本文關(guān)鍵詞：Bmi-1促進(jìn)乳腺癌侵襲遷移分子機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： Bmi-1 乳腺癌細(xì)胞 侵襲 遷移

【摘要】：背景：乳腺癌是一種常見的嚴(yán)重危害女性身心健康的惡性腫瘤。最近統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示,全球每年約有120萬婦女被檢查出患有乳腺癌,其中每年大約有50萬女人患者死于乳腺癌。在北美、西歐等發(fā)達(dá)國家,女性惡性腫瘤中乳腺癌的發(fā)病率居首位。而在發(fā)展中國家,特別是中國每年的發(fā)病率更是呈上升趨勢,并有年輕化趨勢�，F(xiàn)在對乳腺癌的治療,主要結(jié)合手術(shù)、化療及放療等治療手段,雖然有了很大的進(jìn)步,但乳腺癌預(yù)后仍較差,且對復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的乳腺癌治療效果十分有限。Bmi-1基因是1991年在鼠淋巴細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的多梳基因(polycomb group genes, PcG)家族的重要成員之一。Bmi-1廣泛表達(dá)于多種腫瘤中并與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),已有研究表明Bmi-1在乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌患者中異常表達(dá)。在乳腺癌中Bmi-1的mRNA及蛋白水平均高表達(dá),且Bmi-1與乳腺癌進(jìn)展相關(guān)。為了進(jìn)一步研究Bmi-1在乳腺癌侵襲遷移中發(fā)揮的作用,我們利用低表達(dá)Bmi-1的乳腺癌細(xì)胞株BT-474構(gòu)建Bmi-1過表達(dá)的穩(wěn)定細(xì)胞株,研究Bmi-1過表達(dá)對乳腺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響,研究結(jié)果有望為探討乳腺癌治療的新靶點奠定基礎(chǔ)。目的：探討B(tài)mi-1在乳腺癌侵襲遷移中的作用及其分子機(jī)制研究方法：設(shè)計并化學(xué)合成了針對Bmi-1的小干擾RNA,轉(zhuǎn)染惡性程度較高的乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231,利用實時熒光定量PCR和Western Blot分別mRNA和蛋白水平檢測Bmi-1基因的表達(dá)。體外通過Transwell小室、Matrigel膠模型,觀察Bmi-1被沉默后對乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231侵襲、轉(zhuǎn)移能力的影響。根據(jù)GenBank中人源Bmi-1的mRNA序列,設(shè)計引物,構(gòu)建Bmi-1真核表達(dá)載體GV144-Bmi-1,將其轉(zhuǎn)染乳腺癌細(xì)胞株BT474,G418篩選建立過表達(dá)Bmi-1的穩(wěn)定細(xì)胞株。實時熒光定量PCR和Western blot檢測Bmi-1的mRNA和蛋白表達(dá)水平,Matrigel和Transwell侵襲小室模型檢測轉(zhuǎn)染和未轉(zhuǎn)染BT474細(xì)胞體外侵襲和轉(zhuǎn)移能力的變化。結(jié)果：設(shè)計合成的siRNA成功轉(zhuǎn)染MDA-MB-231, qRT-PCR和Western結(jié)果顯示,Bmi-1-siRNA轉(zhuǎn)染組Bmi-1基因表達(dá)水平被有效抑制;對照組相比,Bmi-1-siRNA轉(zhuǎn)染組的細(xì)胞侵襲遷移數(shù)目明顯下降,Bmi-1被沉默后促進(jìn)MDA-MB-231田胞上皮標(biāo)志物E-cadherin的表達(dá),抑制了間質(zhì)標(biāo)志物N-cadherin和Vimentin的表達(dá)。成功構(gòu)建人源Bmi-1真核表達(dá)載體GV144-Bmi-1,轉(zhuǎn)染BT474細(xì)胞后,獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株。實時熒光定量PCR和Western blot結(jié)果顯示,與空載體組相比,實驗組Bmi-1的mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯增高(P0.05)。Bmi-1過表達(dá)后,遷移能力明顯增強(qiáng)、穿膜細(xì)胞數(shù)明顯增多(P0.05)。結(jié)論：抑制Bmi-1基因的表達(dá)可抑制MDA-MB-231細(xì)胞EMT的發(fā)生,進(jìn)而降低了細(xì)胞的侵襲遷移的能力。過表達(dá)Bmi-1穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建成功,Bmi-1基因過表達(dá)可顯著提高乳腺癌細(xì)胞株BT474的體外侵襲遷移能力。
【關(guān)鍵詞】：Bmi-1 乳腺癌細(xì)胞 侵襲 遷移
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-13
• 前言13-16
• 第一部分 Bmi-1基因沉默對乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231侵襲遷移影響16-30
• 1 材料與方法16-22
• 2 結(jié)果22-29
• 3 討論29-30
• 第二部分 Bmi-1真核過表達(dá)載體的構(gòu)建及其對乳腺癌細(xì)胞BT474的影響30-41
• 1 材料與方法30-33
• 2 結(jié)果33-39
• 3 討論39-41
• 參考文獻(xiàn)41-43
• 文獻(xiàn)綜述43-51
• 參考文獻(xiàn)46-51
• 致謝51-52
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文52

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號：566481