發(fā)布時(shí)間：2017-07-20 09:14

  本文關(guān)鍵詞：VEGFA和VEGFR1基因Poly-miRTS與中、晚期非小細(xì)胞肺癌化療后療效和預(yù)后關(guān)聯(lián)性研究

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【摘要】：在全世界范圍內(nèi),當(dāng)今死亡率最高的惡性腫瘤是肺癌。肺癌已對(duì)人類的健康和生命產(chǎn)生了嚴(yán)重的威脅,并且其發(fā)病率和死亡率的發(fā)展趨向呈逐年上漲,其中80%為非小細(xì)胞肺癌(Non-small cell lung cancer, NSCLC)。由于確診時(shí)大多數(shù)病例已經(jīng)進(jìn)展到中、晚期階段,因此無法采用檢測(cè)某些腫瘤組織的蛋白表達(dá)水平及RNA水平的方法來預(yù)測(cè)療效和預(yù)后。任何器官和組織的生長(zhǎng)都離不開血管所提供的營養(yǎng)物質(zhì),因此肺部的腫瘤組織生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移也不例外。當(dāng)腫瘤組織大于1-2mm3時(shí),為了維持腫瘤無限惡性增殖的能力,機(jī)體會(huì)首先激發(fā)血管生成,同時(shí)腫瘤組織對(duì)周圍成熟的血管產(chǎn)生刺激效應(yīng),新生血管以出芽的方式生成,并進(jìn)入腫瘤實(shí)質(zhì)內(nèi),為腫瘤組織供給營養(yǎng)成分并帶走代謝產(chǎn)物。其中最強(qiáng)的刺激血管生成的因子是血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factors, VEGF), VEGF可以直接對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生作用,促使血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖,增強(qiáng)血管的通透性。近年來大量研究證實(shí),NSCLC的發(fā)生發(fā)展與基因轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后的調(diào)控異常具有相關(guān)性。并且近年來大量研究把微小RNA(microRNA, miRNA)的功能作為重點(diǎn)方向。miRNA不僅僅是一段高度保守的核酸序列,也是能調(diào)節(jié)真核基因表達(dá)的一類分子,主要在轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)錄后水平對(duì)靶mRNA的表達(dá)進(jìn)行調(diào)控,特別是在惡性腫瘤的發(fā)展過程中miRNA參與了細(xì)胞增殖、凋亡、轉(zhuǎn)移等過程。目的：腫瘤的血管生成關(guān)鍵因素是血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A,被公認(rèn)為是最強(qiáng)的血管生成刺激因子,它是由腫瘤細(xì)胞或基質(zhì)細(xì)胞分泌的血管生成因子所誘導(dǎo)生成,主要在新生血管的過程中發(fā)揮作用。VEGF與3種血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體結(jié)合,它們分別是：VEGFR1、VEGFR2和VEGFR3,這些受體均為酪氨酸激酶受體。其中,在調(diào)節(jié)單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的游走方面VEGFR1有部分作用,另外,VEGFR1發(fā)生剪接作用后形成的剪接體能夠結(jié)合到VEGFA上,與VEGFR2發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合反應(yīng),以此阻礙VEGFA與VEGFR2相互結(jié)合。本研究旨在剖析VEGFA和VEGFR1基因Poly-miRTS分布頻率與中、晚期NSCLC化療后的療效和預(yù)后的關(guān)系,為尋找能預(yù)測(cè)NSCLC化療后療效和生存率的標(biāo)記物奠定理論基礎(chǔ)。方法：利用miRNASNP預(yù)測(cè)軟件和NCBI-SNP數(shù)據(jù)庫,在篩選VEGFA和VEGFR1基因中,篩選出野生型和變異型等位基因與miRNA結(jié)合能差異(|AAG|)大于5.27 kcal/mol以及中國人群中次要等位基因頻率(MAF)5%的11個(gè)Poly-miRTS.本研究利用PCR-RFLP方法進(jìn)行基因分型,觀察上述Poly-miRTS分布頻率與NSCLC化療后生存率和療效的影響,并采用熒光素酶檢測(cè)方法來探究miRNA對(duì)靶mRNA產(chǎn)生的影響,探討miRNA對(duì)不同基因型產(chǎn)生的調(diào)節(jié)作用。最后利用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件,來對(duì)實(shí)驗(yàn)所得的結(jié)果和數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和分析,判斷實(shí)驗(yàn)得出的結(jié)果是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果：本研究結(jié)果顯示,VEGFA和VEGFR1基因的11個(gè)Poly-miRTS中只有VEGFA-rs3025039CT在總生存率(overall survival, OS)和無病生存率(disease freesurvival, DFS)上有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(OS以Referent model分析Log-rank p為0.005；DFS以Referent model分析Log-rank p為0.03)。功能試驗(yàn)結(jié)果顯示VEGFA-rs3025039C等位基因啟動(dòng)子活性高于rs3025039T等位基因,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,p為0.003。本研究發(fā)現(xiàn)的rs3025039等位基因,可能作為預(yù)測(cè)中、晚期NSCLC患者化療后生存率的標(biāo)記物,并為開發(fā)能預(yù)測(cè)NSCLC患者化療后生存率的單核苷酸多態(tài)性芯片提供理論基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：非小細(xì)胞肺癌 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A 總生存率 無病生存率 次要等位基因頻率
【學(xué)位授予單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R734.2
【目錄】：

• 縮略詞及符號(hào)6-7
• 摘要7-10
• 英文摘要10-12
• 前言12-16
• 第一章 實(shí)驗(yàn)材料16-19
• 1.1 儀器16
• 1.2 藥品及溶液配置16-17
• 1.2.1 試劑16
• 1.2.2 溶液的配置16-17
• 1.3 患者17-19
• 第二章 實(shí)驗(yàn)方法19-26
• 2.1 Poly-miRTS篩選19-20
• 2.2 PCR-RFLP引物設(shè)計(jì)和基因分型20-21
• 2.3 丙烯酰胺凝膠制備21
• 2.4 熒光素酶檢測(cè)21-25
• 2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理25-26
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-28
• 3.1 總生存率和無病生存率26
• 3.2 VEGFA rs3025039C>T熒光素酶活性26-28
• 第四章 討論28-32
• 結(jié)論32-33
• 參考文獻(xiàn)33-38
• 致謝38-39
• 綜述39-60
• 參考文獻(xiàn)52-60

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 徐鍵;VEGF及其生殖調(diào)節(jié)功能[J];國外醫(yī)學(xué).婦產(chǎn)科學(xué)分冊(cè);2001年03期

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本文編號(hào)：567286