本文關(guān)鍵詞：慢病毒介導(dǎo)CCDC67轉(zhuǎn)染甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞生物學(xué)活性的鑒定

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【摘要】：背景和目的:甲狀腺癌是頭頸部的惡性腫瘤,是內(nèi)分泌系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤,在所有惡性腫瘤中約占3%,在女性中發(fā)病率較高。甲狀腺癌中最常見(jiàn)的病理類(lèi)型是乳頭狀癌,在甲狀腺癌中占約90%,其發(fā)生率呈逐年上升的趨勢(shì)。雖然對(duì)甲狀腺癌變的研究已經(jīng)取得了一定的進(jìn)展,但其具體癌變機(jī)制仍需進(jìn)行深層次地探索。腫瘤的發(fā)生和發(fā)展是多因素、多階段、多基因改變的病理過(guò)程�；蛲蛔儭⒒蛑亟M、癌基因的激活、表觀遺傳學(xué)的改變、抑癌基因的失活等在癌變過(guò)程中發(fā)揮重要作用,而抑癌基因在轉(zhuǎn)錄水平和基因組的異常表達(dá)是腫瘤發(fā)生的常見(jiàn)原因之一。研究表明如果將失活的抑癌基因重新表達(dá),恢復(fù)其功能,將會(huì)對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)起到抑制作用。最近的研究表明卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域67(CCDC67)是一個(gè)新的候選抑癌基因,且與腫瘤形成的細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān),研究發(fā)現(xiàn)CCDC67m RNA在肺癌、宮頸癌、乳腺癌等惡性腫瘤中發(fā)現(xiàn)其表達(dá)缺失或降低。但有關(guān)甲狀腺癌中CCDC67基因的表達(dá)及其臨床資料很少有報(bào)道。因此,我們運(yùn)用RT-PCR檢測(cè)CCDC67m RNA在甲狀腺乳頭狀癌(Papillary thyroid carcinoma,PTC)中的表達(dá)情況,Western blot檢測(cè)CCDC67蛋白在PTC中的表達(dá)情況,并分析其與臨床病理的相關(guān)性。接著采用慢病毒介導(dǎo)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞,使CCDC67在細(xì)胞中過(guò)表達(dá),分析轉(zhuǎn)染前后甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞的生物活性,鑒定CCDC67的基因功能,以此評(píng)判CCDC67基因是否是PTC的抑癌基因,為腫瘤的治療提供新的契機(jī)。材料與方法:1、采用RT-PCR及Western blot檢測(cè)56例PTC腫瘤組織及其與癌灶相隔2cm以上的非癌上皮(non-carcerous epithelium,NCE)組織中CCDC67基因的轉(zhuǎn)錄及翻譯情況,并分析其與臨床病理的相關(guān)性。2、運(yùn)用RT-PCR、Western blot檢測(cè)甲狀腺癌細(xì)胞系TPC-1、SW579中CCDC67基因表達(dá)的情況。3、CCDC67基因慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定。4、構(gòu)建慢病毒載體介導(dǎo)CCDC67過(guò)表達(dá)TPC-1細(xì)胞,通過(guò)侵襲遷移實(shí)驗(yàn)、平板克隆實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期、凋亡、CCK-8、劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后TPC-1細(xì)胞生物學(xué)活性。5、采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,兩樣本率的比較用四格表資料的卡方檢驗(yàn),多樣本均數(shù)的比較采用單因素方差分析,兩樣本定量資料采用t檢驗(yàn),以P0.05為差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1、56例癌旁組織中均出現(xiàn)CCDC67m RNA和蛋白的表達(dá)。PTC組織中有41.4%(23/56)出現(xiàn)CCDC67m RNA的表達(dá),與患者的TNM分期、病理分級(jí)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P0.05),有46.4%(26/56)出現(xiàn)CCDC67蛋白的表達(dá),且與患者的TNM分期、病理分級(jí)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P0.05)。2、在甲狀腺癌細(xì)胞系中,TPC-1、SW579細(xì)胞中CCDC67的表達(dá)均缺失。3、PCR產(chǎn)物經(jīng)電泳分析表明成功獲取CCDC67基因c DNA克隆,測(cè)序結(jié)果顯示慢病毒轉(zhuǎn)染質(zhì)粒連接構(gòu)建正確。熒光表達(dá)檢測(cè)顯示293T細(xì)胞中產(chǎn)生慢病毒顆粒,Western blot顯示CCDC67在細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定表達(dá),證實(shí)成功構(gòu)建CCDC67基因慢病毒表達(dá)載體。4、通過(guò)慢病毒介導(dǎo)CCDC67過(guò)表達(dá)TPC-1細(xì)胞,轉(zhuǎn)染后TPC-1細(xì)胞的生物學(xué)活性受到抑制。結(jié)論:1、在甲狀腺癌細(xì)胞系以及甲狀腺乳頭狀癌組織標(biāo)本中均檢測(cè)到CCDC67基因m RNA以及蛋白表達(dá)的缺失,初步證實(shí)CCDC67是甲狀腺乳頭狀癌的候選抑癌基因。2、慢病毒可以感染TPC-1細(xì)胞系,并且CCDC67基因可以在TPC-1細(xì)胞中穩(wěn)定過(guò)表達(dá)。3、慢病毒介導(dǎo)CCDC67轉(zhuǎn)染TPC-1細(xì)胞后,能明顯促使TPC-1細(xì)胞株惡性表型的逆轉(zhuǎn),進(jìn)一步證實(shí)CCDC67為PTC的一個(gè)抑癌基因。
【關(guān)鍵詞】：CCDC67 甲狀腺乳頭狀癌 TPC-1 慢病毒載體
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R736.1
【目錄】：

• 摘要4-7
• abstract7-12
• 縮略詞表12-13
• 前言13-16
• 第一部分 甲狀腺癌組織標(biāo)本以及甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞中CCDC67的表達(dá)16-29
• 1.材料和儀器16-18
• 2.實(shí)驗(yàn)方法18-23
• 3.結(jié)果23-27
• 4.討論27-28
• 5.結(jié)論28-29
• 第二部分：構(gòu)建CCDC67重組慢病毒表達(dá)載體并鑒定其在甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞中過(guò)表達(dá)29-42
• 1.材料和儀器29-30
• 2.實(shí)驗(yàn)方法30-37
• 3.結(jié)果37-40
• 4.討論40-41
• 5.結(jié)論41-42
• 第三部分CCDC67基因過(guò)表達(dá)對(duì)TPC-1 細(xì)胞生物學(xué)功能的影響42-55
• 1.材料和儀器42-43
• 2.實(shí)驗(yàn)方法43-45
• 3.結(jié)果45-53
• 4.討論53-54
• 5.結(jié)論54-55
• 全文總結(jié)55-56
• 參考文獻(xiàn)56-59
• 綜述59-71
• 參考文獻(xiàn)68-71
• 個(gè)人簡(jiǎn)介71-72
• 致謝72

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 孫克寧;朱化彬;林峰;王棟;郝海生;杜衛(wèi)華;趙學(xué)明;;慢病毒載體的構(gòu)建及其應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的研究進(jìn)展[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2010年08期

2 黃黎珍;劉光澤;顧為望;;慢病毒載體法制備轉(zhuǎn)基因動(dòng)物研究進(jìn)展[J];實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與比較醫(yī)學(xué);2007年01期

3 魏香,曾憲綱,周海夢(mèng);蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中卷曲螺旋的研究進(jìn)展[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2004年05期

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本文編號(hào)：560016