發(fā)布時(shí)間：2017-07-28 20:25

  本文關(guān)鍵詞：高強(qiáng)度聚焦超聲消融胰腺原位癌后大鼠胰島結(jié)構(gòu)和內(nèi)分泌功能的轉(zhuǎn)歸

  更多相關(guān)文章： 高強(qiáng)度聚焦超聲 胰腺癌 胰島細(xì)胞 CA199

【摘要】：研究背景高強(qiáng)度聚焦超聲(High intensity focused ultrasound,HIFU)消融是一種非侵入性治療實(shí)體腫瘤的新技術(shù)。它將超聲波作為能量聚焦在體內(nèi),形成直徑為毫米級(jí)的生物學(xué)焦域,通過瞬間高溫效應(yīng)、空化效應(yīng)、機(jī)械效應(yīng)等,使靶組織瞬間升溫達(dá)65℃以上,從而達(dá)到凝固蛋白質(zhì)和殺死細(xì)胞以破壞腫瘤組織的目的。在臨床上已廣泛應(yīng)用于治療各種實(shí)體瘤,特別是針對(duì)不能接受手術(shù)的胰腺癌患者,HIFU消融胰腺癌能明顯緩解患者疼痛,改善患者的生活質(zhì)量的同時(shí)有效延長(zhǎng)患者的生存期。盡管一些初步臨床應(yīng)用證明HIFU治療胰腺癌的效果明確,但由于胰腺是一個(gè)具有內(nèi)外分泌功能的重要器官,它的生理作用和病理變化都與生命息息相關(guān)。有研究顯示胰島的結(jié)構(gòu)若是被破壞,胰島細(xì)胞數(shù)量就會(huì)明顯減少,其內(nèi)分泌的能力也會(huì)降低。盡管有研究表明胰島具有一定的修復(fù)潛力和再生能力,但HIFU在有效治療胰腺癌的同時(shí)會(huì)造成靶區(qū)組織胰島結(jié)構(gòu)的破壞,在機(jī)體吸收凝固性壞死組織的同時(shí)胰島組織結(jié)構(gòu)及其分泌功能是否可能得到修復(fù)?對(duì)此缺乏基礎(chǔ)理論研究。本課題采用化學(xué)誘導(dǎo)劑DMBA建立大鼠胰腺原位癌動(dòng)物模型,從組織學(xué)和血清學(xué)層次分析HIFU消融大鼠胰腺癌后中長(zhǎng)期的大鼠胰腺組織(胰島)結(jié)構(gòu)和分泌功能的變化,探討HIFU消融大鼠胰腺原位癌后的胰島結(jié)構(gòu)和功能的轉(zhuǎn)歸。研究目的1.分析HIFU消融大鼠胰腺原位癌后機(jī)體的胰腺癌惡性表征變化。2.分析HIFU消融大鼠胰腺原位癌后,在3個(gè)月內(nèi),胰島組織學(xué)結(jié)構(gòu)的變化情況,研究胰島結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)歸規(guī)律。3.分析HIFU消融大鼠胰腺原位癌后,3個(gè)月內(nèi),胰島分泌功能的變化,研究胰腺內(nèi)分泌功能的轉(zhuǎn)歸規(guī)律。研究方法1.采用二甲基苯并蒽(7,12-dimethylbenz(a)anthracene,DMBA)原位包埋法誘導(dǎo)大鼠胰腺癌模型,常規(guī)病理組織切片H.E染色,觀察胰腺組織病理變化,7.0T Mrcro-MR影像診斷篩選大鼠胰腺原位癌模型。2.30只胰腺癌SD大鼠隨機(jī)分為HIFU消融實(shí)驗(yàn)組和胰腺癌對(duì)照組、15只同期健康SD大鼠為正常組。采用頻率為10.2 MHz,焦距在1-5 mm,脈沖1000 Hz,功率為5 W的聚焦超聲消融大鼠胰腺癌,觀察3個(gè)月內(nèi)大鼠胰腺腫瘤影像學(xué)變化。分別于消融后即刻,4天,1周,1個(gè)月,3個(gè)月每組隨機(jī)抽取3只大鼠,采用ELISA方法檢測(cè)大鼠血清胰島素、胰高血糖素、CA199水平;4%多聚甲醛固定大鼠胰腺組織,石蠟包埋,常規(guī)組織切片、H.E染色觀察大鼠胰腺組織特征,兩步法免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)組織胰島素,胰高血糖素抗原以及CA199表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.在大鼠胰腺包埋5 mg的DMBA 12個(gè)月后,7.0 T小動(dòng)物核磁共振掃描顯示胰腺中有圓形或橢圓形,直徑為5-10 mm不等的疑似腫塊。大體標(biāo)本也顯示為腫塊。H.E結(jié)果顯示,胰腺腺體萎縮,大量導(dǎo)管增生,導(dǎo)管上皮細(xì)胞呈高柱狀,細(xì)胞核失去極性,核質(zhì)比增大,細(xì)胞間質(zhì)豐富,部分導(dǎo)管呈浸潤(rùn)性生長(zhǎng)組織學(xué)。MRI影像特征顯示DMBA誘導(dǎo)大鼠成瘤率為75%(30/40)。2.經(jīng)H.E染色,光鏡下可見消融后4天、1周實(shí)驗(yàn)組大鼠胰腺組織被大量炎癥細(xì)胞所浸潤(rùn)。消融后1個(gè)月,影像學(xué)顯示腫瘤的最大直徑相比于消融前有縮小,H.E病理組織學(xué)顯示凝固性壞死區(qū)域逐漸被吸收,被吸收部分呈網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。在消融后3個(gè)月,影像學(xué)顯示腫瘤最大直徑進(jìn)一步縮小,組織學(xué)顯示凝固性壞死區(qū)域被大量吸收。在正常大鼠胰腺組織中,CA199抗原表達(dá)陰性,胰腺癌模型對(duì)照組大鼠胰腺癌組織CA199表達(dá)陽性。實(shí)驗(yàn)組在HIFU消融即刻及3個(gè)月內(nèi),大鼠胰腺的消融靶區(qū)組織CA199表達(dá)均為陰性;實(shí)驗(yàn)組大鼠血清CA199水平在消融即刻、消融后4天、1周、1個(gè)月、3個(gè)月分別為17.42 ng/ml,16.21 ng/ml,15.43 ng/ml,14.58 ng/ml,14.52 ng/ml顯著低于對(duì)照組的21.57 ng/ml,22.04 ng/ml,21.56 ng/ml,22.03 ng/ml,21.68 ng/ml(P0.05),且對(duì)照組大鼠血清CA199水平顯著高于正常組13.98 ng/ml,13.99 ng/ml,14.97 ng/ml,14.99 ng/ml,15.01 ng/ml(P0.05)。3.正常對(duì)照組胰島形態(tài)規(guī)則,結(jié)構(gòu)完整。胰島素抗原表達(dá)豐富,呈陽性,著色棕黃,排列規(guī)整。胰高血糖素抗原表達(dá)陽性較弱,著色較淺,但均勻的分布在胰島周圍;胰腺癌對(duì)照組胰島形態(tài)不規(guī)則,且出現(xiàn)不規(guī)則斷帶。胰島素抗原表達(dá)較少,著色較淺。胰高血糖素抗原表達(dá)也較少,分布不均勻;HIFU消融即刻,消融損傷區(qū)胰島形態(tài)結(jié)構(gòu)被完全破壞,在消融邊界處胰島素和胰高血糖素抗原表達(dá)量都明顯降低,實(shí)驗(yàn)組胰島素和胰高血糖素表達(dá)水平顯著低于實(shí)驗(yàn)對(duì)照組和正常組(P0.05);HIFU消融后1個(gè)月,在消融邊界處,可見胰島細(xì)胞形態(tài),但形態(tài)不完整。胰高血糖素和胰島素抗原表達(dá)有所增加,但胰島結(jié)構(gòu)不完整;FUS消融后3個(gè)月,在消融邊界處,與正常組相比,胰島形態(tài)較為規(guī)則。胰島素抗原表達(dá)較多,結(jié)構(gòu)與正常組相比趨于完整。實(shí)驗(yàn)組胰島素表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組(P0.05)。但胰高血糖素抗原表達(dá)仍較少,與正常組之間不具有顯著性差異(P.05)。胰島素和胰高血糖素血清學(xué)結(jié)果表明,HIFU消融即刻,實(shí)驗(yàn)組胰島素水平47.11 m IU/L顯著高于對(duì)照組33.68 m IU/L和正常組37.29 m IU/L(P0.05);對(duì)照組顯著低于正常組(P0.05)。HIFU消融后4天對(duì)照組胰島素水平31.29 m IU/L顯著低于正常組33.29 m IU/L(P0.05)。HIFU消融后1個(gè)月、3個(gè)月實(shí)驗(yàn)組胰島素水平31.86 m IU/L,33.29 m IU/L顯著高于對(duì)照組27.81 m IU/L,28.74 m IU/L(P0.05);對(duì)照組27.81 m IU/L,28.74 m IU/L顯著低于正常組32.03 m IU/L,32.53 m IU/L(P0.05)。而血清胰高血糖素水平僅在消融即刻和消融后4天,實(shí)驗(yàn)組259.52pg/ml,277.21 pg/ml顯著高于對(duì)照組244.91 pg/ml,259.24 pg/ml(P0.05)。結(jié)論1.HIFU消融大鼠胰腺癌后的3個(gè)月內(nèi),在胰腺消融壞死區(qū)域逐漸縮小的同時(shí)胰腺組織表達(dá)CA199水平和血清CA199含量顯著降低,提示HIFU消融胰腺癌可降低腫瘤的惡性程度。2.HIFU消融大鼠胰腺癌,在胰腺腫瘤組織凝固性壞死的同時(shí)靶區(qū)胰島結(jié)構(gòu)損傷,影響a,β細(xì)胞內(nèi)分泌功能。消融3個(gè)月內(nèi),大鼠胰島的形態(tài)結(jié)構(gòu)趨于完善,血清胰島素和胰高血糖素水平趨于正常,表明胰島結(jié)構(gòu)和內(nèi)分泌功能轉(zhuǎn)歸良好。
【關(guān)鍵詞】：高強(qiáng)度聚焦超聲 胰腺癌 胰島細(xì)胞 CA199
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.9
【目錄】：

• 摘要6-9
• Abstract9-14
• 第一章 文獻(xiàn)綜述胰腺癌的早期診斷與治療的研究進(jìn)展14-20
• 1.1 胰腺癌診斷14-16
• 1.1.1 胰腺癌腫瘤標(biāo)志物CA19914-15
• 1.1.2 胰腺癌影像學(xué)診斷15-16
• 1.2 胰腺癌治療16-20
• 第二章 引言20-22
• 第三章 大鼠胰腺癌模型的建立及核磁共振的診斷與篩選22-28
• 3.1 材料與方法22-23
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物22
• 3.1.2 主要試劑22-23
• 3.1.3 主要儀器23
• 3.2 方法23-24
• 3.2.1 動(dòng)物模型23
• 3.2.2 核磁共振檢查23
• 3.2.3 病理組織學(xué)23-24
• 3.3 結(jié)果24-25
• 3.3.1 大鼠胰腺癌的MRI影像學(xué)特征24-25
• 3.3.2 MRI影像篩選的成瘤率25
• 3.4 討論25-28
• 第四章 HIFU消融大鼠胰腺癌后對(duì)腫瘤惡性程度的影響28-36
• 4.1 材料與試劑28-29
• 4.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物28
• 4.1.2 主要試劑28-29
• 4.1.3 主要設(shè)備29
• 4.2 方法29-31
• 4.2.1 實(shí)驗(yàn)分組29-30
• 4.2.2 HIFU設(shè)備及輻照方法30
• 4.2.3 核磁共振監(jiān)控腫瘤大小30
• 4.2.4 胰腺病理組織學(xué)觀察30
• 4.2.5 免疫組化檢測(cè)組織CA199表達(dá)30-31
• 4.2.6 血清CA199水平檢測(cè)31
• 4.2.7 數(shù)據(jù)分析31
• 4.3 結(jié)果31-34
• 4.3.1 MRI監(jiān)控治療后腫瘤最大直徑變化31-32
• 4.3.2 胰腺組織學(xué)觀察32-33
• 4.3.3 血清CA199表達(dá)33-34
• 4.4 討論34-35
• 4.5 結(jié)論35-36
• 第五章 HIFU消融SD大鼠胰腺原位癌后其胰島的重建和功能轉(zhuǎn)歸36-50
• 5.1 材料與方法36-38
• 5.1.1 實(shí)驗(yàn)材料36
• 5.1.2 主要試劑36-37
• 5.1.3 主要設(shè)備37-38
• 5.2 實(shí)驗(yàn)方法38-39
• 5.2.1 實(shí)驗(yàn)分組38
• 5.2.2 HIFU輻照38
• 5.2.3 血清胰島素、胰高血糖素檢測(cè)38
• 5.2.4 胰島形態(tài)觀察38
• 5.2.5 胰島結(jié)構(gòu)觀察38-39
• 5.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析39
• 5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果39-47
• 5.3.1 HIFU消融后各組血清胰島素和胰高血糖素水平變化情況39-40
• 5.3.2 胰島基本形態(tài)觀察40-42
• 5.3.3 a/β 細(xì)胞在胰島結(jié)構(gòu)中的分布42-47
• 5.4 討論47-49
• 5.5 結(jié)論49-50
• 英文縮寫一覽表50-52
• 參考文獻(xiàn)52-59
• 致謝59

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5 保健時(shí)報(bào)記者 王朝建 通訊員 王懿輝;中年突發(fā)糖尿病當(dāng)心胰腺癌[N];保健時(shí)報(bào);2012年

6 上海市腫瘤醫(yī)院胰腺肝膽外科主任醫(yī)師 虞先o，

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