本文關(guān)鍵詞：神經(jīng)源性分化因子（NeuroD）對小鼠放射性腸損傷的治療作用及其機制研究

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【摘要】：一、Neuro D-EGFP融合蛋白的表達、純化及跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)作用的研究【目的】構(gòu)建神經(jīng)源性分化因子Neuro D與綠色熒光蛋白EGFP的融合蛋白,并研究其跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)作用�！痉椒ā繕�(gòu)建Neuro D-EGFP原核表達載體,利用宿主大腸桿菌BL21(DE3)表達重組NeuroD-EGFP融合蛋白,再利用層析柱純化得到重組Neuro D-EGFP融合蛋白。利用熒光顯微鏡等觀察Neuro D-EGFP融合蛋白的跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)能力�！窘Y(jié)果】成功構(gòu)建了Neuro D-EGFP原核表達載體,應(yīng)用原核表達系統(tǒng)成功表達和純化融合蛋白,利用聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分析表明得到了Neuro D-EGFP融合蛋白。在IEC-6及RKO細胞上清中加入Neuro D-EGFP融合蛋白后,觀察發(fā)現(xiàn)Neuro D-EGFP融合蛋白發(fā)出的綠色熒光聚集在細胞內(nèi)部。對小鼠進行腹腔注射Neuro D-EGFP融合蛋白,5小時后在熒光顯微鏡下發(fā)現(xiàn)綠色熒光聚集在小鼠腸道上皮細胞內(nèi)�！窘Y(jié)論】成功表達并純化得到了重組的Neuro D-EGFP融合蛋白,并驗證了其跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)能力。二、Neuro D-EGFP融合蛋白對小鼠放射性腸損傷的治療作用【目的】探討Neuro D-EGFP融合蛋白對小鼠放射性腸損傷的治療作用�！痉椒ā緾57小鼠分兩批次,每批次隨機分為PBS組、EGFP組、Neuro D-EGFP組,兩批次分別給予8Gy、9Gyγ線全身照射,觀察并記錄小鼠的體重變化及生存情況,繪制生存曲線。取9Gyγ線全身照射三組小鼠的腸組織,制備病理切片,應(yīng)用HE染色觀察Neuro D-EGFP融合蛋白對輻射后小鼠腸道病理形態(tài)學(xué)的影響,應(yīng)用TUNEL染色觀察其對輻射后小鼠腸道隱窩凋亡細胞數(shù)目的影響,應(yīng)用Ki-67染色觀察其對小鼠腸道隱窩增殖細胞數(shù)目的影響,探討Neuro D-EGFP融合蛋白對輻射后腸道組織的治療作用�！窘Y(jié)果】與PBS組及EGFP組相比,Neuro D-EGFP融合蛋白改善了8Gyγ線照射后小鼠的體重并提高了生存率。對9Gyγ線全身照射后的小鼠腸道組織進行分析,發(fā)現(xiàn)與PBS組和EGFP組相比,Neuro D-EGFP組小鼠腸道絨毛高度、隱窩深度及隱窩數(shù)目均大于其他兩組(F=49.49,16.72,10.32,P0.01),同時腸道隱窩凋亡細胞數(shù)目較其他兩組少(F=42.39,P0.01),腸道隱窩Ki-67(+)細胞數(shù)目較多(F=33.21,P0.01)�！窘Y(jié)論】Neuro D-EGFP融合蛋白促進了輻射后腸道絨毛及隱窩的修復(fù),減少了輻射引起的腸道隱窩細胞凋亡并促進了其增殖,對放射性腸損傷具有治療作用。三、Neuro D-EGFP融合蛋白對小鼠放射性腸損傷治療作用的機制研究【目的】探索Neuro D-EGFP融合蛋白對小鼠放射性腸損傷治療作用的機制�！痉椒ā咳�9Gy照射后12h EGFP和Neuro D-EGFP處理小鼠的腸組織,應(yīng)用基因表達譜芯片篩選兩種處理小鼠腸組織的差異表達基因,應(yīng)用qRT-PCR對差異表達基因Enpp7、Mbl2、Slc13a1和Slc40a1進行了驗證。通過篩選Neuro D靶向基因,應(yīng)用免疫組化的方法探索Neuro D-EGFP融合蛋白對輻射后小鼠腸道組織中組織基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1(Timp-1)表達的影響�！窘Y(jié)果】小鼠腸道組織基因芯片表明Neuro D可影響多種基因的表達及信號通路。使用qRT-PCR驗證了差異表達的基因。GO及KEGG富集分析顯示Neuro D差異表達基因參與多個生物過程和信號通路。Neuro D可以增加輻射后小鼠腸道組織中具有抗凋亡作用的Timp-1的表達,初步闡明NeuroD對放射性腸損傷治療作用的分子機制�！窘Y(jié)論】Neuro D治療放射性腸損傷的機制可能是通過誘導(dǎo)Timp-1的高表達,進而減輕了輻射后小鼠腸道隱窩的凋亡,促進輻射后小鼠腸道組織的修復(fù)。
【關(guān)鍵詞】：Neuro D 輻射損傷 放射性腸損傷
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R730.55
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 引言11-12
• 參考文獻12-15
• 第一部分 NeuroD-EGFP融合蛋白的表達、純化及跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)作用15-32
• 前言15
• 材料和方法15-25
• 一、 材料和儀器15-17
• 二、 實驗方法17-25
• 結(jié)果25-30
• 一、 融合蛋白的表達和純化25-27
• 二、 NeuroD-EGFP融合蛋白體外進入細胞內(nèi)27-28
• 三、 NeuroD-EGFP融合蛋白體內(nèi)進入小腸上皮細胞28-29
• 四、 不同輻射劑量對小鼠腸道組織NeuroD蛋白表達的影響29-30
• 討論30-32
• 第二部分 NeuroD-EGFP融合蛋白對放射性腸損傷的治療作用32-48
• 前言32-33
• 材料和方法33-38
• 一、 材料和儀器33-34
• 二、 實驗方法34-38
• 結(jié)果38-45
• 一、NeuroD-EGFP融合蛋白對不同γ線輻射后小鼠一般情況、體重及生存期的影響38-41
• 二、 大體觀察NeuroD-EGFP融合蛋白對輻射后小鼠腸道的影響41
• 三、 NeuroD-EGFP融合蛋白對輻射后小鼠腸道病理形態(tài)的影響41-43
• 四、 NeuroD-EGFP融合蛋白對輻射后小鼠腸道細胞凋亡的影響43-44
• 五、 NeuroD-EGFP融合蛋白對輻射后小鼠腸道細胞增殖的影響44-45
• 討論45-48
• 第三部分 NeuroD-EGFP融合蛋白對放射性腸損傷治療作用的機制研究48-58
• 前言48
• 材料和方法48-51
• 一、 材料和儀器48-49
• 二、 實驗方法49-51
• 結(jié)果51-56
• 一、 基因芯片篩選差異表達的基因51-53
• 二、 NeuroD靶基因的GO、KEGG富集分析53-55
• 三、 qRT-PCR驗證差異表達基因55-56
• 四、NeuroD-EGFP融合蛋白對輻射后小鼠腸道組織基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1（Timp-1）表達的影響56
• 討論56-58
• 參考文獻58-63
• 結(jié)論63-64
• 創(chuàng)新性64-65
• 綜述 放射性腸炎的研究及治療進展65-85
• 參考文獻75-85
• 中英文縮略詞85-87
• 發(fā)表論文及其他87-88
• 致謝88-89

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本文編號：555554