本文關鍵詞：miR-92a在結腸癌中的表達及對HT-29細胞化療藥敏性的影響

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【摘要】：mi RNA是一類內源性表達的長度為17~25個核苷酸的非編碼型小RNA,主要通過與靶基因的3’端的非編碼區(qū)進行不完全配對結合,從而抑制靶基因m RNA翻譯或者直接使其降解,參與調控細胞凋亡、個體發(fā)育、細胞增殖和分化等生命活動,與腫瘤的發(fā)生發(fā)展、侵襲、耐藥產生等病理進程密切相關。已證實,mi RNA在組織和細胞中的表達表現為顯著的組織特異性、腫瘤相關性和表達穩(wěn)定性。結腸癌細胞中,特異性mi RNA過表達或沉默與結腸癌的發(fā)展、演進、腫瘤細胞的轉移及耐藥性有關。mi R-92a作為mi R-17~92簇的重要成員,在多種腫瘤中存在異常表達,并與腫瘤的發(fā)生發(fā)展,腫瘤細胞的增殖和凋亡相關。我們運用熒光定量PCR的方法檢測mi R-92a在大腸癌組織中的表達并探討其臨床意義,在細胞實驗中經過篩選選出對化療耐藥的細胞株HT-29,其中mi R-92a高表達,運用脂質體及反義寡核苷酸共轉染的方法拮抗mi R-92a在HT-29細胞中的表達,檢測細胞的化療敏感性改變。目的:研究mi R-92a在結腸癌組織中的表達情況及其臨床意義,并分析拮抗mi R-92a的表達對HT-29細胞化療藥敏性的影響。方法:1、應用熒光定量PCR法檢測75例結腸癌組織中mi R-92a的表達。對75例結腸癌患者進行隨訪,以無病生存時間(DFS)和總生存時間(OS)為評價指標,Kaplan-Meier生存曲線分析mi R-92a表達與結腸癌患者術后無病生存期和總生存期的關系,Log-rank test比較生存曲線的差異。2、傳代培養(yǎng)HT-29、SW-480、HCT-8結腸癌細胞株,取對數生長期的細胞,提取各組細胞總RNA并反轉錄,用熒光定量PCR法檢測各細胞株中mi R-92a的表達,篩選出表達最高的細胞株,轉染mi R-92a inhibitor后再檢測mi R-92a表達降低證明拮抗有效,進行后續(xù)實驗。3、在riboFECT介導下,將mi R-92a inhibitor轉染入HT-29細胞中,脂質體組只轉染脂質體,陰性對照組轉染陰性對照寡核苷酸,空白組不做任何處理,4組細胞分別予奧沙利鉑處理,作用相應時間后應用CCK-8法檢測細胞的增殖能力,TUNEL法檢測細胞凋亡情況。結果:1、熒光定量PCR實驗發(fā)現,結腸癌組織中mi R-92a的表達較癌旁組織明顯增高,與患者腫瘤部位、浸潤深度、淋巴結轉移、有無脈管癌栓、分化程度無關。mi R-92a低表達患者DFS及OS優(yōu)于高表達者,差異具有統(tǒng)計學意義(P值均0.0001),mi R-92a高表達者和低表達者中位無病生存期分別為17月和31月,總生存期分別為20月和34月。2、mi R-92a在結腸癌細胞株HT-29、SW-480、HCT-8中表達倍數(相對于普通結腸細胞株)分別為3.82±0.32、2.15±0.71、1.43±0.41,其中HT-29細胞株的表達量最高,轉染mi R-92a inhibitor后HT-29的mi R-92a表達量降低為0.05±0.10,與轉染前存在明顯差異,P0.05。3、HT-29細胞轉染mi R-92a inhibitor并經奧沙利鉑作用后細胞增殖能力低于相應時間點的空白組細胞、脂質體組細胞及陰性對照組細胞,差異具有統(tǒng)計學意義,P0.05。抑制mi R-92a表達后,細胞72h凋亡率高于對照組細胞,差異具有統(tǒng)計學意義,P0.05。結論:mi R-92a在結腸癌組織中表達較正常結腸組織顯著升高,其高表達水平預示結腸癌患者更短的無病生存期和總生存期。mi R-92a在不同結腸癌細胞株中表達水平不同,可能影響細胞對化療藥物敏感性,拮抗其表達可以顯著降低細胞化療后增殖能力,提高細胞凋亡率。因此mi R-92a可能成為結腸癌患者出現化療耐藥的新治療靶點。
【關鍵詞】：miR-92a 大腸癌 增殖 凋亡 化療 無病生存期 總生存期
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.35
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語/符號說明11-12
• 前言12-15
• 研究現狀、成果12-14
• 研究目的、方法14-15
• 一、miR-92a在結腸癌組織中的表達及臨床意義15-33
• 1.1 對象與方法15-22
• 1.1.2 實驗材料15-16
• 1.1.3 實驗方法及步驟16-19
• 1.1.4 結腸癌患者術后隨訪19
• 1.1.5結果判定19-21
• 1.1.6統(tǒng)計分析21-22
• 1.2 結果22-31
• 1.3 討論31-32
• 1.4 小結32-33
• 二、mi R-92a 的表達對 HT-29 細胞化療藥敏性的影響33-49
• 2.1 對象與方法33-41
• 2.1.1 實驗材料33-34
• 2.1.2 實驗方法34-38
• 2.1.3 結果判定38-40
• 2.1.4 統(tǒng)計分析40-41
• 2.2 結果41-46
• 2.3 討論46-48
• 2.4 小結48-49
• 結論49-50
• 參考文獻50-55
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明55-56
• 附錄56-59
• 綜述 mi R-17~92簇在惡性腫瘤診治中的研究進展59-74
• 綜述參考文獻69-74
• 致謝74

【共引文獻】

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本文編號：566019