錄B 文獻(xiàn)綜述39-52
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 在學(xué)研究成果52-54
• 致謝54

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：602015