本文關(guān)鍵詞：亞硝酰胺類致癌劑誘導(dǎo)MGMT基因表達(dá)異常參與調(diào)控GES-1細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的研究

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【摘要】：O6-甲基鳥嘌呤-DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(MGMT)是一種DNA損傷修復(fù)酶,獨(dú)立修復(fù)由環(huán)境污染物中N-亞硝基致癌劑或化療藥等引起的烷基DNA加合物損傷,通過直接轉(zhuǎn)移烷基DNA加合物上的烷基到自身參與修復(fù)過程,避免細(xì)胞發(fā)生致突變,致腫瘤及細(xì)胞毒性的損傷。亞硝酰胺類致癌劑(MNNG、MNU)是一種具有高活性的化學(xué)致突變致癌物,用于研究在環(huán)境中廣泛存在的N-亞硝酰胺類化學(xué)誘變物和致癌物的作用機(jī)制。該化合物能與DNA及蛋白質(zhì)等生物大分子形成加合物,引起基因組損傷,并最終導(dǎo)致基因突變、染色體畸變、細(xì)胞死亡,以及多種腫瘤的發(fā)生。在本研究中,我們發(fā)現(xiàn),利用MNNG、MNU低劑量、多次暴露能誘導(dǎo)人胃正常上皮GES-1細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化,并且伴有MGMT基因表達(dá)的持續(xù)上調(diào)。甲基化特異性PCR(MSP)及亞硫酸氫鹽測序(BSP)實(shí)驗(yàn)均證明,MGMT啟動子區(qū)域(+93位點(diǎn)到+153位點(diǎn))DNA甲基化水平MNNG、MNU誘導(dǎo)組較對照組明顯降低,提示表觀遺傳修飾機(jī)制參與調(diào)控MGMT在本模型中的異常表達(dá)。染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證明,MNNG、MNU刺激抑制DNMT1與MGMT啟動子區(qū)的結(jié)合,同時伴有該啟動子區(qū)域內(nèi)H3K9met2的修飾水平下降,H3K4met2水平上升。進(jìn)一步證明表觀遺傳修飾機(jī)制調(diào)控在MNNG、MNU誘導(dǎo)的MGMT的表達(dá)上調(diào)的重要作用。此外,(O6-benzylguanine)O6-BG處理MNNG、MNU誘導(dǎo)組細(xì)胞,能顯著下調(diào)MGMT的表達(dá)水平,促進(jìn)細(xì)胞惡性增殖能力的增強(qiáng)；隨后在誘導(dǎo)組細(xì)胞中轉(zhuǎn)染MGMT過表達(dá)質(zhì)粒,顯著抑制細(xì)胞的惡性增殖能力。另外,MGMT高表達(dá)及表達(dá)抑制的單克隆細(xì)胞株細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)也證實(shí)MGMT的表達(dá)水平與細(xì)胞惡性增殖呈負(fù)相關(guān)。本研究證明亞硝酰胺類致癌劑刺激人胃正常上皮細(xì)胞,能誘導(dǎo)該細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化；通過抑制DNMT1蛋白與MGMT啟動子區(qū)的結(jié)合,降低MGMT啟動子區(qū)DNA甲基化水平,同時伴有組蛋白修飾調(diào)控的改變,如抑制基因激活相關(guān)的H3K9met2修飾的降低及促進(jìn)基因激活相關(guān)的H3K4met2修飾的增加,持續(xù)激活其表達(dá),抑制該惡性轉(zhuǎn)化的進(jìn)程。本研究為進(jìn)一步揭示亞硝酰胺類致癌劑誘發(fā)胃癌發(fā)生的調(diào)控機(jī)制提供新的研究思路。
【關(guān)鍵詞】：亞硝酰胺類致癌劑 MGMT DNA甲基化 基因的表達(dá)調(diào)控 細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R730.23
【目錄】：

• 致謝5-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 縮略語10-12
• 1 引言12-19
• 2 材料和方法19-45
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料19-29
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法29-45
• 3 結(jié)果45-63
• 3.1 亞硝酰胺類致癌劑(MNNG、MNU)刺激誘導(dǎo)的人胃正常上皮細(xì)胞(GES-1)惡性轉(zhuǎn)化模型的建立及鑒定45-49
• 3.2 GES-1惡性轉(zhuǎn)化模型中MNNG、MNU刺激誘導(dǎo)MGMT持續(xù)高表達(dá)49-51
• 3.3 MNNG、MNU刺激不激活MGMT啟動子區(qū)域報告基因的活化51-53
• 3.4 MNNG、MNU刺激引起MGMT啟動子區(qū)域甲基化程度降低53-57
• 3.5 MGMT表達(dá)水平改變調(diào)節(jié)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程57-63
• 4 討論63-67
• 5 展望67-68
• 6 結(jié)論及創(chuàng)新點(diǎn)68-69
• 結(jié)論68
• 創(chuàng)新點(diǎn)68-69
• 參考文獻(xiàn)69-73
• 綜述73-81
• 參考文獻(xiàn)79-81
• 作者簡歷及在校期間取得的科研成果81

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 蔡增琰;潘亞文;尚銀武;李志磊;何蓓;;膠質(zhì)瘤干細(xì)胞耐藥相關(guān)機(jī)制[J];立體定向和功能性神經(jīng)外科雜志;2013年04期

2 李詠梅;袁勇;吳國瑞;趙寧輝;黃曉瑋;趙旭東;徐蔚;;梯度低氧及葡萄糖剝奪對腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡及增殖的影響[J];昆明理工大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2015年02期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 LE DINH VU（黎廷武）;光學(xué)生物傳感的某些新方法研究[D];湖南大學(xué);2013年

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本文編號：587589