本文關(guān)鍵詞：miR-139-5p靶向TGF-β1調(diào)控EMT抑制肝癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移

  更多相關(guān)文章： miRNA 肝癌 侵襲轉(zhuǎn)移 TGF-β1 EMT信號(hào)通路

【摘要】：目的:研究肝癌中mi R-139-5P與轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)之間的表達(dá)關(guān)系,分析TGF-β1是否是mi R-139-5P的靶基因,闡明mi R-139-5P靶向TGF-β1調(diào)控上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)相關(guān)信號(hào)通路,抑制肝癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制。方法:首先通過生物信息學(xué)方法,發(fā)現(xiàn)20個(gè)mi RNAs可能是TGF-β1的潛在靶mi RNAs;進(jìn)一步計(jì)算分析后發(fā)現(xiàn),mi R-139-5P是TGF-β1的最佳結(jié)合靶mi RNA。在56例肝癌組織和20例癌旁組織中,通過免疫組化檢測TGF-β1的表達(dá)水平;通過q RT-PCR檢測mi R-139-5P的表達(dá),Western blot檢測TGF-β1的表達(dá),分析兩者之間的表達(dá)相關(guān)性;在高轉(zhuǎn)移和低轉(zhuǎn)移的肝癌細(xì)胞株中,q RT-PCR檢測mi R-139-5P的表達(dá),Western blot檢測TGF-β1、N-cadherin、Vimentin表達(dá),分析mi R-139-5P和三個(gè)蛋白表達(dá)之間的關(guān)系;在重組細(xì)胞株Hep G2-mi R-139-5p mimics、Hep G2-mi R-Scramble、Hep G2-mi R-139-5p-PM、Hep G2中,q RT-PCR檢測mi R-139-5P的表達(dá),western blot檢測TGF-β1的表達(dá),分析mi R-139-5P表達(dá)是否與TGF-β1的3`UTR端結(jié)合;Transwell方法檢測mi R-139-5P表達(dá)改變后的肝癌重組細(xì)胞系侵襲能力的改變。結(jié)果:(1)生物信息學(xué)方法發(fā)現(xiàn)與TGF-β1結(jié)合的靶mi RNAs有20個(gè);其中,mi R-139-5p是與TGF-β1的結(jié)合穩(wěn)定性最高,特異性最好的靶mi RNA。(2)肝癌組織中TGF-β1表達(dá)陽性率為80.4%(45/56),癌旁正常肝組織中表達(dá)陽性率為15.0%(3/20),兩者之間的陽性率比較有顯著性差異(P0.01)。(3)肝癌組織中mi R-139-5p低表達(dá),而癌旁組織中mi R-139-5p高表達(dá),兩者之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)(P0.01);肝癌組織中TGF-β1高表達(dá),癌旁組織中低表達(dá),兩者之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)(P0.01)。mi R-139-5p和TGF-β1表達(dá)之間存在負(fù)相關(guān)。(4)高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株MHCC97-H中mi R-139-5p低表達(dá),低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株MHCC97-L中mi R-139-5p高表達(dá),兩者之間的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株MHCC97-H中TGF-β1、N-cadherin、Vimentin均高表達(dá),低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株MHCC97-L中TGF-β1、N-cadherin、Vimentin低表達(dá),三個(gè)蛋白的表達(dá)水平在不同轉(zhuǎn)移細(xì)胞系中有顯著性差異(P0.01)。(4)Hep G2-mi R-139-5p mimics細(xì)胞株中mi R-139-5p水平表達(dá)增高,而TGF-β1表達(dá)水平下調(diào)(P0.05);而在Hep G2-mi R-Scramble、Hep G2-mi R-139-5p-PM、Hep G2三個(gè)細(xì)胞株中,mi R-139-5p表達(dá)水平無明顯差異,TGF-β1表達(dá)水平也沒有明顯差異。mi R-139-5p能和TGF-β1的3`UTR位點(diǎn)結(jié)合。(5)mi R-139-5p高表達(dá)細(xì)胞株中侵襲細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯低于其他三組(P0.01),Hep G2-mi R-Scramble、Hep G2-mi R-139-5p-PM、Hep G2三個(gè)細(xì)胞株中mi R-139-5p表達(dá)水平無明顯差異,他們之間侵襲細(xì)胞計(jì)數(shù)也無顯著性差異(P0.05)。結(jié)論:(1)TGF-β1在肝癌組織中表達(dá)增高,與肝癌發(fā)病有關(guān)。(2)肝癌組織和細(xì)胞中mi RNA-139-5p與TGF-β1的表達(dá)呈負(fù)相關(guān),TGF-β1可能是mi RNA-139-5p的靶基因。(3)mi RNA-139-5p通過靶向結(jié)合TGF-β1的3`UTR位點(diǎn),下調(diào)TGF-β1、N-cadherin、Vimentin的表達(dá)。(4)mi RNA-139-5p下調(diào)TGF-β1后,調(diào)控EMT信號(hào)通路,抑制肝癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移。
【關(guān)鍵詞】：miRNA 肝癌 侵襲轉(zhuǎn)移 TGF-β1 EMT信號(hào)通路
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 第1章 前言10-17
• 技術(shù)路線17-18
• 第2章 材料與方法18-24
• 2.1 材料18-20
• 2.2 方法20-24
• 第3章 結(jié)果24-30
• 第4章 討論30-38
• 第5章 結(jié)論38-40
• 參考文獻(xiàn)40-52
• 主要縮略英文索引52-54
• 綜述 TGF-β在肝細(xì)胞癌靶向治療中作用54-64
• 參考文獻(xiàn)60-64
• 作者攻讀學(xué)位期間的科研成果64-65
• 致謝65

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