本文關(guān)鍵詞：DACH1抑制舌鱗狀細(xì)胞癌生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移的研究

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【摘要】：目的探討腫瘤抑制基因(Dachshund homolog1,DACH1)在人舌鱗狀細(xì)胞癌(Tongue squamous cell carcinoma,TSCC)中發(fā)揮的作用。方法收集2011年—2013年青島大學(xué)附屬醫(yī)院51例TSCC住院患者的腫瘤標(biāo)本�；颊甙凑漳挲g、性別、腫瘤臨床分期、組織類型、分化程度、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分類。所有患者術(shù)前均未行放療、化療及其他干預(yù)治療,并同期行頸部淋巴結(jié)清掃術(shù)。免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)DACH1蛋白在TSCC及對(duì)應(yīng)癌周正常組織中的表達(dá),并結(jié)合相關(guān)臨床病理參數(shù)進(jìn)行綜合分析。Real time RT-PCR及Western Blot方法檢測(cè)9例新鮮舌鱗癌及癌周正常組織中DACH1表達(dá)情況。結(jié)果免疫組織化學(xué)結(jié)果表明,約70.6%(36/51)TSCC原發(fā)灶中低表達(dá)DACH1(P0.05);DACH1的低表達(dá)與腫瘤分化差,臨床分期晚及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移成正相關(guān)(P0.05)。Real time RT-PCR及Western Blot檢測(cè)結(jié)果顯示DACH1m RNA及蛋白質(zhì)在TSCC表達(dá)均低于癌周正常組織(P0.01)。結(jié)論DACH1在TSCC中呈低表達(dá),DACH1低表達(dá)與腫瘤分化差,臨床分期晚及轉(zhuǎn)移相關(guān),提示DACH1可能成為TSCC抗腫瘤藥物的治療有效靶點(diǎn)。目的檢測(cè)DACH1基因過(guò)表達(dá)對(duì)舌鱗癌SCC-25細(xì)胞增殖、凋亡、遷移及侵襲轉(zhuǎn)移的影響。方法Western Blot分別檢測(cè)舌鱗癌細(xì)胞系CAL-27、Tca 8113及SCC-25中DACH1的表達(dá)。構(gòu)建慢病毒過(guò)表達(dá)載體轉(zhuǎn)染舌鱗癌細(xì)胞株SCC-25,篩選轉(zhuǎn)染成功的細(xì)胞分為實(shí)驗(yàn)組、陰性對(duì)照組、空白對(duì)照組。用MTT、克隆生成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)DACH1過(guò)表達(dá)對(duì)細(xì)胞增殖的影響;Transwell小室及粘附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)DACH1過(guò)表達(dá)對(duì)細(xì)胞遷移、侵襲、轉(zhuǎn)移能力的影響;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)DACH1過(guò)表達(dá)對(duì)細(xì)胞凋亡的作用。結(jié)果DACH1在SCC-25細(xì)胞中表達(dá)較CAL-27、Tca 8113細(xì)胞系顯著降低(P0.05),過(guò)表達(dá)DACH1于SCC-25細(xì)胞可顯著抑制其增殖活性及克隆形成能力,同時(shí)抑制癌細(xì)侵襲及轉(zhuǎn)移,誘導(dǎo)SCC-25細(xì)胞凋亡,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論DACH1過(guò)表達(dá)可能與TSCC進(jìn)展過(guò)程密切相關(guān),其表達(dá)上調(diào)后可顯著抑制舌鱗癌細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲轉(zhuǎn)移能力,促進(jìn)其凋亡,因此,DACH1過(guò)表達(dá)于TSCC可遏制其惡性進(jìn)展,有望為TSCC的臨床治療提供新的途徑。
【關(guān)鍵詞】：DACH1蛋白 舌鱗狀細(xì)胞癌 RT-PCR 免疫組織化學(xué)技術(shù) DACH1 SCC-25細(xì)胞 增殖 轉(zhuǎn)移 凋亡
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.86
【目錄】：

• 第一部分 檢測(cè)腫瘤抑制基因DACH1在人舌鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)2-20
• 摘要2-3
• Abstract3-5
• 引言5-6
• 第1章 材料與方法6-13
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料6-7
• 1.1.1 主要試劑6-7
• 1.1.2 主要儀器及材料7
• 1.1.3 組織標(biāo)本來(lái)源7
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法7-13
• 1.2.1 免疫組織化學(xué)7-8
• 1.2.2 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)8
• 1.2.3 Real time RT-PCR8-10
• 1.2.4 Western blot10-12
• 1.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法12-13
• 第2章 結(jié)果13-16
• 2.1 DACH1蛋白在舌鱗狀細(xì)胞癌及對(duì)應(yīng)癌周正常組織中的表達(dá)13
• 2.2 DACH1蛋白表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系13-14
• 2.3 DACH1m RNA及蛋白質(zhì)在新鮮舌鱗癌和癌周正常組織中的表達(dá)14-16
• 第3章 討論16-18
• 結(jié)論18-19
• 參考文獻(xiàn)19-20
• 第二部分 DACH1基因過(guò)表達(dá)對(duì)SCC-25細(xì)胞增殖、凋亡、遷移及侵襲轉(zhuǎn)移的影響20-44
• 摘要20-21
• Abstract21-23
• 引言23-24
• 第1章 材料與方法24-31
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料24-26
• 1.1.1 細(xì)胞系24
• 1.1.2 載體24
• 1.1.3 引物序列24
• 1.1.4 主要試劑24-25
• 1.1.5 主要儀器及設(shè)備25-26
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法26-29
• 1.2.1 舌鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞培養(yǎng)26
• 1.2.2 慢病毒載體的構(gòu)建26
• 1.2.3 慢病毒載體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染舌鱗癌細(xì)胞系的選擇26
• 1.2.4 慢病毒載體轉(zhuǎn)染效率的檢測(cè)26-27
• 1.2.5 RT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染后舌鱗癌細(xì)胞株DACH1m RNA的表達(dá)27
• 1.2.6 Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染后舌鱗癌細(xì)胞株DACH1蛋白質(zhì)的表達(dá)27-28
• 1.2.7 檢測(cè)DACH1基因過(guò)表達(dá)對(duì)舌鱗癌細(xì)胞增殖的影響28-29
• 1.2.8 流式細(xì)胞儀檢測(cè)DACH1基因過(guò)表達(dá)對(duì)舌鱗癌細(xì)胞凋亡的影響29
• 1.2.9 Transwell小室檢測(cè)DACH1基因過(guò)表達(dá)對(duì)舌鱗癌細(xì)胞遷移能力的影響29
• 1.3 黏附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)DACH1基因過(guò)表達(dá)對(duì)舌鱗癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響29-31
• 1.3.1 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析30-31
• 第2章 結(jié)果31-37
• 2.1 慢病毒載體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染舌鱗癌細(xì)胞系的選擇31-32
• 2.2 SCC-25 細(xì)胞中DACH1過(guò)表達(dá)效率的檢測(cè)32-33
• 2.3 DACH1基因過(guò)表達(dá)對(duì)SCC-25 細(xì)胞增殖活性的影響33-35
• 2.3.1 DACH1基因過(guò)表達(dá)抑制SCC-25 細(xì)胞增殖活性33-34
• 2.3.2 DACH1基因過(guò)表達(dá)SCC-25 細(xì)胞克隆形成能力34-35
• 2.4 DACH1基因過(guò)表達(dá)誘導(dǎo)SCC-25 細(xì)胞凋亡35-36
• 2.5 DACH1基因過(guò)表達(dá)抑制SCC-25 細(xì)胞遷移36
• 2.6 DACH1基因過(guò)表達(dá)抑制SCC-25 細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移36-37
• 第3章 討論37-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-44
• 綜述44-52
• 綜述參考文獻(xiàn)49-52
• 附錄52-54
• 攻讀論文期間取得的研究成果54-55
• 致謝55-56

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