本文關鍵詞：PRMT2在乳腺癌MCF-7細胞中通過PPARγ對Akt磷酸化的影響

  更多相關文章： 蛋白質(zhì)精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶2 過氧化物酶體增殖激活受體γ 磷酸化蛋白激酶B 乳腺癌細胞

【摘要】：目的:研究在乳腺癌MCF-7細胞中,PRMT2通過PPARγ對Akt磷酸化的影響,并初步探討PRMT2對乳腺癌干細胞的影響,為乳腺癌的內(nèi)分泌治療提供新思路。方法:以MCF-7-PRMT2穩(wěn)定高表達細胞株及MCF-7細胞株為研究對象,研究在乳腺癌MCF-7細胞中PRMT2通過PPARγ對Akt磷酸化的影響以及PRMT2對乳腺癌干細胞的影響。實驗包括4部分:(1)利用蛋白質(zhì)免疫印跡法,檢測MCF-7細胞中穩(wěn)定高表達PRMT2對p-Akt、p-GSK-3β、CyclinD1、PPARγ蛋白表達水平的影響;(2)通過免疫共沉淀技術(shù)明確PRMT2與PPARγ是否存在相互作用;(3)利用蛋白質(zhì)免疫印跡法,檢測MCF-7細胞中穩(wěn)定高表達PRMT2及低表達PPARγ共同對p-Akt蛋白表達水平的影響;(4)通過流式細胞術(shù),檢測PRMT2對乳腺癌干細胞(CD44~+/CD24-)的影響。結(jié)果:1.Western Blot結(jié)果顯示:在MCF-7細胞中,PRMT2穩(wěn)定高表達下調(diào)p-Akt、p-GSK-3β、CyclinD1蛋白的表達,而對PPARγ的表達無明顯影響。2.免疫共沉淀結(jié)果顯示:在MCF-7乳腺癌細胞中,PRMT2與PPARγ存在相互作用。3.Western Blot結(jié)果顯示:在MCF-7細胞中,沉默PPARγ對PRMT2的表達沒有影響但能增加p-Akt蛋白的表達,在此基礎上,穩(wěn)定高表達PRMT2能降低p-Akt蛋白的表達,而在高表達PRMT2的基礎上沉默PPARγ,p-Akt蛋白的表達明顯增加。4.流式細胞術(shù)結(jié)果顯示:穩(wěn)定高表達PRMT2的MCF-7細胞株與對照組相比,乳腺癌干細胞(CD44~+/CD24-)的比例減少,有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論:1.在乳腺癌MCF-7細胞中,PRMT2可能部分通過與PPARγ結(jié)合發(fā)揮作用,抑制Akt磷酸化。2.PRMT2高表達能降低乳腺癌MCF-7細胞中CD44~+/CD24-細胞比例。
【關鍵詞】：蛋白質(zhì)精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶2 過氧化物酶體增殖激活受體γ 磷酸化蛋白激酶B 乳腺癌細胞
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 縮略詞表8-11
• 第1章 前言11-15
• 第2章 實驗材料15-21
• 2.1 細胞株15
• 2.2 質(zhì)粒構(gòu)建15
• 2.3 主要試劑、耗材及來源15-16
• 2.4 主要溶液配制16-20
• 2.5 主要儀器20-21
• 第3章 實驗方法21-28
• 3.1 細胞培養(yǎng)21
• 3.2 Western blot檢測PRMT2對增殖相關蛋白的影響21-23
• 3.3 免疫共沉淀23-24
• 3.4 Western blot檢測shRNA介導的PPARγ基因沉默24-25
• 3.5 Western blot檢測PRMT2與PPARγ 共同對p-Akt的影響25-26
• 3.6 流式細胞術(shù)26
• 3.7 統(tǒng)計學處理26-28
• 第4章 實驗結(jié)果28-36
• 4.1 PRMT2高表達對MCF-7 細胞增殖相關蛋白表達的影響28-30
• 4.2 MCF-7 細胞中 PPARγ 與 PRMT2 的相互作用情況30
• 4.3 沉默PPARγ對MCF-7細胞中PRMT2、p-Akt蛋白表達的影響30-33
• 4.4 PRMT2及PPARγ共同對MCF-7細胞中p-Akt蛋白表達的影響33-34
• 4.5 PRMT2高表達對乳腺癌干細胞（CD44~+/CD24~-）的影響34-36
• 第5章 討論36-40
• 第6章 結(jié)論40-42
• 參考文獻42-46
• 綜述46-55
• 參考文獻50-55
• 致謝55

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