本文關(guān)鍵詞：乳腺癌細(xì)胞分泌的VEGF誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞免疫功能抑制的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：研究背景隨著惡性腫瘤發(fā)病率的逐漸升高,腫瘤已成為威脅人類健康和生命最主要的疾病之一。據(jù)統(tǒng)計(jì)報(bào)告預(yù)測(cè),2015年美國(guó)將有1,658,370例新發(fā)癌癥病例,并有589,430例死亡病例。近年來(lái),中國(guó)的乳腺癌發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)。在女性腫瘤患者中,乳腺癌的發(fā)病率居所有腫瘤發(fā)病率的第1位,死亡率為第2位。乳腺癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移是一個(gè)多步驟、多因素的過程,它受到腫瘤本身和宿主免疫功能等因素的影響。近年來(lái),隨著對(duì)乳腺癌研究的深入,人們?cè)絹?lái)越認(rèn)識(shí)到宿主的免疫功能在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。乳腺癌細(xì)胞通過分泌VEGF、PGE2和TGF-p等因子和誘導(dǎo)正常宿主細(xì)胞完成免疫抑制功能,故許多腫瘤患者存在免疫功能低下。在被誘導(dǎo)的正常宿主細(xì)胞中,血管內(nèi)皮細(xì)胞不僅是血管與周圍組織間的物理屏障,還可分泌免疫調(diào)節(jié)因子,發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能,因此被認(rèn)為與腫瘤細(xì)胞所誘導(dǎo)的免疫抑制有關(guān),但其具體機(jī)制目前尚不清楚。本研究通過研究人和小鼠的乳腺癌細(xì)胞誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞所分泌免疫因子的變化,旨在探討乳腺癌細(xì)胞對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的誘導(dǎo)作用和免疫抑制作用及其可能的機(jī)制。研究方法乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)培養(yǎng)24h,收集其培養(yǎng)上清離心后備用。血管內(nèi)皮細(xì)胞(]Human umbilical vein endothelial cell, HUVEC)生長(zhǎng)至70-80%融合后,分別給予1640培養(yǎng)基、VEGF及MCF-7的培養(yǎng)上清和SU5416+MCF-7的培養(yǎng)上清進(jìn)行刺激24h,隨后換用1640培養(yǎng)基培養(yǎng)24h后,收集其上清液(條件培養(yǎng)基)一部分用ELISA法測(cè)定血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(Vascular endothelial growth factor, VEGF)、前列腺素E2(Prostaglandin E2, PGE2)、IL-6和IL-12,另一部分刺激外周血T細(xì)胞后,進(jìn)行CCK-8、ELISPOT及流式細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)。30只6～8周齡的雌性BALB/c小鼠隨機(jī)分成3組,分別行第4對(duì)乳腺注射PBS、注射4T1細(xì)胞和注射4T1細(xì)胞+Celecoxib灌胃,作為PBS組(n=10)、4T1組(n=10)及TC組(n=10),建立小鼠乳腺癌模型。所有小鼠眼球摘除法取血,離心后收集血清,應(yīng)用ELISA法分別測(cè)定PBS組、4T1組和TC組的白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)和白介素-12(IL-12)。PBS組和4T1組的肺組織一部分以(q)RT-PCR和Western blot實(shí)驗(yàn)測(cè)定環(huán)氧合酶-2(COX-2)的表達(dá)水平,另一部分分離小鼠肺血管內(nèi)皮細(xì)胞(Mouse pulmonary vascular endothelial cell, MPVEC)并培養(yǎng),用ELISA法測(cè)定培養(yǎng)上清中PGE2的表達(dá)水平。研究結(jié)果1.乳腺癌細(xì)胞誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞免疫抑制因子分泌增加ELISA實(shí)驗(yàn)表明,經(jīng)乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)24h培養(yǎng)上清刺激后,血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC) 24h培養(yǎng)上清(T-sup組)中VEGF、PGE2和IL-6表達(dá)水平較Media組明顯升高。2.乳腺癌細(xì)胞誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞免疫增強(qiáng)因子分泌減少ELISA實(shí)驗(yàn)顯示,經(jīng)MCF-7細(xì)胞24h培養(yǎng)上清刺激后,HUVEC細(xì)胞24h培養(yǎng)上清(T-sup組)中IL-12表達(dá)水平較Media組明顯降低。3.乳腺癌細(xì)胞誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞促進(jìn)T淋巴細(xì)胞凋亡CCK-8實(shí)驗(yàn)顯示,與對(duì)照組比較,以MCF-7細(xì)胞誘導(dǎo)后HUVEC細(xì)胞條件培養(yǎng)基處理T細(xì)胞,24h的O.D.值無(wú)明顯差異,48h的O.D.值降低,表明T細(xì)胞凋亡增加。4.乳腺癌細(xì)胞誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞抑制T淋巴細(xì)胞免疫功能ELISPOT結(jié)果顯示,以MCF-7細(xì)胞誘導(dǎo)后HUVEC細(xì)胞條件培養(yǎng)基處理PBMC(主要為T淋巴細(xì)胞),T淋巴細(xì)胞IFN-y的表達(dá)水平降低。5.乳腺癌細(xì)胞誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞抑制C1)8+T細(xì)胞活化流式細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)顯示,以MCF-7細(xì)胞誘導(dǎo)后HUVEC細(xì)胞條件培養(yǎng)基處理T細(xì)胞24h,IFN-γγ染色陽(yáng)性的CD8+T細(xì)胞比例較對(duì)照組減少,而IFN-7染色陽(yáng)性的CD4+T細(xì)胞比例較對(duì)照組無(wú)明顯差異。6.荷瘤小鼠血液中免疫抑制因子含量增加ELISA結(jié)果顯示,4T1組與PBS組相比,免疫抑制因子IL-6和IL-10的含量升高。7.荷瘤小鼠血液中免疫增強(qiáng)因子含量減少ELISA結(jié)果顯示,4T1組與PBS組相比,免疫增強(qiáng)因子IL-12含量降低。8.乳腺癌細(xì)胞分泌的VEGF在血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌免疫因子中的作用ELISA實(shí)驗(yàn)表明,MCF-724h培養(yǎng)上清中VEGF水平較HUVEC中明顯升高。VEGF組中VEGF、PGE2和IL-6水平較對(duì)照組升高,IL-12水平降低,加入VEGF受體拮抗劑SU5416后,各因子的表達(dá)水平與對(duì)照組無(wú)明顯差異。9.荷瘤小鼠肺組織中COX-2和PGE2表達(dá)上調(diào)(q)RT-PCR和VWestern blot顯示,COX-2在4T1組的表達(dá)均較PBS組上調(diào)。分離的4T1組MPVEC 24h培養(yǎng)上清中,PGE2的水平也較PBS組的表達(dá)水平高。10.Celecoxib拮抗乳腺癌細(xì)胞誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞的免疫抑制作用ELISA結(jié)果顯示,TC組小鼠給予Celecoxib治療后,與4T1組相比,血清中免疫抑制因子IL-6和IL-10的含量降低,IL-12含量升高,與PBS組相比無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論1.乳腺癌細(xì)胞誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞免疫功能抑制。2.乳腺癌細(xì)胞誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞免疫功能抑制可能與VEGF誘導(dǎo)PGE2表達(dá)增高有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：乳腺癌 血管內(nèi)皮細(xì)胞 免疫抑制 前列腺素E2(PGE2) 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.9
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 符號(hào)說(shuō)明13-14
• 研究背景14-16
• 材料與方法16-31
• 結(jié)果31-38
• 討論38-43
• 結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-51
• 致謝51-52
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文52-53
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表53

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 鄭瑩;吳春曉;張敏璐;;乳腺癌在中國(guó)的流行狀況和疾病特征[J];中國(guó)癌癥雜志;2013年08期

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本文編號(hào)：579337