發(fā)布時間：2017-07-20 04:17

  本文關(guān)鍵詞：康萊特注射液聯(lián)合放療對Lewis肺癌小鼠MDSC、HIF-1α表達的影響

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【摘要】：目的:手術(shù)、放射治療、化學治療等傳統(tǒng)惡性腫瘤治療方法難以解決惡性腫瘤的復發(fā)轉(zhuǎn)移問題。腫瘤微環(huán)境的改變是腫瘤復發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵。中醫(yī)藥能夠個體化、多層次、多靶點控制腫瘤生長、對抗轉(zhuǎn)移、減少復發(fā),與放化療結(jié)合,能夠增效減毒。臨床實踐中發(fā)現(xiàn)放療聯(lián)合康萊特注射液(Kanglaite,KLT)具有增效減毒作用。關(guān)于KLT對腫瘤微環(huán)境的影響研究報道不多。本研究通過檢測KLT對Lewis肺癌小鼠放療敏感性的影響,進一步探討KLT對髓系抑制細胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSC)的數(shù)目及缺氧誘導因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)表達的影響,進一步分析KLT的作用機制。方法:1體外培養(yǎng)Lewis肺癌細胞,取傳至3-4代生長好的細胞接種于小鼠左腋皮下,建立Lewis肺癌移植瘤模型。觀察記錄小鼠的一般情況,如體重、進食、活動、毛發(fā)等情況。待腫瘤最長徑為0.8-1cm時,挑選腫瘤大小較均一的荷瘤小鼠24只,隨機分為對照組(control)、康萊特組(KLT)、放療組(RT)及康萊特聯(lián)合放療組(KLT+RT)4組,每組6只,生理鹽水(NS)處理組作為對照組,分別用KLT、NS+RT、KLT+RT處理;選取6只大小較均一的健康小鼠作為健康對照組(NC)。2各組小鼠干預處理結(jié)束后,脫頸方法處死小鼠,稱取小鼠的體重,完整剝離小鼠瘤組織及脾臟、肺臟,并測量瘤體大小。3采用實時熒光定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)技術(shù)檢測各組小鼠瘤體和肺組織中HIF-1α基因表達。4采用流式細胞技術(shù)(flow cytometry,FCM)檢測各組小鼠脾臟、瘤體中MDSC的數(shù)目及比例。5采用SPSS 17.0軟件包建立數(shù)據(jù)庫,將相關(guān)資料結(jié)果錄入數(shù)據(jù)庫,進行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料以率(%)表示,計量資料用x±s表示。多組樣本間均數(shù)比較應用單因素方差分析,組間多重比較應用LSD檢驗,各檢驗均以P0.05為差異有統(tǒng)計學意義。結(jié)果:1各組小鼠一般情況:小鼠皮下接種Lewis肺癌細胞后約1周建模成功,約14天腫瘤生長最長徑為1.5-2.0cm。荷瘤小鼠進食、活動、毛發(fā)等一般情況逐漸變差,對照組小鼠最明顯。2各組對荷瘤小鼠的抑瘤效應:對照組、KLT組、RT組、KLT+RT組平均腫瘤體積分別為(6.78±0.90)cm3、(6.52±0.92)cm3、(0.87±0.53)cm3、(0.08±0.30)cm3,三個治療組的腫瘤體積均低于對照組,與對照組相比,KLT組小鼠腫瘤體積縮小,但無統(tǒng)計學意義(P0.05),RT組、KLT+RT組小鼠腫瘤體積縮小,均有統(tǒng)計學意義(P0.05);與KLT組相比,RT組、KLT+RT組腫瘤體積縮小更明顯,有統(tǒng)計學意義(P0.05);與RT組相比,KLT+RT組腫瘤體積縮小更明顯,有統(tǒng)計學意義(P0.05)(Table 2)3各組小鼠腫瘤組織、肺組織中HIF-1α的基因表達的比較:健康對照小鼠肺組織中不表達HIF-1α基因,Lewis肺癌小鼠瘤組織、肺組織中均表達HIF-1α基因,而腫瘤組織中HIF-1α基因的表達明顯高于肺組織,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);實時熒光定量分析顯示,與NS組相比,KLT組小鼠瘤組織中HIF-1α基因表達降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);RT組HIF-1α基因表達水平增高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);KLT+RT組表達亦較低,有統(tǒng)計學意義(P0.05);與KLT+RT組相比,KLT組HIF-1α基因表達更低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)(Fig.3-8,Table 3)。4各組小鼠腫瘤組織、脾臟組織中MDSC百分比的比較:健康對照小鼠脾臟中幾乎無MDSC表達,而Lewis肺癌小鼠脾臟、瘤組織中均存在MDSC表達,且瘤組織中MDSC表達較脾臟中高;流式分析結(jié)果顯示,與NS組相比,KLT組小鼠脾臟、瘤組織中MDSC百分比顯著較低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),RT組脾臟及瘤組織中MDSC百分比略升高,但差異無統(tǒng)計學意義(P0.05);KLT+RT組脾臟、瘤組織中MDSC百分比降低,有統(tǒng)計學意義(P0.05);與KLT+RT組相比,KLT組脾臟、瘤組織中MDSC百分比降低更顯著,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)(Fig.9-17,Table 4)。結(jié)論:1 KLT可抑制Lewis肺癌小鼠腫瘤生長、增強小鼠免疫功能、改善缺氧狀態(tài),其機制可能與抑制MDSC、HIF-1αm RNA表達有關(guān)。2康萊特聯(lián)合放療具有增效減毒的作用,其機制可能是康萊特能夠改善由放療引起的腫瘤缺氧及免疫抑制微環(huán)境。
【關(guān)鍵詞】：康萊特注射液 Lewis肺癌 腫瘤微環(huán)境 缺氧誘導因子-1α 髓系抑制細胞 放療
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文縮寫10-12
• 前言12
• 材料與方法12-18
• 結(jié)果18-21
• 附圖21-30
• 附表30-32
• 討論32-36
• 結(jié)論36
• 參考文獻36-41
• 綜述 中醫(yī)藥對非小細胞肺癌腫瘤微環(huán)境調(diào)控的研究概述41-50
• 參考文獻47-50
• 致謝50-51
• 個人簡歷51

【參考文獻】

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本文編號：566235