本文關(guān)鍵詞：EGFR基因19外顯子缺失突變檢測(cè)方法的研究

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【摘要】：目的:利用PCR、酶切及藍(lán)白斑篩選技術(shù),通過(guò)野生型、突變型質(zhì)�；旌夏M不同比例檢測(cè)EGFR基因19外顯子缺失突變,建立一種快速、靈敏、廉價(jià)的EGFR基因診斷技術(shù)。方法:根據(jù)EGFR基因19外顯子del E746-A750和del L747 S752 ins S缺失突變,即15堿基和18堿基缺失突變?yōu)闄z測(cè)靶點(diǎn),分別設(shè)計(jì)相關(guān)配對(duì)引物,構(gòu)建野生型及突變型質(zhì)粒模版;設(shè)計(jì)一組特異性PCR引物,并以EGFR野生型、突變型質(zhì)粒為模板模擬實(shí)際標(biāo)本中野生型與突變型基因比例,進(jìn)行插入片段的PCR擴(kuò)增;結(jié)合藍(lán)白斑篩選技術(shù)原理,野生型閱讀框架中因含有終止密碼子TAA,菌落呈白色,缺失突變型因丟失特定的一段核酸片段而不含有終止密碼子TAA,故菌落呈現(xiàn)藍(lán)色,以此確定樣品有無(wú)EGFR基因19外顯子的缺失突變;通過(guò)限制性內(nèi)切酶酶切野生型片段,可以減少白色菌落克隆數(shù)量,間接富集突變型DNA,提高檢測(cè)效率。結(jié)果:EGFR基因野生型插入片段分子克隆的菌落為白色,突變型插入片段分子克隆的菌落為藍(lán)色。通過(guò)模擬野生型、突變型質(zhì)粒不同比例,實(shí)驗(yàn)得出在僅有萬(wàn)分之一突變模板濃度(野生模板:突變模板=10000:1)時(shí),該體系仍能檢測(cè)到突變基因的存在。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)方法在不同比例模板檢測(cè)中具有較高的靈敏性和特異性,對(duì)腫瘤的早期診斷和腫瘤復(fù)發(fā)監(jiān)控具有應(yīng)用價(jià)值,有巨大的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益。
【關(guān)鍵詞】：EGFR基因 PCR 藍(lán)白斑篩選 限制性內(nèi)切酶
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R734.2
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-7
• 引言7-9
• 研究材料9-11
• 研究方法11-17
• 研究結(jié)果17-23
• 討論23-25
• 結(jié)論25-26
• 參考文獻(xiàn)26-28
• 綜述28-35
• 參考文獻(xiàn)32-35
• 致謝35-36

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本文編號(hào)：576240