本文關鍵詞：miR-139-5p靶向TGF-β1調控EMT抑制肝癌細胞侵襲轉移

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【摘要】：目的:研究肝癌中mi R-139-5P與轉化生長因子β1(TGF-β1)之間的表達關系,分析TGF-β1是否是mi R-139-5P的靶基因,闡明mi R-139-5P靶向TGF-β1調控上皮間質轉化(EMT)相關信號通路,抑制肝癌細胞侵襲轉移的分子機制。方法:首先通過生物信息學方法,發(fā)現(xiàn)20個mi RNAs可能是TGF-β1的潛在靶mi RNAs;進一步計算分析后發(fā)現(xiàn),mi R-139-5P是TGF-β1的最佳結合靶mi RNA。在56例肝癌組織和20例癌旁組織中,通過免疫組化檢測TGF-β1的表達水平;通過q RT-PCR檢測mi R-139-5P的表達,Western blot檢測TGF-β1的表達,分析兩者之間的表達相關性;在高轉移和低轉移的肝癌細胞株中,q RT-PCR檢測mi R-139-5P的表達,Western blot檢測TGF-β1、N-cadherin、Vimentin表達,分析mi R-139-5P和三個蛋白表達之間的關系;在重組細胞株Hep G2-mi R-139-5p mimics、Hep G2-mi R-Scramble、Hep G2-mi R-139-5p-PM、Hep G2中,q RT-PCR檢測mi R-139-5P的表達,western blot檢測TGF-β1的表達,分析mi R-139-5P表達是否與TGF-β1的3`UTR端結合;Transwell方法檢測mi R-139-5P表達改變后的肝癌重組細胞系侵襲能力的改變。結果:(1)生物信息學方法發(fā)現(xiàn)與TGF-β1結合的靶mi RNAs有20個;其中,mi R-139-5p是與TGF-β1的結合穩(wěn)定性最高,特異性最好的靶mi RNA。(2)肝癌組織中TGF-β1表達陽性率為80.4%(45/56),癌旁正常肝組織中表達陽性率為15.0%(3/20),兩者之間的陽性率比較有顯著性差異(P0.01)。(3)肝癌組織中mi R-139-5p低表達,而癌旁組織中mi R-139-5p高表達,兩者之間的差異有統(tǒng)計學(P0.01);肝癌組織中TGF-β1高表達,癌旁組織中低表達,兩者之間的差異有統(tǒng)計學(P0.01)。mi R-139-5p和TGF-β1表達之間存在負相關。(4)高轉移細胞株MHCC97-H中mi R-139-5p低表達,低轉移細胞株MHCC97-L中mi R-139-5p高表達,兩者之間的表達差異有統(tǒng)計學意義(P0.01);高轉移細胞株MHCC97-H中TGF-β1、N-cadherin、Vimentin均高表達,低轉移細胞株MHCC97-L中TGF-β1、N-cadherin、Vimentin低表達,三個蛋白的表達水平在不同轉移細胞系中有顯著性差異(P0.01)。(4)Hep G2-mi R-139-5p mimics細胞株中mi R-139-5p水平表達增高,而TGF-β1表達水平下調(P0.05);而在Hep G2-mi R-Scramble、Hep G2-mi R-139-5p-PM、Hep G2三個細胞株中,mi R-139-5p表達水平無明顯差異,TGF-β1表達水平也沒有明顯差異。mi R-139-5p能和TGF-β1的3`UTR位點結合。(5)mi R-139-5p高表達細胞株中侵襲細胞計數(shù)明顯低于其他三組(P0.01),Hep G2-mi R-Scramble、Hep G2-mi R-139-5p-PM、Hep G2三個細胞株中mi R-139-5p表達水平無明顯差異,他們之間侵襲細胞計數(shù)也無顯著性差異(P0.05)。結論:(1)TGF-β1在肝癌組織中表達增高,與肝癌發(fā)病有關。(2)肝癌組織和細胞中mi RNA-139-5p與TGF-β1的表達呈負相關,TGF-β1可能是mi RNA-139-5p的靶基因。(3)mi RNA-139-5p通過靶向結合TGF-β1的3`UTR位點,下調TGF-β1、N-cadherin、Vimentin的表達。(4)mi RNA-139-5p下調TGF-β1后,調控EMT信號通路,抑制肝癌細胞的侵襲轉移。
【關鍵詞】：miRNA 肝癌 侵襲轉移 TGF-β1 EMT信號通路
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 第1章 前言10-17
• 技術路線17-18
• 第2章 材料與方法18-24
• 2.1 材料18-20
• 2.2 方法20-24
• 第3章 結果24-30
• 第4章 討論30-38
• 第5章 結論38-40
• 參考文獻40-52
• 主要縮略英文索引52-54
• 綜述 TGF-β在肝細胞癌靶向治療中作用54-64
• 參考文獻60-64
• 作者攻讀學位期間的科研成果64-65
• 致謝65

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