結(jié)直腸癌組織細(xì)菌分離培養(yǎng)與鑒定及脆弱擬桿菌感染細(xì)胞實驗
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更多相關(guān)文章: 結(jié)直腸癌 細(xì)菌分離鑒定 腸毒性脆弱擬桿菌 KMB_(17)
【摘要】:[目的]在世界范圍內(nèi),結(jié)直腸癌作為惡性腫瘤疾病,以其高發(fā)病率威脅著人類的健康,多年的研究證據(jù)已表明腸道菌群在結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要的促進(jìn)作用。本研究通過對結(jié)直腸癌組織中的厭氧菌進(jìn)行分離培養(yǎng)與鑒定,了解組織中菌群的結(jié)構(gòu)及組分;鑒定與結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展相關(guān)的核心腸道菌群,篩選與結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切的細(xì)菌作為研究對象;通過細(xì)菌感染細(xì)胞實驗,了解分離所得腸毒性脆弱擬桿菌對KMB17細(xì)胞的感染能力。[方法]采集51例2014年至2015年結(jié)直腸癌患者手術(shù)的組織樣本;在厭氧條件下分離樣本中的細(xì)菌,經(jīng)PCR擴(kuò)增細(xì)菌16SrRNA基因,利用16SrRNA基因可變區(qū)菌屬間變異性鑒定細(xì)菌種屬;通過分離得到細(xì)菌的檢出率確定結(jié)直腸癌組織中的核心菌群;利用分離得到的腸毒性脆弱擬桿菌感染KMB17細(xì)胞,通過透射電鏡和免疫熒光法觀察感染情況。[結(jié)果]本實驗從組織樣本中經(jīng)厭氧培養(yǎng)分離鑒定出172株、35種細(xì)菌,其中費格森埃希菌、糞腸球菌、脆弱擬桿菌、多形擬桿菌等檢出率較高,是結(jié)直腸癌組織樣本中的核心菌群;通過透射電鏡及免疫熒光檢測均可在細(xì)胞內(nèi)觀察到腸毒性脆弱擬桿菌,證實腸毒性脆弱擬桿菌成功進(jìn)入胞內(nèi)感染KMB17細(xì)胞。[結(jié)論]在結(jié)直腸癌腫瘤組織樣本中致病菌或條件致病菌較益生菌在種類數(shù)量上都有一定優(yōu)勢,費格森埃希菌、糞腸球菌、脆弱擬桿菌、索氏志賀氏菌等致病菌和條件致病菌在結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展過程中可能起著重要作用;分離所得腸毒性脆弱擬桿菌能成功進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)感染KMB17細(xì)胞。
【關(guān)鍵詞】:結(jié)直腸癌 細(xì)菌分離鑒定 腸毒性脆弱擬桿菌 KMB_(17)
【學(xué)位授予單位】:昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2016
【分類號】:R735.34
【目錄】:
- 縮略詞表5-6
- 中文摘要6-7
- 英文摘要7-9
- 前言9-13
- 材料和方法13-24
- 1 材料13-15
- 1.1 組織樣本13
- 1.2 產(chǎn)腸毒素的脆弱擬桿菌13
- 1.3 KMB_(17)細(xì)胞13
- 1.4 實驗動物13
- 1.5 設(shè)備與試劑13-15
- 2 方法15-24
- 2.1 組織樣本中厭氧菌及兼性厭氧菌的分離培養(yǎng)與鑒定15-20
- 2.2 ETBF對KMB_(17)細(xì)胞的感染實驗20-24
- 結(jié)果24-33
- 1 癌旁組織樣本細(xì)菌分離情況24
- 2 結(jié)直腸癌組織樣本中細(xì)菌分離情況24-25
- 3 細(xì)菌檢出數(shù)及檢出率25-29
- 4 ETBF鑒定結(jié)果29
- 5 感染后倒置顯微鏡下細(xì)胞狀態(tài)觀察29-30
- 6 透射電鏡觀察結(jié)果30-32
- 7 免疫熒光檢測結(jié)果32-33
- 討論33-39
- 結(jié)論39-40
- 參考文獻(xiàn)40-49
- 附錄49-52
- 綜述52-64
- 參考文獻(xiàn)60-64
- 攻讀學(xué)位期間獲得的學(xué)術(shù)成果64-65
- 致謝65
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