本文關(guān)鍵詞：靶向調(diào)控EMS1基因miRNAs分子的鑒定及其功能的初步研究

  更多相關(guān)文章： EMS1 hsa-miR-545-3p 胃癌 侵襲 轉(zhuǎn)移

【摘要】：目的:EMS1基因是一種癌基因,首先從乳腺癌和頭頸部鱗癌中被克隆出來而被人們所認(rèn)知。本課題組前期發(fā)現(xiàn)EMS1基因?yàn)槲赴┫嚓P(guān)基因,在胃癌中高表達(dá),與轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。有研究表明,EMS1基因在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中受多個(gè)miRNA的調(diào)控。本實(shí)驗(yàn)通過生物信息學(xué)技術(shù)及體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)從轉(zhuǎn)錄后水平篩選鑒定出靶向調(diào)控人EMS1基因的miRNAs分子,闡明EMS1基因在胃癌中表達(dá)上調(diào)的分子機(jī)制,為胃癌的臨床診斷、靶向治療及判斷預(yù)后提供理論依據(jù)。方法:(1)利用生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)EMS1基因的靶miRNA分子,并通過pubmed、中國(guó)知網(wǎng)等網(wǎng)站進(jìn)行文獻(xiàn)檢索,篩選出未報(bào)道過,可能性較高的miRNAs。(2)選擇陽離子脂質(zhì)體法,將初篩出的靶miRNA mimic/inhibitor瞬時(shí)轉(zhuǎn)染至胃癌細(xì)胞MGC803中,再采用Western blot技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染48h后空白組、miRNA mimic/inhibitor NC對(duì)照組及miRNA mimic/inhibitor實(shí)驗(yàn)組EMS1蛋白的表達(dá)變化。(3)利用MTT實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)和體外遷移侵襲實(shí)驗(yàn),檢測(cè)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染miR-545-3p mimic/inhibitor對(duì)MGC803細(xì)胞增殖、遷移及侵襲等生物學(xué)行為的影響。結(jié)果:生物信息學(xué)結(jié)果顯示:miR-182、miR-501-3p、miR-338-5p、mir-183、mir-502-3p、mir-545、mir-329、mir-603、mir-326、mir-526a、mir-548d-3p等11個(gè)mirna可能是ems1基因的靶mirna。文獻(xiàn)檢索結(jié)果顯示:在腫瘤組織中表達(dá)上調(diào)的有mir-182、mir-501-3p、mir-338-5p、mir-183、mir-502-3p等5個(gè)mirna;表達(dá)下調(diào)的有mir-182、mir-545、mir-603、mir-329、mir-326等5個(gè)mirna;未見報(bào)道的有mir-526a和mir-548d-3p。在5個(gè)下調(diào)的mirna中mir-326、mir-182是ems1基因的靶mirna已有報(bào)道,其余3個(gè)mirna與ems1基因的相關(guān)性尚未見研究。因此本課題組選出mir-545、mir-329、mir-603可能是ems1基因的靶mirna分子。mirnas與ems13’utr靶結(jié)合位點(diǎn)的預(yù)測(cè)結(jié)果顯示:mir-545-3p與ems1的結(jié)合位點(diǎn)為162-168;mir-329-3p與ems1的結(jié)合位點(diǎn)為863-869和1184-1190;mir-603與ems1的結(jié)合位點(diǎn)為1042-1048.westernblot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:mir-545-3p、mir-329-3p、mir-603三種mirnamimic瞬時(shí)轉(zhuǎn)染mgc803細(xì)胞后,與空白組和nc組相比mir-545-3p組ems1蛋白的表達(dá)下降,p0.05,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;mir-329-3p、mir-603組與空白組和nc組相比則ems1蛋白表達(dá)無明顯差異(p0.05)。將mir-545-3p、mir-329-3p、mir-603三種mirnainhbitor分別瞬時(shí)轉(zhuǎn)染mgc803細(xì)胞后,與空白組和nc組相比mir-545-3p組ems1蛋白的表達(dá)升高(p0.05);mir-329-3p、mir-603組與空白組和nc組相比則ems1蛋白表達(dá)變化無明顯差異(p0.05)。mtt實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與空白組和nc組相比,胃癌mgc803細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染mir-545-3pmimic后,細(xì)胞增殖能力減弱(p0.05);相反地,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染miR-545-3p inhibitor后細(xì)胞增殖能力增強(qiáng)(p0.05)。實(shí)驗(yàn)表明miR-545-3p高表達(dá)可以抑制胃癌細(xì)胞MGC803的增殖能力;其被抑制后可使MGC803細(xì)胞的增殖能力增強(qiáng)。遷移實(shí)驗(yàn)及侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示MGC803細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染miR-545-3p mimic后,與空白組和mimic NC組相比細(xì)胞遷移和能力均減弱(p0.05);MGC803細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染miR-545-3p inhibitor后,與空白組和inhibitor NC組相比細(xì)胞遷移和侵襲能力均增強(qiáng)(p0.05)。結(jié)論:miR-545-3p為靶向調(diào)控EMS1的候選miRNA,可能通過抑制EMS1表達(dá)而抑制MGC803細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲發(fā)揮類似抑癌基因的作用。
【關(guān)鍵詞】：EMS1 hsa-miR-545-3p 胃癌 侵襲 轉(zhuǎn)移
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.2
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 主要中英文縮略語表11-13
• 第1章 緒論13-17
• 第2章 實(shí)驗(yàn)材料與方法17-27
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料17-20
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法20-27
• 第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-39
• 3.1 生物信息學(xué)結(jié)果27-28
• 3.2 Western Blot 實(shí)驗(yàn)檢測(cè) EMS1 蛋白水平28-33
• 3.3 MTT 實(shí)驗(yàn)研究 mi R-545-3p 對(duì)胃癌細(xì)胞 MGC803 增殖的影響33-34
• 3.4 體外細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)研究 mi R-545-3p 對(duì) MGC803 遷移的影響34-36
• 3.5 體外細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)研究 mi R-545-3p 對(duì) MGC803 侵襲的影響36-39
• 第4章 討論39-45
• 第5章 結(jié)論45-47
• 參考文獻(xiàn)47-53
• 文獻(xiàn)綜述53-75
• Mi R-182 研究進(jìn)展53-63
• 參考文獻(xiàn)59-63
• EMS1 基因的研究進(jìn)展63-75
• 參考文獻(xiàn)71-75
• 本研究課題資助項(xiàng)目75-77
• 供讀碩士學(xué)位期間的科研成果77-79
• 致謝79

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 孫德利,舒琦瑾;基因表達(dá)譜在中醫(yī)藥研究中的意義[J];中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志;2002年01期

2 劉s，

本文編號(hào)：553969