本文關(guān)鍵詞：食管鱗癌高頻擴增基因IGHMBP2的鑒定及其功能的初步研究

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【摘要】：目的:在我國食管鱗癌是常見的惡性腫瘤之一,食管鱗癌嚴重危及人類健康,其死亡率居于我國惡性腫瘤中的第四位。食管鱗癌預后較差,由于其易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,易累及如主動脈、氣管、支氣管和肺等的鄰近器官,常導致治療失敗。因此當前的主要研究方向之一就是在尋找與食管鱗癌進展相關(guān)的基因,然后對其進行功能方面的初步研究。本文旨在觀察IGHMBP2在食管鱗癌腫瘤組織中的擴增情況,以及該基因在細胞系中的擴增和蛋白表達情況;探討敲降和正轉(zhuǎn)IGHMBP2對細胞蛋白表達水平和侵襲遷移能力的影響,以及敲降IGHMBP2對侵襲遷移相關(guān)蛋白及凋亡相關(guān)蛋白表達水平的影響。方法:選取59例食管鱗癌標本和8個食管鱗癌細胞系作為研究對象。應用array-CGH技術(shù)檢測IGHMBP2在食管鱗癌原發(fā)腫瘤組織的擴增情況,采用熒光原位雜交(FISH)和Western blot技術(shù)檢測其在食管鱗癌細胞系中的擴增和蛋白表達水平;應用Transwell體外侵襲實驗觀察敲降IGHMBP2和正轉(zhuǎn)pc DNA3.1-IGHMBP2質(zhì)粒對食管鱗癌細胞系的侵襲和遷移能力的影響;MTS法檢測敲降IGHMBP2對食管鱗癌細胞增殖能力的影響;Western blot技術(shù)檢測敲降IGHMBP2對侵襲遷移相關(guān)蛋白和凋亡相關(guān)蛋白的表達水平的影響。結(jié)果:發(fā)現(xiàn)IGHMBP2基因在食管鱗癌原發(fā)腫瘤組織中擴增且擴增頻率為28.9%(17/59),在食管鱗癌細胞系KYSE30、KYSE180和KYSE510中存在擴增,在KYSE150中呈現(xiàn)增益,且相應的蛋白表達水平也較高;在KYSE30和KYSE150細胞系中敲降IGHMBP2后,細胞的蛋白表達水平和侵襲遷移能力均明顯降低(P0.001),然后再正轉(zhuǎn)pc DNA3.1-IGHMBP2質(zhì)粒,兩細胞系的蛋白表達水平回復,細胞系的侵襲遷移能力也得以恢復(P0.01);在COLO680N細胞系中轉(zhuǎn)染IGHMBP2質(zhì)粒后,其蛋白表達水平升高,細胞的侵襲遷移能力也相應升高(P0.01);敲降IGHMBP2在前兩天對增殖幾乎沒有影響,因此排除了增殖對細胞侵襲遷移的影響;在敲降IGHMBP2后侵襲遷移相關(guān)蛋白E-cadherin的表達水平升高,而β-catenin、MMP、m TOR、ERK/p-ERK及GSK3β/p-GSK3β等侵襲遷移相關(guān)蛋白的表達水平未見明顯變化,凋亡相關(guān)蛋白PARP1和Caspase3蛋白的表達水平也未發(fā)現(xiàn)明顯變化。結(jié)論:IGHMBP2在食管鱗癌腫瘤組織中擴增,在食管鱗癌細胞系中擴增和高表達,該蛋白過表達使食管鱗癌細胞的侵襲和遷移能力增強,這可能是通過降低E-cadherin的表達水平而實現(xiàn)的。
【關(guān)鍵詞】：IGHMBP2 食管鱗癌 表達 侵襲 遷移
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.1
【目錄】：

• 縮略語表6-8
• 摘要8-10
• Abstract10-12
• 1.前言12-14
• 2.材料與方法14-31
• 2.1 材料14-19
• 2.1.1 細胞系及培養(yǎng)條件14-15
• 2.1.2 真核表達質(zhì)粒15
• 2.1.3 主要儀器15-16
• 2.1.4 主要試劑及耗材16-17
• 2.1.5 試劑盒17
• 2.1.6 抗體17-18
• 2.1.7 SIRNA靶序列18
• 2.1.8 IGHMBP2 CDS克隆引物18
• 2.1.9 試劑的配制及使用18-19
• 2.2 方法19-31
• 2.2.1 細胞系總RNA提取19-20
• 2.2.2 逆轉(zhuǎn)錄20
• 2.2.3 PCR20-21
• 2.2.4 WESTERN BLOT實驗21-23
• 2.2.5 細菌轉(zhuǎn)化及質(zhì)粒提取23-24
• 2.2.6 熒光原位雜交24-27
• 2.2.7 細胞培養(yǎng)27-28
• 2.2.8 轉(zhuǎn)染SIRNA28-29
• 2.2.9 細胞遷移實驗29-30
• 2.2.10 細胞侵襲實驗30
• 2.2.11 MTS法測定細胞生長曲線30
• 2.2.12 統(tǒng)計方法30-31
• 3 結(jié)果31-40
• 3.1 IGHMBP2在食管鱗癌原發(fā)腫瘤中擴增31
• 3.2 IGHMBP2在食管鱗癌細胞系中擴增及其表達31-33
• 3.3 SIRNA敲降效果及PCDNA3.1-IGHMBP2質(zhì)粒表達效果的驗證結(jié)果33-34
• 3.4 敲降IGHMBP2對食管鱗癌細胞侵襲遷移能力的影響34-36
• 3.5 敲降IGHMBP2后正轉(zhuǎn)表達質(zhì)粒對食管鱗癌細胞侵襲遷移能力的影響36-38
• 3.6 敲降IGHMBP2對食管鱗癌細胞增殖能力的影響38
• 3.7 敲降IGHMBP2對侵襲遷移相關(guān)蛋白表達水平的影響38-40
• 3.8 敲降IGHMBP2對凋亡相關(guān)蛋白表達水平的影響40
• 4 討論40-44
• 5 結(jié)論44
• 參考文獻44-50
• 附錄50-52
• 致謝52-53
• 文獻綜述53-61
• 參考文獻58-61

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