本文關(guān)鍵詞：靶向調(diào)控EMS1基因miRNAs分子的鑒定及其功能的初步研究

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【摘要】：目的:EMS1基因是一種癌基因,首先從乳腺癌和頭頸部鱗癌中被克隆出來而被人們所認知。本課題組前期發(fā)現(xiàn)EMS1基因為胃癌相關(guān)基因,在胃癌中高表達,與轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。有研究表明,EMS1基因在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中受多個miRNA的調(diào)控。本實驗通過生物信息學技術(shù)及體外細胞實驗從轉(zhuǎn)錄后水平篩選鑒定出靶向調(diào)控人EMS1基因的miRNAs分子,闡明EMS1基因在胃癌中表達上調(diào)的分子機制,為胃癌的臨床診斷、靶向治療及判斷預后提供理論依據(jù)。方法:(1)利用生物信息學軟件預測EMS1基因的靶miRNA分子,并通過pubmed、中國知網(wǎng)等網(wǎng)站進行文獻檢索,篩選出未報道過,可能性較高的miRNAs。(2)選擇陽離子脂質(zhì)體法,將初篩出的靶miRNA mimic/inhibitor瞬時轉(zhuǎn)染至胃癌細胞MGC803中,再采用Western blot技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染48h后空白組、miRNA mimic/inhibitor NC對照組及miRNA mimic/inhibitor實驗組EMS1蛋白的表達變化。(3)利用MTT實驗、劃痕實驗和體外遷移侵襲實驗,檢測瞬時轉(zhuǎn)染miR-545-3p mimic/inhibitor對MGC803細胞增殖、遷移及侵襲等生物學行為的影響。結(jié)果:生物信息學結(jié)果顯示:miR-182、miR-501-3p、miR-338-5p、mir-183、mir-502-3p、mir-545、mir-329、mir-603、mir-326、mir-526a、mir-548d-3p等11個mirna可能是ems1基因的靶mirna。文獻檢索結(jié)果顯示:在腫瘤組織中表達上調(diào)的有mir-182、mir-501-3p、mir-338-5p、mir-183、mir-502-3p等5個mirna;表達下調(diào)的有mir-182、mir-545、mir-603、mir-329、mir-326等5個mirna;未見報道的有mir-526a和mir-548d-3p。在5個下調(diào)的mirna中mir-326、mir-182是ems1基因的靶mirna已有報道,其余3個mirna與ems1基因的相關(guān)性尚未見研究。因此本課題組選出mir-545、mir-329、mir-603可能是ems1基因的靶mirna分子。mirnas與ems13’utr靶結(jié)合位點的預測結(jié)果顯示:mir-545-3p與ems1的結(jié)合位點為162-168;mir-329-3p與ems1的結(jié)合位點為863-869和1184-1190;mir-603與ems1的結(jié)合位點為1042-1048.westernblot實驗結(jié)果顯示:mir-545-3p、mir-329-3p、mir-603三種mirnamimic瞬時轉(zhuǎn)染mgc803細胞后,與空白組和nc組相比mir-545-3p組ems1蛋白的表達下降,p0.05,差異具有統(tǒng)計學意義;mir-329-3p、mir-603組與空白組和nc組相比則ems1蛋白表達無明顯差異(p0.05)。將mir-545-3p、mir-329-3p、mir-603三種mirnainhbitor分別瞬時轉(zhuǎn)染mgc803細胞后,與空白組和nc組相比mir-545-3p組ems1蛋白的表達升高(p0.05);mir-329-3p、mir-603組與空白組和nc組相比則ems1蛋白表達變化無明顯差異(p0.05)。mtt實驗結(jié)果顯示:與空白組和nc組相比,胃癌mgc803細胞瞬時轉(zhuǎn)染mir-545-3pmimic后,細胞增殖能力減弱(p0.05);相反地,瞬時轉(zhuǎn)染miR-545-3p inhibitor后細胞增殖能力增強(p0.05)。實驗表明miR-545-3p高表達可以抑制胃癌細胞MGC803的增殖能力;其被抑制后可使MGC803細胞的增殖能力增強。遷移實驗及侵襲實驗結(jié)果顯示:遷移和侵襲實驗結(jié)果顯示MGC803細胞瞬時轉(zhuǎn)染miR-545-3p mimic后,與空白組和mimic NC組相比細胞遷移和能力均減弱(p0.05);MGC803細胞瞬時轉(zhuǎn)染miR-545-3p inhibitor后,與空白組和inhibitor NC組相比細胞遷移和侵襲能力均增強(p0.05)。結(jié)論:miR-545-3p為靶向調(diào)控EMS1的候選miRNA,可能通過抑制EMS1表達而抑制MGC803細胞的增殖、遷移和侵襲發(fā)揮類似抑癌基因的作用。
【關(guān)鍵詞】：EMS1 hsa-miR-545-3p 胃癌 侵襲 轉(zhuǎn)移
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.2
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 主要中英文縮略語表11-13
• 第1章 緒論13-17
• 第2章 實驗材料與方法17-27
• 2.1 實驗材料17-20
• 2.2 實驗方法20-27
• 第3章 實驗結(jié)果27-39
• 3.1 生物信息學結(jié)果27-28
• 3.2 Western Blot 實驗檢測 EMS1 蛋白水平28-33
• 3.3 MTT 實驗研究 mi R-545-3p 對胃癌細胞 MGC803 增殖的影響33-34
• 3.4 體外細胞遷移實驗研究 mi R-545-3p 對 MGC803 遷移的影響34-36
• 3.5 體外細胞侵襲實驗研究 mi R-545-3p 對 MGC803 侵襲的影響36-39
• 第4章 討論39-45
• 第5章 結(jié)論45-47
• 參考文獻47-53
• 文獻綜述53-75
• Mi R-182 研究進展53-63
• 參考文獻59-63
• EMS1 基因的研究進展63-75
• 參考文獻71-75
• 本研究課題資助項目75-77
• 供讀碩士學位期間的科研成果77-79
• 致謝79

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1 孫德利,舒琦瑾;基因表達譜在中醫(yī)藥研究中的意義[J];中國中醫(yī)藥信息雜志;2002年01期

2 劉s，

本文編號：553969