本文關(guān)鍵詞：miR-92a在結(jié)腸癌中的表達(dá)及對HT-29細(xì)胞化療藥敏性的影響

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【摘要】：mi RNA是一類內(nèi)源性表達(dá)的長度為17~25個(gè)核苷酸的非編碼型小RNA,主要通過與靶基因的3’端的非編碼區(qū)進(jìn)行不完全配對結(jié)合,從而抑制靶基因m RNA翻譯或者直接使其降解,參與調(diào)控細(xì)胞凋亡、個(gè)體發(fā)育、細(xì)胞增殖和分化等生命活動(dòng),與腫瘤的發(fā)生發(fā)展、侵襲、耐藥產(chǎn)生等病理進(jìn)程密切相關(guān)。已證實(shí),mi RNA在組織和細(xì)胞中的表達(dá)表現(xiàn)為顯著的組織特異性、腫瘤相關(guān)性和表達(dá)穩(wěn)定性。結(jié)腸癌細(xì)胞中,特異性mi RNA過表達(dá)或沉默與結(jié)腸癌的發(fā)展、演進(jìn)、腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移及耐藥性有關(guān)。mi R-92a作為mi R-17~92簇的重要成員,在多種腫瘤中存在異常表達(dá),并與腫瘤的發(fā)生發(fā)展,腫瘤細(xì)胞的增殖和凋亡相關(guān)。我們運(yùn)用熒光定量PCR的方法檢測mi R-92a在大腸癌組織中的表達(dá)并探討其臨床意義,在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中經(jīng)過篩選選出對化療耐藥的細(xì)胞株HT-29,其中mi R-92a高表達(dá),運(yùn)用脂質(zhì)體及反義寡核苷酸共轉(zhuǎn)染的方法拮抗mi R-92a在HT-29細(xì)胞中的表達(dá),檢測細(xì)胞的化療敏感性改變。目的:研究mi R-92a在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)情況及其臨床意義,并分析拮抗mi R-92a的表達(dá)對HT-29細(xì)胞化療藥敏性的影響。方法:1、應(yīng)用熒光定量PCR法檢測75例結(jié)腸癌組織中mi R-92a的表達(dá)。對75例結(jié)腸癌患者進(jìn)行隨訪,以無病生存時(shí)間(DFS)和總生存時(shí)間(OS)為評價(jià)指標(biāo),Kaplan-Meier生存曲線分析mi R-92a表達(dá)與結(jié)腸癌患者術(shù)后無病生存期和總生存期的關(guān)系,Log-rank test比較生存曲線的差異。2、傳代培養(yǎng)HT-29、SW-480、HCT-8結(jié)腸癌細(xì)胞株,取對數(shù)生長期的細(xì)胞,提取各組細(xì)胞總RNA并反轉(zhuǎn)錄,用熒光定量PCR法檢測各細(xì)胞株中mi R-92a的表達(dá),篩選出表達(dá)最高的細(xì)胞株,轉(zhuǎn)染mi R-92a inhibitor后再檢測mi R-92a表達(dá)降低證明拮抗有效,進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。3、在riboFECT介導(dǎo)下,將mi R-92a inhibitor轉(zhuǎn)染入HT-29細(xì)胞中,脂質(zhì)體組只轉(zhuǎn)染脂質(zhì)體,陰性對照組轉(zhuǎn)染陰性對照寡核苷酸,空白組不做任何處理,4組細(xì)胞分別予奧沙利鉑處理,作用相應(yīng)時(shí)間后應(yīng)用CCK-8法檢測細(xì)胞的增殖能力,TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果:1、熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),結(jié)腸癌組織中mi R-92a的表達(dá)較癌旁組織明顯增高,與患者腫瘤部位、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有無脈管癌栓、分化程度無關(guān)。mi R-92a低表達(dá)患者DFS及OS優(yōu)于高表達(dá)者,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均0.0001),mi R-92a高表達(dá)者和低表達(dá)者中位無病生存期分別為17月和31月,總生存期分別為20月和34月。2、mi R-92a在結(jié)腸癌細(xì)胞株HT-29、SW-480、HCT-8中表達(dá)倍數(shù)(相對于普通結(jié)腸細(xì)胞株)分別為3.82±0.32、2.15±0.71、1.43±0.41,其中HT-29細(xì)胞株的表達(dá)量最高,轉(zhuǎn)染mi R-92a inhibitor后HT-29的mi R-92a表達(dá)量降低為0.05±0.10,與轉(zhuǎn)染前存在明顯差異,P0.05。3、HT-29細(xì)胞轉(zhuǎn)染mi R-92a inhibitor并經(jīng)奧沙利鉑作用后細(xì)胞增殖能力低于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的空白組細(xì)胞、脂質(zhì)體組細(xì)胞及陰性對照組細(xì)胞,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.05。抑制mi R-92a表達(dá)后,細(xì)胞72h凋亡率高于對照組細(xì)胞,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.05。結(jié)論:mi R-92a在結(jié)腸癌組織中表達(dá)較正常結(jié)腸組織顯著升高,其高表達(dá)水平預(yù)示結(jié)腸癌患者更短的無病生存期和總生存期。mi R-92a在不同結(jié)腸癌細(xì)胞株中表達(dá)水平不同,可能影響細(xì)胞對化療藥物敏感性,拮抗其表達(dá)可以顯著降低細(xì)胞化療后增殖能力,提高細(xì)胞凋亡率。因此mi R-92a可能成為結(jié)腸癌患者出現(xiàn)化療耐藥的新治療靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：miR-92a 大腸癌 增殖 凋亡 化療 無病生存期 總生存期
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.35
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語/符號說明11-12
• 前言12-15
• 研究現(xiàn)狀、成果12-14
• 研究目的、方法14-15
• 一、miR-92a在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)及臨床意義15-33
• 1.1 對象與方法15-22
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)材料15-16
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)方法及步驟16-19
• 1.1.4 結(jié)腸癌患者術(shù)后隨訪19
• 1.1.5結(jié)果判定19-21
• 1.1.6統(tǒng)計(jì)分析21-22
• 1.2 結(jié)果22-31
• 1.3 討論31-32
• 1.4 小結(jié)32-33
• 二、mi R-92a 的表達(dá)對 HT-29 細(xì)胞化療藥敏性的影響33-49
• 2.1 對象與方法33-41
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料33-34
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法34-38
• 2.1.3 結(jié)果判定38-40
• 2.1.4 統(tǒng)計(jì)分析40-41
• 2.2 結(jié)果41-46
• 2.3 討論46-48
• 2.4 小結(jié)48-49
• 結(jié)論49-50
• 參考文獻(xiàn)50-55
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明55-56
• 附錄56-59
• 綜述 mi R-17~92簇在惡性腫瘤診治中的研究進(jìn)展59-74
• 綜述參考文獻(xiàn)69-74
• 致謝74

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：566019