本文關(guān)鍵詞：NS-398抑制結(jié)腸癌HCT-8細(xì)胞增殖及調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)分子表達(dá)研究

  更多相關(guān)文章： 結(jié)腸癌 COX-2選擇性抑制劑 細(xì)胞凋亡 survivin caspase3/7

【摘要】：結(jié)直腸癌(colorectal carcinoma,CRC)作為全球的常見病、多發(fā)病,嚴(yán)重危害人類生命健康。雖然近些年有關(guān)對結(jié)直腸癌的研究已取得了很大的進(jìn)展,但治療效果仍不十分滿意,其發(fā)病率及死亡率仍呈上升趨勢。環(huán)氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)是合成前列腺素的限速酶,在人類多種腫瘤細(xì)胞中存在著過度表達(dá),對腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及侵襲和轉(zhuǎn)移起到了很大的作用。非甾體類抗炎藥(non-steroid anti-inflammatory drugs,NSAIDs)NS-398是特異性COX-2抑制劑,能夠較強抑制COX-2蛋白表達(dá)。近年來研究發(fā)現(xiàn),非甾體類抗炎藥具有抗腫瘤作用,其作用主要是通過抑制COX-2表達(dá)實現(xiàn)的。survivin作為最強的凋亡蛋白抑制因子(inhibitor of apoptosis protein,IAP),可與效應(yīng)分子caspase-3、caspase-7結(jié)合,下調(diào)其活性,進(jìn)而阻止細(xì)胞凋亡。本課題從腫瘤的自主增殖和凋亡失調(diào)的角度出發(fā),研究COX-2選擇性抑制劑誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡的作用靶點及其機(jī)制,為預(yù)防腫瘤發(fā)生及腫瘤的新輔助治療提供理論依據(jù)。本課題以結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT-8為研究對象,觀察COX-2選擇性抑制劑NS-398對癌細(xì)胞增殖及凋亡的影響,研究其對COX-2、survivin以及caspase3/7表達(dá)的調(diào)控,以初步探討其可能分子機(jī)制。應(yīng)用CCK-8法測定NS-398對HCT-8細(xì)胞的抑制率;進(jìn)一步采用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)測定HCT-8細(xì)胞的凋亡率以及Hoechst33342染色觀察凋亡癌細(xì)胞核的形態(tài)改變;免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測NS-398作用前后結(jié)腸癌細(xì)胞COX-2和survivin蛋白的表達(dá);ELISA法檢測NS-398作用前后培養(yǎng)液中前列腺素E_2(prostaglandin E_2,PGE_2)含量的變化;酶標(biāo)儀檢測caspase3/7的活性。通過上述研究探討以下幾個問題:探討COX-2選擇性抑制劑NS-398劑量及其對結(jié)腸癌細(xì)胞的生長抑制率,并進(jìn)一步明確NS-398誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡作用;探討NS-398是否能夠抑制HCT-8細(xì)胞COX-2和survivin蛋白的表達(dá),下調(diào)caspase3/7的活性,及是否能夠降低細(xì)胞液中PGE_2的含量,以初步探討其誘導(dǎo)凋亡的分子機(jī)制。結(jié)果發(fā)現(xiàn),NS-398可抑制結(jié)腸癌HCT-8細(xì)胞的增殖,抑制作用具有時間、濃度依賴性,40,80,160μmol·L~(-1) NS-398作用組間差異有顯著性(P0.05);FCM結(jié)果顯示,40,80,160μmol·L~(-1) NS-398作用24 h后,細(xì)胞凋亡率分別為12%,17%及26%,且呈劑量依賴性,表明NS-398可誘導(dǎo)HCT-8細(xì)胞凋亡;Hoechst33342染色從形態(tài)學(xué)上也得出相一致的結(jié)論;40,80,160μmol·L~(-1) NS-398作用24 h后,免疫細(xì)胞化學(xué)法研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),癌細(xì)胞COX-2、survivin蛋白表達(dá)均由強陽性變?yōu)槿蹶栃?ELISA結(jié)果顯示細(xì)胞培養(yǎng)上清液中PGE_2含量分別為384.915 ng·L~(-1),292.111 ng·L~(-1)及132.408 ng·L~(-1),較對照組時的446.818ng·L~(-1)明顯下降;同時隨著NS-398處理濃度的增加,caspase3/7活性上調(diào),在高濃度時尤為明顯,具有劑量-效應(yīng)關(guān)系。研究結(jié)果表明,COX-2選擇性抑制劑NS-398對結(jié)腸癌細(xì)胞有顯著的生長抑制作用,主要是通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡作用實現(xiàn)的,其機(jī)制可能是在抑制COX-2蛋白表達(dá)的同時抑制survivin蛋白的表達(dá),進(jìn)而上調(diào)caspase3/7的活性,其次NS-398能夠抑制PGE_2生成,從而誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡,這將為預(yù)防腫瘤發(fā)生及腫瘤的新輔助治療提供理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：結(jié)腸癌 COX-2選擇性抑制劑 細(xì)胞凋亡 survivin caspase3/7
【學(xué)位授予單位】：河北北方學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.35
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 英文縮寫10-11
• 前言11-12
• 材料與方法12-19
• 結(jié)果19-21
• 附圖21-25
• 附表25-27
• 討論27-30
• 結(jié)論30-31
• 參考文獻(xiàn)31-35
• 綜述 環(huán)氧合酶-2 抑制劑抗腫瘤作用研究進(jìn)展35-45
• 參考文獻(xiàn)40-45
• 致謝45-46
• 個人簡歷46

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：568521