本文關鍵詞：EGFR基因19外顯子缺失突變檢測方法的研究

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【摘要】：目的:利用PCR、酶切及藍白斑篩選技術,通過野生型、突變型質粒混合模擬不同比例檢測EGFR基因19外顯子缺失突變,建立一種快速、靈敏、廉價的EGFR基因診斷技術。方法:根據EGFR基因19外顯子del E746-A750和del L747 S752 ins S缺失突變,即15堿基和18堿基缺失突變?yōu)闄z測靶點,分別設計相關配對引物,構建野生型及突變型質粒模版;設計一組特異性PCR引物,并以EGFR野生型、突變型質粒為模板模擬實際標本中野生型與突變型基因比例,進行插入片段的PCR擴增;結合藍白斑篩選技術原理,野生型閱讀框架中因含有終止密碼子TAA,菌落呈白色,缺失突變型因丟失特定的一段核酸片段而不含有終止密碼子TAA,故菌落呈現藍色,以此確定樣品有無EGFR基因19外顯子的缺失突變;通過限制性內切酶酶切野生型片段,可以減少白色菌落克隆數量,間接富集突變型DNA,提高檢測效率。結果:EGFR基因野生型插入片段分子克隆的菌落為白色,突變型插入片段分子克隆的菌落為藍色。通過模擬野生型、突變型質粒不同比例,實驗得出在僅有萬分之一突變模板濃度(野生模板:突變模板=10000:1)時,該體系仍能檢測到突變基因的存在。結論:本實驗方法在不同比例模板檢測中具有較高的靈敏性和特異性,對腫瘤的早期診斷和腫瘤復發(fā)監(jiān)控具有應用價值,有巨大的經濟和社會效益。
【關鍵詞】：EGFR基因 PCR 藍白斑篩選 限制性內切酶
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-7
• 引言7-9
• 研究材料9-11
• 研究方法11-17
• 研究結果17-23
• 討論23-25
• 結論25-26
• 參考文獻26-28
• 綜述28-35
• 參考文獻32-35
• 致謝35-36

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