本文關(guān)鍵詞：miR-124提高食管癌放射敏感性的機(jī)制研究

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【摘要】：第一部分mi R-124在食管TE-1及Eca109中的表達(dá)情況及其對(duì)細(xì)胞增殖及遷移的影響目的:研究食管鱗癌細(xì)胞(TE-1及Eca109)中mi R-124的表達(dá)情況及其對(duì)細(xì)胞增殖及遷移的影響。方法:采用RT-PCR法檢測(cè)人食管癌細(xì)胞系TE-1、Eca109及正常食管上皮細(xì)胞HEEC中mi R-124的表達(dá);CCK-8法檢測(cè)過表達(dá)mi R-124對(duì)細(xì)胞增殖能力的影響,細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)過表達(dá)mi R-124對(duì)細(xì)胞遷移能力的影響,細(xì)胞周期試驗(yàn)檢測(cè)過表達(dá)mi R-124對(duì)細(xì)胞周期的影響,分析mi R-124在食管鱗癌細(xì)胞增殖及遷移中的作用。結(jié)果:與Eca109細(xì)胞及TE-1細(xì)胞相比,正常食管黏膜細(xì)胞HEEC中mi R-124表達(dá)水平明顯較高;mi R-124的過表達(dá)可以抑制Eca109及TE-1細(xì)胞的遷移及增殖,且使G1期細(xì)胞增多。結(jié)論:mi R-124在食管癌細(xì)胞中低表達(dá),mi R-124可抑制食管癌細(xì)胞增殖及遷移能力,并誘導(dǎo)細(xì)胞阻滯在G1期。第二部分上調(diào)食管癌細(xì)胞系TE-1及Eac109中mi R-124的表達(dá)對(duì)其放射敏感性的影響目的:研究上調(diào)mi R-124的表達(dá)是否可提高食管癌細(xì)胞放射敏感性。方法:利用Lipofectamine TM 2000將mi R-124 mimics轉(zhuǎn)染至食管鱗癌細(xì)胞TE-1及Eca109中,分別檢測(cè)轉(zhuǎn)染和未轉(zhuǎn)染細(xì)胞經(jīng)相同劑量放射線治療后細(xì)胞凋亡情況,分析在食管癌細(xì)胞TE-1及Eca109中上調(diào)mi R-124表達(dá)對(duì)放射敏感性的影響。結(jié)果:CCK8實(shí)驗(yàn)證明過表達(dá)mi R-124可抑制放射后細(xì)胞增殖,細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)、Annexin V/PI雙染法流式細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)以及Hoechst 33258染色均證明過表達(dá)mi R-124可增加放射線處理后細(xì)胞凋亡,且TE-1細(xì)胞放射敏感性高于Eca109細(xì)胞。結(jié)論:上調(diào)miR-124的表達(dá)可增加放射線治療后細(xì)胞凋亡,增加其放射敏感性。第三部分mi R-124靶向調(diào)控CDK4基因表達(dá)的研究目的:篩選出mi R-124的可能靶基因,并驗(yàn)證mi R-124對(duì)所預(yù)測(cè)靶基因的調(diào)控關(guān)系。方法:應(yīng)用生物信息學(xué)手段(mi RNA數(shù)據(jù)庫等)對(duì)mi R-124的可能靶基因進(jìn)行預(yù)測(cè),篩選mi R-124調(diào)控細(xì)胞阻滯于G1期的可能靶基因,經(jīng)酶切構(gòu)建含有預(yù)測(cè)靶基因3’-UTR的報(bào)告載體psi CHECK-CDK4,經(jīng)過基因測(cè)序驗(yàn)證后,應(yīng)用熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證CDK4是否為mi R-124的直接靶基因。最后,利用RT-PCR、Western Blot分別檢測(cè)mi R-124對(duì)所預(yù)測(cè)出的靶基因m RNA及蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果:利用生物信息學(xué)技術(shù)預(yù)測(cè)CDK4為mi R-124的靶基因;熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)證明mi R-124可與靶基因CDK4 m RNA 3’-UTR有效結(jié)合;RT-PCR證明轉(zhuǎn)染mi R-124 mimic的細(xì)胞內(nèi)CDK4的m RNA表達(dá)水平降低,Western Blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染mi R-124 mimic的細(xì)胞CDK4蛋白表達(dá)水平較未轉(zhuǎn)染的低。結(jié)論:mi R-124可與靶基因CDK4 m RNA 3’-UTR有效結(jié)合從而起到調(diào)節(jié)CDK4表達(dá)的作用,上調(diào)mi R-124的表達(dá)可抑制CDK4的表達(dá)。CDK4是mi R-124的直接靶基因。
【關(guān)鍵詞】：miR-124 食管癌細(xì)胞株 CDK4 放射敏感性
【學(xué)位授予單位】：蚌埠醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.1
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 引言10-13
• 第一部分 miR-124在食管TE-1 及Eca109中的表達(dá)及其對(duì)細(xì)胞增殖及遷移的影響13-27
• 前言13
• 材料和方法13-21
• 結(jié)果21-25
• 討論25-26
• 結(jié)論26-27
• 第二部分 上調(diào)食管癌細(xì)胞系TE-1 及Eac109中miR-124的表達(dá)對(duì)其放射敏感性的影響27-35
• 前言27
• 材料和方法27-30
• 結(jié)果30-32
• 討論32-34
• 結(jié)論34-35
• 第三部分 miR-124靶向調(diào)控CDK4基因表達(dá)的研究35-49
• 前言35
• 材料和方法35-43
• 結(jié)果43-47
• 討論47-48
• 結(jié)論48-49
• 參考文獻(xiàn)49-51
• 致謝51-53
• 附錄53-63
• 附錄A 文獻(xiàn)綜述53-63
• 參考文獻(xiàn)59-63
• 附錄B 在讀期間發(fā)表文章情況63

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

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本文編號(hào)：565962