本文關(guān)鍵詞：姜黃素聯(lián)合FAPα疫苗對黑色素瘤的影響及其機制探討

  更多相關(guān)文章： 姜黃素 上皮細胞間質(zhì)化 成纖維細胞激活蛋白α 免疫耐受 腫瘤轉(zhuǎn)移

【摘要】：腫瘤間質(zhì)構(gòu)成了腫瘤細胞生長、浸潤轉(zhuǎn)移所必需的微環(huán)境,其已成為腫瘤治療的重要靶點。抑制腫瘤間質(zhì)特異性高表達分子-成纖維細胞激活蛋白α(Fibroblast activation proteinα,FAPα)的表達,能夠促進抗腫瘤因子IFN-γ與TNF-α的釋放而殺死腫瘤細胞。然而包括以FAPα為靶標在內(nèi)的免疫治療策略產(chǎn)生的免疫效應(yīng)分子IFN-γ與TNF-α可分別通過誘導(dǎo)吲哚胺雙加氧酶(Indoleamine2,3-dioxygenase,IDO)的高表達和腫瘤上皮細胞間質(zhì)變(Epithelial-mesenchymal transitions,EMT)而誘發(fā)腫瘤免疫耐受和腫瘤轉(zhuǎn)移。我們研究發(fā)現(xiàn)姜黃素能雙重抑制IFN-γ誘導(dǎo)的IDO表達和TNF-α誘導(dǎo)的黑色素瘤EMT,據(jù)此,本課題首先對姜黃素的上述功能進行進一步的研究,以期為黑色素瘤的防治提供有效的作用靶點。然后采用姜黃素聯(lián)合FAPα疫苗的策略,探討其通過免疫激活和免疫效應(yīng)階段雙層面抑制腫瘤生長,并消除IFN-γ、TNF-α誘導(dǎo)的腫瘤免疫耐受和腫瘤細胞轉(zhuǎn)移的效果,為黑色素瘤的防治提供一條有效的新途徑。綜上所述,本研究的主要目的:首先體外探討姜黃素對IFN-γ誘導(dǎo)的IDO表達和TNF-α誘導(dǎo)的腫瘤EMT的影響,然后體內(nèi)動物實驗研究姜黃素聯(lián)合FAPα疫苗抗黑色素瘤的作用及其機制,以期為黑色素瘤的防治提供有效的作用靶點和防治策略。本研究所采用的研究方法:本研究所采用的研究方法包括:細胞培養(yǎng)、酶聯(lián)免疫吸附、免疫印跡、免疫組化、蛋白原核表達與純化等多種分子生物與免疫學方法和動物實驗。本研究的主要內(nèi)容:1)IPTG誘導(dǎo)包含F(xiàn)APα核心序列片段的原核表達載體p ET28a-FAPαc,表達大量的FAPα核心多肽并加以純化,純化的FAPα核心多肽作為腫瘤疫苗用于后續(xù)動物免疫。2)體外研究姜黃素對IFN-γ誘導(dǎo)的黑素瘤IDO表達及TNF-α誘導(dǎo)的EMT的影響。3)動物體內(nèi)實驗評價姜黃素聯(lián)合FAPα疫苗抗黑色瘤的療效及相關(guān)機制探討。本研究的研究結(jié)果:1)FAPα核心多肽在BL21工程菌中的表達是以包涵體的形式存在,且經(jīng)過洗滌、純化、復(fù)性等工藝后獲得了大量高純度的FAPα核心多肽,其純度99%。2)免疫蛋白印跡結(jié)果表明姜黃素能夠明顯降低IFN-γ誘導(dǎo)的黑色素瘤IDO表達,此外,姜黃素亦能明顯下調(diào)TNF-α誘導(dǎo)的Vimentin的表達水平。3)各實驗組小鼠體重之間差異無統(tǒng)計學意義(p0.01);FAPα疫苗免疫后產(chǎn)生了高效價的抗FAPα抗體(P0.01);FAPα+姜黃素灌胃+Cp G組能明顯延長小鼠生存期和顯著抑制移植瘤的生長(P0.01)。本研究的研究結(jié)論:1)成功獲得FAPα包涵體且純度(99%)已達到后續(xù)實驗對疫苗的純度要求。2)姜黃素能雙重抑制黑色素瘤B16細胞內(nèi)IFN-γ誘導(dǎo)的IDO表達和TNF-α誘導(dǎo)的上皮細胞間質(zhì)化。3)姜黃素聯(lián)合FAPα疫苗能明顯抑制小鼠黑色素移植瘤的生長和顯著延長小鼠的生存期,為抗黑色瘤的防治開辟了一條新的研究思路。
【關(guān)鍵詞】：姜黃素 上皮細胞間質(zhì)化 成纖維細胞激活蛋白α 免疫耐受 腫瘤轉(zhuǎn)移
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R730.51
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 第1章 緒論10-16
• 第2章 材料和方法16-30
• 2.1 材料16-21
• 2.2 方法21-30
• 第3章 實驗結(jié)果30-38
• 第4章 討論38-42
• 第5章 結(jié)論42-44
• 參考文獻44-50
• 綜述50-58
• 參考文獻54-58
• 附錄58-60
• 作者攻讀學位期間的科研成果60-62
• 致謝62

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本文編號：570085