本文關(guān)鍵詞：siRNA敲減Annexin A1對(duì)甲狀腺乳頭狀癌TPC-1細(xì)胞的生物學(xué)特性影響

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【摘要】：目的：(1)用免疫組化方法,檢測(cè)ANXA1 (Arinexin A1)蛋白在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)。(2)檢測(cè)甲狀腺乳頭狀癌TPC-1細(xì)胞中ANX A1基因相關(guān)小干擾RNA (small interference RNA,siRNA)轉(zhuǎn)染效率,從基因水平檢測(cè)當(dāng)特異siRNA轉(zhuǎn)入TPC-1細(xì)胞后的ANXA1基因表達(dá)情況。(3)分析ANX A1基因敲減后對(duì)TPC-1細(xì)胞凋亡、增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移的影響,探索ANX A1基因與TPC-1細(xì)胞的凋亡、增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移等關(guān)系。方法：(1)HE切片選取存檔組織蠟塊甲狀腺乳頭狀癌69例,與之相對(duì)的癌旁組織69例,應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)ANX A1在甲狀腺乳頭狀癌和癌旁組織中的表達(dá)情況。(2)使用siDirect Version2.0軟件設(shè)計(jì)特異ANX A1基因小干擾(siRNA)3條片段,分別為ANXA1-siRNA1、ANX A1-siRNA2、ANX A1-siRNA3和negative-siRNA,用Lipfectamine2000將siRNA轉(zhuǎn)染至TPC-1細(xì)胞內(nèi),計(jì)算轉(zhuǎn)染效率后用RT-PCR檢測(cè)TPC-1細(xì)胞中ANX A1基因敲減前后mRNA的表達(dá)變化,選出ANX A1基因敲減效果最好的siRNA。(3)當(dāng)ANXA1基因敲減后,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)TPC-1細(xì)胞RNA干擾后72h凋亡情況；CCK-8試劑盒法檢測(cè)TPC-1細(xì)胞RNA干擾后24h、48 h、72h及96h后細(xì)胞增殖情況；transwell小室遷移、侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)TPC-1細(xì)胞RNA干擾后遷移和侵襲能力的影響。結(jié)果：(1)甲狀腺乳頭狀癌組織ANX A1蛋白表達(dá)陽性率明顯高于癌旁組織(88.41%VS 9.8%),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)(2)轉(zhuǎn)染后,采用熒光顯微鏡觀察并記錄siRNA轉(zhuǎn)染情況,從而計(jì)算轉(zhuǎn)染效率,經(jīng)直接計(jì)算法(重復(fù)三次),轉(zhuǎn)染效率達(dá)90%左右。(3)TPC-1細(xì)胞轉(zhuǎn)染后,實(shí)驗(yàn)組ANXA1-siRNA1、ANXA1-siRNA2、 ANXA1-siRNA3與空白組、陰性對(duì)照組、脂質(zhì)體組相比,3個(gè)特異性siRNA組的ANXA1基因mRNA表達(dá)水平下降,其中ANX-siRNA3下降最顯著。(4)用ANX-siRNA3對(duì)ANXA1基因敲減后,TPC-1的凋亡較空白組、陰性對(duì)照組增加；細(xì)胞增殖能力較空白組、陰性對(duì)照組減弱；轉(zhuǎn)移和侵襲能力較空白組和陰性對(duì)照組減弱。結(jié)論：本研究發(fā)現(xiàn)在人甲狀腺乳頭狀癌組織中,ANXA1蛋白陽性率明顯高于癌旁組織。在TPC-1細(xì)胞中,ANX A1基因敲減后,ANX A1表達(dá)下調(diào)。同時(shí)可誘導(dǎo)TPC-1細(xì)胞的凋亡、抑制細(xì)胞增殖、減弱細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。提示ANX A1基因可能對(duì)TPC-1細(xì)胞的凋亡、增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移能力有一定的影響。以ANX A1為生物靶標(biāo),為甲狀腺乳頭狀癌的診斷、治療、以及預(yù)后提供了新思路。
【關(guān)鍵詞】：甲狀腺乳頭狀癌 ANX A1 免疫組化 siRNA TPC-1細(xì)胞 凋亡 增殖 侵襲 遷移
【學(xué)位授予單位】：川北醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R736.1
【目錄】：

• 致謝3-5
• 摘要5-7
• abstract7-11
• 前言11-13
• 1 材料與方法13-27
• 2 結(jié)果27-32
• 3 討論32-38
• 4 結(jié)論38-39
• 附圖39-44
• 參考文獻(xiàn)44-48
• 綜述：ANNEXIN Al與腫瘤48-60
• 參考文獻(xiàn)56-60
• 附錄60-61
• 個(gè)人簡歷61-62

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 閻海;;細(xì)胞凋亡研究進(jìn)展[J];中山大學(xué)研究生學(xué)刊(自然科學(xué).醫(yī)學(xué)版);2012年03期

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本文編號(hào)：585506