本文關(guān)鍵詞：ORAOV1在結(jié)腸癌中的表達(dá)及意義

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【摘要】：研究背景及目的結(jié)腸癌(CRC,colorectal cancer)是目前發(fā)病率、診斷率均較高的胃腸道惡性腫瘤,好發(fā)于50-65歲之間的人群。據(jù)WHO統(tǒng)計(jì),全球每年新增結(jié)腸癌患者近100萬,而每年有約60萬人口死于結(jié)腸癌。全球數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)顯示:對(duì)于男性而言,結(jié)腸癌的發(fā)病率緊隨肺癌和前列腺癌,位居第三,而對(duì)于女性而言則是位于第二位的惡性腫瘤。結(jié)腸癌給人類健康帶來的威脅極大,嚴(yán)重影響著患者健康及生活質(zhì)量。流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn),影響結(jié)腸癌發(fā)病的因素在發(fā)展中國家和發(fā)達(dá)國家之間不盡相同且具有明顯的地域性,且在發(fā)展中國家其發(fā)病率與診斷率不斷攀升,相較而言,低教育水平、低收入的人群結(jié)腸癌的發(fā)病率更高,這可能與相關(guān)人群的飲食習(xí)慣有關(guān),在東亞國家結(jié)腸癌的發(fā)病與食用腌肉、肥胖、吸煙等因素有關(guān)。有關(guān)結(jié)腸癌發(fā)病機(jī)制的研究很多,目前公認(rèn)的理論為:癌基因與抑癌基因的表達(dá)異常與之關(guān)系密切,但其發(fā)生發(fā)展的具體分子機(jī)制仍未得到闡明。染色體11q13區(qū)域的過度擴(kuò)增現(xiàn)象廣泛存在于各類腫瘤組織中,在肝癌、胃癌及結(jié)腸癌等消化系腫瘤中也同樣存在,且與腫瘤轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)�？谇话┻^表達(dá)蛋白1(ORAOV1,oral cancer overexpressed protein 1)又稱腫瘤過表達(dá)序列1(Tumor Amplified and overexpressed seuqnce 1),編碼基因定位于染色體11q13.3區(qū)域內(nèi),與Cyclin D1編碼基因相鄰,最初發(fā)現(xiàn)于口腔上皮腫瘤中,在體內(nèi)廣泛表達(dá),以肝、胰腺、腎組織腫瘤中表達(dá)較高。既往研究表明,在結(jié)腸癌發(fā)生過程中存在11q13的過度擴(kuò)增,特別是與該區(qū)域的Cyclin D1基因過表達(dá)密切相關(guān),但Cyclin D1基因過表達(dá)不能完全解釋結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制,而ORAOV1的基因定位與Cyclin D1相鄰,且在食管鱗狀細(xì)胞癌的研究中表明:食管癌細(xì)胞中不僅Cyclin D1存在過表達(dá)現(xiàn)象,ORAOV1亦存在過度擴(kuò)增,因此,我們推測(cè)在結(jié)腸癌組織中ORAOV1的表達(dá)也可能發(fā)生變化,并可能參與調(diào)控了結(jié)腸癌細(xì)胞的生物學(xué)行為。為驗(yàn)證上述假設(shè),本研究擬在結(jié)腸癌及其相應(yīng)的癌旁組織中檢測(cè)ORAOV1的表達(dá)變化,并初步探討該基因如何影響結(jié)腸癌細(xì)胞增殖能力和可能的原因,以期為結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制及潛在治療靶點(diǎn)的尋找提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。研究方法1.收集結(jié)腸癌切除術(shù)患者的結(jié)腸癌組織和癌旁組織:經(jīng)中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)第三附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)審查并取得患者及家屬的知情同意后,2013年9月至2015年6月間,我們通過第三軍醫(yī)大學(xué)第三附屬醫(yī)院普外科收集結(jié)腸癌切除術(shù)患者的結(jié)腸癌組織和癌旁組織。收集的標(biāo)本為:3.0×2.0×0.3cm,切成0.5×0.5×0.3cm,一部分保存于液氮中備用,另一部分做石蠟包埋,通過病理組織切片鑒定所收集的組織是否為結(jié)腸癌組織。2.利用人體組織標(biāo)本研究ORAOV1在結(jié)腸癌的表達(dá):(1)提取患者結(jié)腸癌組織和癌旁組織的RNA,逆轉(zhuǎn)錄后在m RNA水平研究ORAOV1是否表達(dá)增高;(2)提取患者的結(jié)腸癌組織和癌旁組織的總蛋白,在蛋白水平研究ORAOV1是否表達(dá)增高。以明確ORAOV1與結(jié)腸的發(fā)生具有相關(guān)性。3.利用Lo Vo和SW480細(xì)胞研究ORAOV1基因促進(jìn)結(jié)腸癌發(fā)生的可能分子機(jī)制:構(gòu)建p GPU6/GFP/Neo-sh-ORAOV1質(zhì)粒和其相應(yīng)的對(duì)照質(zhì)粒,分別轉(zhuǎn)染Lo Vo和SW480細(xì)胞,構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株;通過CCK8和流式細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn),分別檢測(cè)細(xì)胞增殖與凋亡情況,以明確ORAOV1基因的表達(dá)與細(xì)胞增殖和凋亡密切相關(guān)。結(jié)果1.在人結(jié)腸癌組織和癌旁組織的研究:(1)通過對(duì)人結(jié)腸癌組織進(jìn)行H.E.染色對(duì)所收集的結(jié)腸癌標(biāo)本進(jìn)行病理分型,證實(shí):我們所收集的結(jié)腸癌組織絕大部分為腺癌組織。(2)分別提取了結(jié)腸癌切除術(shù)患者的結(jié)腸癌組織和癌旁組織的m RNA和總蛋白,利用RT-q PCR和Western Blot技術(shù)檢測(cè)ORAOV1的表達(dá)情況,證實(shí):不論在m RNA水平還是蛋白水平,與癌旁組織相比,ORAOV1在結(jié)腸癌組織中表達(dá)增高。2.利用Lo Vo和SW480細(xì)胞的研究:(1)成功構(gòu)建了ORAOV1 si RNA-Lo Vo、ORAOV1 si RNA-Lo Vo NC、ORAOV1si RNA-SW480、ORAOV1 si RNA-SW480 NC細(xì)胞株:p GPU6/GFP/Neo-sh-ORAOV1質(zhì)粒和其相應(yīng)的對(duì)照質(zhì)粒,分別轉(zhuǎn)染Lo Vo和SW480細(xì)胞,G418 2000ug/ml篩選細(xì)胞5天后改為半量持續(xù)穩(wěn)壓篩選,提取各細(xì)胞株RNA,利用RT-q PCR檢測(cè)ORAOV1基因的表達(dá)情況。結(jié)果表明:與Lo Vo WT(正常Lo Vo細(xì)胞株)相比,ORAOV1 si RNA-Lo Vo NC細(xì)胞ORAOV1基因表達(dá)無明顯變化,而ORAOV1 si RNA-Lo Vo則顯著降低;在SW480 WT、ORAOV1 si RNA-SW480、ORAOV1 si RNA-SW480 NC細(xì)胞株中的結(jié)果與Lo Vo細(xì)胞株相似。因此,我們成功構(gòu)建了ORAOV1 si RNA-Lo Vo、ORAOV1 si RNA-Lo Vo NC、ORAOV1 si RNA-SW480、ORAOV1 si RNA-SW480 NC細(xì)胞株。(2)CCK8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)ORAOV1 si RNA-Lo Vo、ORAOV1 si RNA-Lo Vo NC、Lo Vo WT、ORAOV1 si RNA-SW480、ORAOV1 si RNA-SW480 NC、SW480 WT細(xì)胞株的增殖情況:連續(xù)培養(yǎng)各細(xì)胞株96h,并于24h,48h,72h,96h進(jìn)行CCK8檢測(cè),結(jié)果表明:不論在Lo Vo細(xì)胞系還是SW480細(xì)胞系,ORAOV1 si RNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞后,ORAOV1低表達(dá),細(xì)胞增殖顯著低于ORAOV1正常表達(dá)組。(3)流式細(xì)胞學(xué)對(duì)各穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株細(xì)胞周期的檢測(cè),結(jié)果表明:在Lo Vo細(xì)胞中,ORAOV1 si RNA-Lo Vo細(xì)胞處于S期的比例要明顯高于ORAOV1si RNA-Lo Vo NC細(xì)胞(45.25%±3.17%,33.93%±2.23%,P0.05)和Lo Vo WT細(xì)胞(45.25%±3.17%,34.56%±2.20%,P0.05),而ORAOV1 si RNA-Lo Vo NC細(xì)胞與Lo Vo WT細(xì)胞則無顯著差異(33.93%±2.23%,34.56%±2.20%,P0.05)。而在SW480細(xì)胞中,結(jié)果顯示:ORAOV1si RNA-SW480細(xì)胞處于的S期比例為54.49%±2.57%,而ORAOV1 si RNA-SW480 NC細(xì)胞處于S期比例僅為40.08%±2.36%,SW480 WT為40.12%±1.93%,與ORAOV1si RNA-SW480 NC細(xì)胞和SW480 WT細(xì)胞相比,ORAOV1 si RNA-SW480 NC細(xì)胞處于S期比例顯著增高,結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而ORAOV1 si RNA-SW480 NC細(xì)胞和SW480 WT細(xì)胞相比較,結(jié)果無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果表明:ORAOV1低水平表達(dá)可引起結(jié)腸癌細(xì)胞細(xì)胞周期發(fā)生S期阻滯,降低增殖能力。(4)流式細(xì)胞學(xué)對(duì)各穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株早期調(diào)亡的檢測(cè),結(jié)果顯示:在Lo Vo細(xì)胞中,ORAOV1 si RNA-Lo Vo細(xì)胞的早期凋亡比例高于ORAOV1 si RNA-Lo Vo NC細(xì)胞(9.13%±1.39%,4.71%±0.65%,P0.05)及Lo Vo WT細(xì)胞(9.13%±1.39%,3.68%±0.36%,P0.05),差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;而ORAOV1 si RNA-Lo Vo NC細(xì)胞與Lo Vo WT細(xì)胞之間的早期凋亡則無明顯變化(4.71%±0.65%,3.68%±0.36%,P0.05)。而在SW480細(xì)胞中相似的結(jié)果。即:ORAOV1 si RNA-SW480細(xì)胞的早期凋亡細(xì)胞比例高于ORAOV1 si RNA-SW480 NC細(xì)胞(15.76%±1.76%,6.74%±0.58%,P0.05),也同樣高于SW480 WT細(xì)胞(15.76%±1.76%,5.82%±0.60%,P0.05),差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。且ORAOV1 si RNA-SW480 NC細(xì)胞組與SW480 WT細(xì)胞之間無明顯差異(6.74%±0.58%,5.82%±0.60%,P0.05)。以上結(jié)果表明:ORAOV1低表達(dá)可增加結(jié)腸癌細(xì)胞Lo Vo及SW480的早期凋亡,從而影響結(jié)腸癌細(xì)胞增殖能力。結(jié)論:(1)ORAOV1基因在人結(jié)腸癌組織中表達(dá)增高。(2)ORAVO1基因敲除后能夠影響細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡,而結(jié)腸癌組織中ORAVO1基因表達(dá)增高,可能通過減少細(xì)胞周期阻滯、減少凋亡而影響結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖能力。
【關(guān)鍵詞】：結(jié)腸癌 細(xì)胞凋亡 細(xì)胞增殖 口腔癌過表達(dá)蛋白1
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.35
【目錄】：

• 縮略語表4-6
• 英文摘要6-9
• 中文摘要9-13
• 第一章 前言13-15
• 第二章 ORAOV1在人結(jié)腸癌組織中的表達(dá)15-28
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料15-19
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法19-24
• 2.3 結(jié)果24-26
• 2.4 討論26-28
• 第三章 ORAOV1對(duì)結(jié)腸癌增殖的影響28-44
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料28-30
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法30-34
• 3.3 結(jié)果34-41
• 3.4 討論41-44
• 全文結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-49
• 文獻(xiàn)綜述 口腔癌過表達(dá)蛋白1在腫瘤細(xì)胞發(fā)生、發(fā)展中的研究49-56
• 參考文獻(xiàn)53-56
• 在讀期間發(fā)表的論文56-57
• 致謝57-58

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1 王毅;王芳;趙宏宇;王陽;周余來;原田守;山田亮;伊東恭悟;;前列腺酸性磷酸酶——結(jié)腸癌主動(dòng)免疫治療新靶點(diǎn)[J];中國老年學(xué)雜志;2008年18期

2 邵世和,謝立蘋,霍龍;硒與結(jié)腸癌研究進(jìn)展[J];北華大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2003年05期

3 程文芳,顧曉紅,錢偉,易粹瓊;結(jié)腸癌中腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體受體的表達(dá)[J];胃腸病學(xué);2003年02期

4 郭艷麗,閆慧明,宋善俊;組織因子在結(jié)腸癌表達(dá)的臨床意義(英文)[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2005年15期

5 李建國;王雙燕;沈若武;王守彪;;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子與結(jié)腸癌的相關(guān)性研究[J];山東醫(yī)藥;2006年07期

6 孫軍;沈磊;羅和生;沈志祥;;結(jié)腸癌瘦素和瘦素受體表達(dá)及其意義[J];中華消化雜志;2006年08期

7 宋e，

本文編號(hào)：570695