本文關(guān)鍵詞：Btk及NFκB抑制劑對急淋小鼠疾病轉(zhuǎn)歸的影響及其作用機制的探討

  更多相關(guān)文章： 急性B淋巴細胞白血病(B-ALL) Btk NFκB PCI-32765 Bortezomib Ara-c B-ALL-NOD/SCID小鼠

【摘要】：目的:通過觀察Btk及NFκB抑制劑對急性B淋巴細胞白血病-NOD/SCID(BALL-NOD/SCID)模型小鼠疾病轉(zhuǎn)歸及生存期的影響,研究其可能的作用機制,探討B(tài)tk及NFκB抑制劑靶向治療急性淋巴細胞白血病(ALL)的可行性及臨床意義。方法:1.B-ALL-NOD/SCID小鼠模型的構(gòu)建:4~5周齡NOD/SCID小鼠尾靜脈注射5×106個Nalm-6細胞(0.2ml),無菌層流柜中飼養(yǎng)。觀察小鼠白血病發(fā)病情況;利用流式細胞術(shù)檢測NOD/SCID小鼠移植Nalm-6細胞后外周血中CD10+CD19+細胞占有核細胞的比例。2.PCI-32765、Bortezomib和Ara-c對B-ALL-NOD/SCID模型小鼠疾病轉(zhuǎn)歸的影響及其機制:將小鼠隨機分為:空白組(未建模組)、B-ALL-NOD/SCID模型小鼠又分為:對照組(未加藥組)、單藥組(PCI-32765、Bortezomib、Arac)、兩藥聯(lián)用組(PCI-32765及Bortezomib)及三藥聯(lián)用組(PCI-32765、Bortezomib及Ara-c),于不同時間點(3天、7天、15天)加藥,無菌層流柜中飼養(yǎng),觀察小鼠白血病發(fā)病情況、生存期、脾臟大小、重量變化及病理形態(tài)改變。于小鼠瀕死前或死亡后即行解剖,留取骨髓細胞,瑞氏染色觀察有無異常的白血病細胞;脾臟常規(guī)病理切片,觀察異常白血病細胞在脾臟中的浸潤情況;Western Blot檢測各組脾臟細胞Btk、NFκB、凋亡蛋白caspase-3、抗凋亡蛋白BCL-XL、CIAP-1表達的變化。免疫組化檢測脾臟細胞Btk、NFκB蛋白的表達。結(jié)果:1.成功構(gòu)建B-ALL-NOD/SCID模型小鼠:1.1 NOD/SCID小鼠移植后7天,流式細胞術(shù)檢測外周血中CD10+CD19+細胞占有核細胞細胞的比例大于1%,提示小鼠生物學(xué)發(fā)病。1.2 NOD/SCID小鼠移植后15天,開始出現(xiàn)食欲減退,后肢癱瘓,弓背抬高等癥狀,提示臨床發(fā)病。1.3白血病小鼠的平均生存期:(18.40±0.89)天。2.Bortezomib、PCI-32765和Ara-c對B-ALL-NOD/SCID小鼠疾病轉(zhuǎn)歸的影響及其機制:2.1 NOD/SCID小鼠移植Nalm-6細胞3天后,單藥應(yīng)用Bortezomib(1mg/kg)、PCI-32765(12.5mg/kg)、Ara-c(10mg/kg),各組小鼠生存期分別為(22.70±0.37天)、(22.30±0.52天)、(21.33±0.67天),Bortezomib和PCI-32765兩藥聯(lián)用組生存期為(28.00±0.60天),Bortezomib、PCI-32765和Ara-c三藥聯(lián)用組生存期為(31.50±1.23天),與對照組小鼠生存期(18.67±0.42天)相比,生存期均顯著延長(p0.05)。2.2 NOD/SCID小鼠移植Nalm-6細胞7天后,單藥應(yīng)用Bortezomib、PCI-32765小鼠生存期分別為(21.83±0.70天)、(21.67±0.42天),Bortezomib和PCI-32765兩藥聯(lián)用組生存期為(24.17±0.80天),與對照組小鼠生存期(18.40±0.40天)相比,生存期均顯著延長(p0.05)。2.3 NOD/SCID小鼠移植Nalm-6細胞15天后,單藥應(yīng)用Bortezomib、PCI-32765后B-ALL-NOD/SCID小鼠的生存期比對照組有所延長,但并無統(tǒng)計學(xué)差異;單用Ara-c及聯(lián)用Bortezomib、PCI-32765和Ara-c生存期分別為(21.83±0.48天)、(23.67±0.71天),明顯高于對照組(18.40±0.40天)及單藥組(p0.05)。2.4單藥及聯(lián)合應(yīng)用Bortezomib和PCI-32765,均可降低小鼠脾臟細胞Btk及NFΚB的表達,病理組織各組免疫組化平均累積光密度值(IOD)分別為Btk:(73890.18±1911.34、74300.38±1516.14,36039.81±2894.98)vs對照組(120348.30±9881.02),(p0.05),NFκB:(73379.62±2121.27,74184.62±2208.24,33857.30±2789.34)vs對照組(109770.90±6849.65),(p0.05).Western Blot檢測示單藥及聯(lián)合用藥組Btk、NFκB及BCL-XL、CIAP-1表達水平下降(p0.05),caspase-3表達水平升高,兩藥聯(lián)用作用更加明顯(p0.01)。結(jié)論:1.利用4~5周雌性NOD/SCID小鼠尾靜脈注射5×106個Nalm-6細胞可成功建立B-ALL-NOD/SCID小鼠模型,生物學(xué)發(fā)病時間為7天,臨床發(fā)病時間為15天。平均生存期為(18.40±0.89)天。該模型的構(gòu)建具有簡便,易行,成模率高,重復(fù)性好等特點,是一種理想的用于ALL發(fā)病機制研究及臨床化療方案篩查的動物模型。2.Bortezomib和PCI-32765均可明顯延長B-ALL-NOD/SCID小鼠的生存期,兩者具有協(xié)同作用,同時可縮小脾臟。其機制可能是通過抑制Btk、NFΚB的表達,從而抑制NFκB的核轉(zhuǎn)錄,阻止NFκB的持續(xù)激活,下調(diào)抗凋亡蛋白BCLXL、CIAP-1的表達,上調(diào)凋亡蛋白caspase-3的表達,抑制白血病細胞增殖,促進白血病細胞的凋亡,發(fā)揮抗白血病效應(yīng)。3.化療藥物Ara-c與靶向藥物Bortezomib、PCI-32765聯(lián)用具有協(xié)同抗白血病作用,提示臨床上可聯(lián)合使用化療藥物與靶向藥物治療急性淋巴細胞白血病,以增強治療效果。
【關(guān)鍵詞】：急性B淋巴細胞白血病(B-ALL) Btk NFκB PCI-32765 Bortezomib Ara-c B-ALL-NOD/SCID小鼠
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R733.71
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-10
• 引言10-13
• 第一部分 人急性B淋巴細胞白血病-NOD/SCID小鼠模型的建立13-24
• 引言13-14
• 材料與方法14-17
• 結(jié)果17-21
• 討論21-23
• 參考文獻23-24
• 第二部分Btk及NFκB抑制劑對急淋小鼠疾病轉(zhuǎn)歸的影響及其作用機制的探討24-52
• 引言24-26
• 材料與方法26-36
• 結(jié)果36-46
• 討論46-50
• 參考文獻50-52
• 結(jié)論52-53
• 文獻綜述NOD/SCID小鼠-白血病模型在白血病研究中的應(yīng)用現(xiàn)狀及進展53-63
• 參考文獻61-63
• 附錄63-64
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況64-65
• 致謝65-66

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