本文關(guān)鍵詞：EGFL7通過(guò)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化促進(jìn)胰腺癌侵襲的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：第一部分EGFL7在人胰腺癌細(xì)胞株中的表達(dá)目的研究Patu8988、PANC-1、Bx PC-3、Capan-1胰腺癌細(xì)胞EGFL7的表達(dá)狀況,為后續(xù)研究做好準(zhǔn)備。方法常規(guī)培養(yǎng)Patu8988、PANC-1、Bx PC-3、Capan-1胰腺癌細(xì)胞,Real-time PCR、Western blot方法檢測(cè)EGFL7 m RNA和蛋白的表達(dá)。結(jié)果Real-time PCR顯示上述4株胰腺癌細(xì)胞中EGFL7 m RNA相對(duì)量分別為:1.73±0.15、2.26±0.20、1.53±0.10、1.00±0.10,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Western blot顯示上述4株胰腺癌細(xì)胞中EGFL7蛋白相對(duì)量分別為:0.26±0.03、0.32±0.04、0.23±0.02、0.15±0.02,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其中PACN-1細(xì)胞的EGFL7表達(dá)量最高。結(jié)論在Patu8988、PANC-1、Bx PC-3、Capan-1胰腺癌細(xì)胞中,PANC-1細(xì)胞EGFL7表達(dá)量最高。第二部分靶向EGFL7的si RNA干擾質(zhì)粒的構(gòu)建與篩選目的構(gòu)建并篩選靶向EGFL7沉默效果最佳的si RNA干擾質(zhì)粒。方法根據(jù)Gen Bank中EGFL7的基因序列,設(shè)計(jì)4條靶向人EGFL7的si RNA序列,與干擾載體共轉(zhuǎn)染PANC-1細(xì)胞,Real-time PCR、Western blot篩選出最佳干擾序列。結(jié)果靶向EGFL7基因重組si RNA干擾質(zhì)粒構(gòu)建成功,并能有效抑制EGFL7的表達(dá),且EGFL7-si RNA-1效果最佳。結(jié)論EGFL7-si RNA-1干擾質(zhì)粒對(duì)PANC-1細(xì)胞EGFL7的沉默效果最佳。第三部分EGFL7對(duì)胰腺癌PANC-1細(xì)胞侵襲的影響及機(jī)制探討.目的研究EGFL7靶向沉默后人胰腺癌PANC-1細(xì)胞侵襲能力的改變,及EMT相關(guān)標(biāo)志物表達(dá)的改變。方法實(shí)驗(yàn)細(xì)胞分為PANC-1(空白對(duì)照組)、NC-PANC-1(陰性對(duì)照組)、si-PANC-1(實(shí)驗(yàn)組)三組。各組細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)120h,分別在轉(zhuǎn)染24h、48h、72h、96h、120h后MTT法檢測(cè)增殖活性。轉(zhuǎn)染后72h,Transwell檢測(cè)各組細(xì)胞的侵襲能力。Real-time PCR、Western blot檢測(cè)E-Cadherin、N-Cadherin、Fibronectin、Vimentin m RNA和蛋白的表達(dá)。結(jié)果MTT實(shí)驗(yàn)顯示,轉(zhuǎn)染24h、48h、72h、96h、120h后3組細(xì)胞的增殖活性差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)顯示,轉(zhuǎn)染后72小時(shí)3組的侵襲細(xì)胞數(shù)分別為79±5.0、70.2±4.0、30±2.5,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Real-time PCR和Western blot顯示:si-PANC-1組E-Cadherin m RNA及蛋白較其他兩組顯著升高(P0.05),而NCadherin、Fibronectin、Vimentin較其他兩組顯著降低(P0.05);NC-PANC-1組與PANC-1組間E-Cadherin、N-Cadherin、Fibronectin、Vimentin m RNA及蛋白差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論EGFL7可通過(guò)EMT過(guò)程促進(jìn)胰腺癌的侵襲。
【關(guān)鍵詞】：胰腺癌 EGFL7 上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化 E-Cadherin
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.9
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-13
• 參考文獻(xiàn)11-13
• 第一部分 EGFL7 在人胰腺癌細(xì)胞株中的表達(dá)13-26
• 材料13-15
• 方法15-20
• 結(jié)果20-22
• 討論22-23
• 結(jié)論23
• 參考文獻(xiàn)23-26
• 第二部分 靶向EGFL7 的SIRNA干擾質(zhì)粒的構(gòu)建與篩選26-38
• 材料26-28
• 方法28-33
• 結(jié)果33-35
• 討論35-36
• 結(jié)論36-37
• 參考文獻(xiàn)37-38
• 第三部分 EGFL7 對(duì)胰腺癌PANC-1 細(xì)胞侵襲的影響及機(jī)制探討38-47
• 材料38-39
• 方法39-41
• 結(jié)果41-43
• 討論43-45
• 結(jié)論45
• 參考文獻(xiàn)45-47
• 全文總結(jié)47-48
• 綜述 EGFL7 在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移中的研究進(jìn)展48-54
• 參考文獻(xiàn)52-54
• 全文縮略詞54-55
• 攻讀學(xué)位期間公開(kāi)發(fā)表的論文55-56
• 致謝56-57

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 桑娜;李景和;王寬松;;EGFL7與腫瘤研究新進(jìn)展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2009年23期

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本文編號(hào)：565242