本文關(guān)鍵詞：二甲雙胍抑制前列腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲并增加對紫杉醇敏感性的研究

  更多相關(guān)文章： 前列腺癌 二甲雙胍 侵襲 遷移 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化

【摘要】：研究背景：前列腺癌(Prostate cancer, PCa)在歐美許多國家是男性最常見的惡性腫瘤之一,占男性癌癥死因的第二位。前列腺癌的發(fā)病率在全球分布不平衡,我們國家的發(fā)病率雖然低于西方國家,但是近年來,隨著人口老齡化和生活條件的改善,發(fā)病率呈現(xiàn)上升趨勢。從微觀上講,和大多數(shù)腫瘤一樣,前列腺癌發(fā)病的病因非常復(fù)雜,是一個涉及多基因的過程。其中,染色體畸變起主導(dǎo)作用,原癌基因的激活與抑癌基因的失活也起到重要作用。從宏觀上講,前列腺癌的發(fā)病受到年齡、種族和家庭遺傳的影響,同時也與激素、營養(yǎng)有關(guān)。在前列腺癌的治療方面,由于前列腺癌的生長發(fā)展都具有雄性激素依賴性,所以在早期都采用雄激素阻斷療法(androgen deprivation therapy, ADT),且治療效果不錯,但是經(jīng)過一段時間的雄激素剝奪療法后,幾乎所有的前列腺癌都轉(zhuǎn)化成雄性激素非依賴的前列腺癌(androgen- independent prostate cancer, AIPC),導(dǎo)致治療困難,以及治療效果欠佳,患者預(yù)后不良。根治性前列腺切除術(shù)與局部照射對前列腺癌早期患者是兩種有效的治療方法,如果輔助以內(nèi)分泌治療則有益于提高療效和存活率。二甲雙胍是一種Ⅱ型糖尿病患者口服的一線類降糖藥物。二甲雙胍降低血糖的機制可總結(jié)為：通過降低肝葡萄糖的產(chǎn)生來降低血糖水平；通過增加骨骼肌對葡萄糖的攝取和利用降血糖；以及通過降低外周組織對胰島素的抵抗和抑制肝糖異生。其最常見的副作用是胃腸道反應(yīng),最嚴(yán)重的毒副作用是乳酸性酸中毒。二甲雙胍具有廉價、安全、不良反應(yīng)少、以及患者耐受性好等特性。自從2005年Evans等首次研究發(fā)現(xiàn)二甲雙胍能降低糖尿病患者的腫瘤發(fā)生率后,近年來,二甲雙胍已經(jīng)作為潛在的抗癌藥物成為研究的熱點。目前,大量文獻(xiàn)報道均證實,二甲雙胍在多種不同類型的腫瘤中有抗癌作用,其中包括前列腺癌、肝癌、肺癌、乳腺癌、食管癌、鼻咽癌、結(jié)腸癌和惡性黑色素瘤等。在前列腺癌中,有研究顯示二甲雙胍可抑制前列腺癌細(xì)胞系的增殖,誘導(dǎo)其發(fā)生凋亡和阻滯細(xì)胞周期在特定的時期及其作用的機制。還有部分研究表明,二甲雙胍與脂聯(lián)素、2DG (2-Deoxyglucose,脫氧葡萄糖)和比卡魯胺的協(xié)同抗腫瘤作用。但是到目前為止,二甲雙胍對前列腺癌細(xì)胞的遷移、侵襲,以及與EMT (Epithelial mesenchymal transform,上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化)和對化療藥物紫杉醇的增效作用尚不清楚。目的：本課題應(yīng)用體外實驗?zāi)Ｐ?研究二甲雙胍對前列腺癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力的影響,以及對前列腺癌細(xì)胞化療敏感性的影響,以期為前列腺癌的臨床治療提供新的實驗依據(jù)。方法：1應(yīng)用MTS的方法檢測二甲雙胍,以及二甲雙胍和紫杉醇聯(lián)合用藥對前列腺癌細(xì)胞增殖作用的影響。2應(yīng)用劃痕實驗和transwell侵襲小室檢測二甲雙胍對前列腺癌細(xì)胞系遷移和侵襲能力的影響。3應(yīng)用Western blot的方法在前列腺癌中檢測二甲雙胍對EMT相關(guān)標(biāo)志性marker的影響。4應(yīng)用Western blot的方法在前列腺癌中檢測二甲雙胍抑制腫瘤細(xì)胞生長和遷移,以及增加紫杉醇敏感性的相關(guān)的信號通路。結(jié)果：MTS的結(jié)果顯示二甲雙胍抑制前列腺癌親本細(xì)胞及其耐藥細(xì)胞的增殖,并呈時間及濃度依賴關(guān)系。二甲雙胍與紫杉醇聯(lián)合用藥的MTS結(jié)果表明除了PC3細(xì)胞之外,紫杉醇組與紫杉醇聯(lián)合二甲雙胍組相比,紫杉醇聯(lián)合二甲雙胍組的細(xì)胞增殖抑制作用更明顯,提示二甲雙胍可能能夠提高細(xì)胞對紫杉醇的敏感性。劃痕實驗和transwell侵襲實驗結(jié)果顯示,加藥組細(xì)胞在15小時和24小時平均遷移距離明顯減少(P0.05),在相應(yīng)的時間段后DU145, DU145-TxR, PC3, PC3-TxR的侵襲細(xì)胞的數(shù)量明顯減少(P0.05)。Western blot的方法檢測結(jié)果顯示二甲雙胍逆轉(zhuǎn)前列腺癌的上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化而影響其生物學(xué)功能。信號通路蛋白檢測發(fā)現(xiàn),二甲雙胍處理后, DU145, PC3細(xì)胞的P-AMPK的表達(dá)增加,AMPK總蛋白水平不變,而DU145-TxR和PC3-TxR的P-AMPK和AMPK,總蛋白表達(dá)未發(fā)現(xiàn)明顯的表達(dá)差異,除DU145-TxR細(xì)胞的P-4E-BP1表達(dá)水平不變之外,其他細(xì)胞表達(dá)都明顯降低,總蛋白4E-BP1表達(dá)水平不變。結(jié)論：二甲雙胍抑制前列腺癌細(xì)胞的增殖,減小其遷移和侵襲能力,還能增加前列腺癌細(xì)胞對紫杉醇的敏感性,這些生物學(xué)行為的變化可能與二甲雙胍逆轉(zhuǎn)上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的分子機制有關(guān),而這一機制可能通過活化AMPK信號通路和抑制mTOR信號通路實現(xiàn)的。
【關(guān)鍵詞】：前列腺癌 二甲雙胍 侵襲 遷移 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.25
【目錄】：

• 英文縮寫一覽表4-6
• 中文摘要6-10
• ABSTRACT10-13
• 前言13-16
• 實驗材料與方法16-30
• 1. 實驗材料16-20
• 2. 實驗方法20-30
• 實驗結(jié)果30-42
• 1. 二甲雙胍抑制前列腺癌細(xì)胞系DU145,DU145-TxR,PC3,PC3-TxR的增殖30-31
• 2. 二甲雙胍減弱前列腺癌細(xì)胞的遷移能力31-32
• 3. 二甲雙胍減弱前列腺癌細(xì)胞的侵襲能力32-33
• 4. 二甲雙胍抑制前列腺癌的上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT)33-35
• 5. 二甲雙胍抑制前列腺癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和EMT轉(zhuǎn)化的機制35-37
• 6. 二甲雙胍增加前列腺癌細(xì)胞系DU145, DU145-TXR, PC3-TxR對紫杉醇的敏感性37-38
• 7. 二甲雙胍逆轉(zhuǎn)耐藥前列腺癌細(xì)胞對紫杉醇敏感性機制的初步研究38-42
• 討論42-46
• 全文總結(jié)46-47
• 參考文獻(xiàn)47-57
• 綜述 二甲雙胍勒向惡性腫瘤多種信號通路57-86
• 引言58
• 1. 激活A(yù)MPK信號通路58-60
• 2. 抑制mTOR信號通路途徑60-62
• 3. 抑制胰島素樣生長因子（IGF)信號通路62-63
• 4. 二甲雙狐在抗癌中對其他信號通路的抑制63-65
• 5. 二甲雙胍勒I向腫瘤干細(xì)胞65-66
• 總結(jié)和展望66-68
• 參考文獻(xiàn)68-86
• 個人簡歷86-87
• 致謝87-88

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