本文關(guān)鍵詞：缺氧或腫瘤壞死因子α對全反式維甲酸誘導(dǎo)早幼粒白血病細(xì)胞凋亡的影響

  更多相關(guān)文章： 全反式維甲酸 NB-4細(xì)胞 缺氧 腫瘤壞死因子α 細(xì)胞凋亡 細(xì)胞分化 TNFR1

【摘要】：研究目的:急性早幼粒細(xì)胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)發(fā)病急,病情重,出血傾向較明顯。而全反式維甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)能夠特異性誘導(dǎo)APL細(xì)胞分化成熟,緩解率較高,出血發(fā)生率較低。嚴(yán)重感染、分化綜合征、白細(xì)胞升高等一些危險(xiǎn)因素可誘發(fā)APL合并急性肺損傷/急性呼吸窘迫綜合征(acute lung injury/acute respiratory distress syndrome,ALI/ARDS),產(chǎn)生低氧血癥,造成機(jī)體缺氧的環(huán)境。腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor,TNF-α)是一種多效應(yīng)的細(xì)胞因子,具有抗腫瘤作用。本課題用早幼粒白血病細(xì)胞株NB-4細(xì)胞建立體外缺氧模型,通過檢測細(xì)胞凋亡和細(xì)胞膜TNFR1的表達(dá),研究缺氧對ATRA誘導(dǎo)APL細(xì)胞凋亡的影響及探討相關(guān)機(jī)制;通過檢測細(xì)胞凋亡和細(xì)胞膜CD11b和TNFR1的表達(dá),研究腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor,TNF-α)對ATRA誘導(dǎo)APL細(xì)胞凋亡和分化的影響及探討相關(guān)機(jī)制。方法:本課題分兩部分進(jìn)行:第一部分包括以下四項(xiàng)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容:1.用ATRA誘導(dǎo)NB-4細(xì)胞分化并建立缺氧模型。2.細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測缺氧對分化后的NB-4細(xì)胞增殖的影響,Annexin V-FITC/PI染色法檢測缺氧對分化后的NB-4細(xì)胞凋亡的影響。3.用流式細(xì)胞技術(shù)檢測缺氧對分化后的NB-4細(xì)胞表面CD11b表達(dá)的影響。4.用免疫熒光技術(shù)檢測缺氧對分化后的NB-4細(xì)胞膜TNFR1表達(dá)強(qiáng)度的影響。第二部分包括以下三項(xiàng)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容:1.細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測TNF-α聯(lián)合ATRA對NB-4細(xì)胞增殖的影響,Annexin V-FITC/PI染色法檢測TNF-α聯(lián)合ATRA對NB-4細(xì)胞凋亡的影響。2.用流式細(xì)胞技術(shù)檢測TNF-α聯(lián)合ATRA對NB-4細(xì)胞表面CD11b表達(dá)的影響。3.用流式細(xì)胞技術(shù)檢測TNF-α聯(lián)合ATRA對NB-4細(xì)胞表面TNFR1表達(dá)的影響。結(jié)果:第一部分結(jié)果顯示,與常氧組比較:1.細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果顯示缺氧使分化后的NB-4細(xì)胞增殖減緩,缺氧時(shí)間越長,增殖速度越慢。2.Annexin V-FITC/PI染色結(jié)果顯示缺氧使分化后的NB-4細(xì)胞凋亡和壞死受到抑制,缺氧時(shí)間越長,對分化后的NB-4細(xì)胞凋亡和壞死的抑制作用越明顯。3.流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示缺氧使分化后的NB-4細(xì)胞CD11b陽性細(xì)胞百分率稍有增高,缺氧時(shí)間越長,CD11b陽性細(xì)胞比例越高。4.免疫熒光染色結(jié)果顯示缺氧使分化后的NB-4細(xì)胞膜TNFR1表達(dá)強(qiáng)度變?nèi)�。缺氧時(shí)間越長,細(xì)胞膜TNFR1表達(dá)強(qiáng)度越弱。第二部分結(jié)果顯示,與不加TNF-α組比較:1.細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果顯示TNF-α聯(lián)合ATRA使NB-4細(xì)胞增殖速度更慢。2.Annexin V-FITC/PI染色結(jié)果顯示TNF-α聯(lián)合ATRA使NB-4細(xì)胞凋亡率更高。3.流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示TNF-α聯(lián)合ATRA使NB-4細(xì)胞在分化第2天CD11b陽性細(xì)胞的比例更高。把ATRA組TNFR1陽性細(xì)胞數(shù)作為100%對照,相比ATRA組,ATRA聯(lián)合TNF-α組在整個(gè)分化過程中TNFR1陽性細(xì)胞比例下降。結(jié)論:1.缺氧可抑制ATRA誘導(dǎo)NB-4細(xì)胞凋亡,激活一部分已經(jīng)向成熟中性粒細(xì)胞分化的NB-4細(xì)胞,使其表達(dá)更多的CD11b。其抑制已分化的NB-4細(xì)胞凋亡的機(jī)制可能為缺氧下調(diào)了細(xì)胞表面死亡受體TNFR1的數(shù)量。2.TNF-α可增強(qiáng)ATRA誘導(dǎo)NB-4細(xì)胞的凋亡和分化,其機(jī)制可能為TNF-α與細(xì)胞表面死亡受體TNFR1結(jié)合,啟動(dòng)了TNFR1介導(dǎo)的相關(guān)細(xì)胞凋亡機(jī)制。
【關(guān)鍵詞】：全反式維甲酸 NB-4細(xì)胞 缺氧 腫瘤壞死因子α 細(xì)胞凋亡 細(xì)胞分化 TNFR1
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R733.7
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 符號說明10-11
• 前言11-16
• 研究現(xiàn)狀、成果11-14
• 研究目的、方法14-16
• 一、缺氧對ATRA誘導(dǎo)NB-4 細(xì)胞凋亡的影響16-23
• 1.1 對象和方法16-19
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料16-17
• 1.1.2 方法與流程17-19
• 1.2 結(jié)果19-22
• 1.2.1 細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測缺氧對分化后的NB-4 細(xì)胞增殖的影響19-20
• 1.2.2 Annexin V-FITC/PI染色法檢測缺氧對分化后的NB-4 細(xì)胞凋亡的影響20-21
• 1.2.3 用流式細(xì)胞技術(shù)檢測缺氧對分化后的NB-4 細(xì)胞表面CD11b表達(dá)的影響21
• 1.2.4 用流式細(xì)胞技術(shù)檢測TNF-α對分化后的NB-4 細(xì)胞表面TNFR1表達(dá)的影響21-22
• 1.3 小結(jié)22-23
• 二、TNF-α對ATRA誘導(dǎo)NB-4 細(xì)胞凋亡的影響23-33
• 2.1 對象和方法23-26
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料23-24
• 2.1.2 方法與流程24-26
• 2.2 結(jié)果26-32
• 2.2.1 TNF-α聯(lián)合 ATRA 對早幼粒白血病細(xì)胞增殖的影響26-27
• 2.2.2 TNF-α聯(lián)合 ATRA 對早幼粒白血病細(xì)胞凋亡的影響27-28
• 2.2.3 TNF-α對未分化的 NB4 細(xì)胞凋亡的影響28-29
• 2.2.4 TNF-α聯(lián)合 ATRA 對早幼粒白血病細(xì)胞分化的影響29-30
• 2.2.5 TNF-α對早幼粒白血病細(xì)胞分化的影響30-31
• 2.2.6 TNF-α聯(lián)合 ATRA 對早幼粒白血病細(xì)胞膜 TNFR1 的影響31-32
• 2.3 小結(jié)32-33
• 結(jié)論33-34
• 討論34-38
• 參考文獻(xiàn)38-42
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明42-43
• 綜述 TNF-α信號通路43-65
• 綜述參考文獻(xiàn)56-65
• 致謝65

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本文編號：560005