本文關(guān)鍵詞：LCE3C在皮膚癌組織中分布和細(xì)胞定位及其調(diào)控機(jī)制的初步研究

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【摘要】：背景和目的皮膚癌是世界六大常見(jiàn)癌癥之一,其中常見(jiàn)的兩種病理分型分別為皮膚鱗癌(squamous cell carcinoma,SCC和基底細(xì)胞癌(basal cell carcinoma, BCC)。近年來(lái),皮膚癌的發(fā)病呈現(xiàn)逐年增加的趨勢(shì),其較強(qiáng)的轉(zhuǎn)移與侵襲性是造成有機(jī)體病死的主要原因。皮膚癌和銀屑病有一些相似的病理特點(diǎn),例如表皮增生過(guò)度、表皮角化不全等。其中皮膚組織中的一些特異性的分子標(biāo)記如后期角質(zhì)化包膜蛋白(late cornified envelope 3C, LCE3C)在銀屑病病人中被發(fā)現(xiàn)表達(dá)是增高的,后期角質(zhì)化包膜蛋白屬于角質(zhì)化包膜蛋白家族,由LCE基因編碼,在正常皮膚中,LCE3C呈現(xiàn)低表達(dá),當(dāng)皮膚發(fā)生表皮破損與組織炎癥時(shí),LCE3C被誘導(dǎo)表達(dá),LCE3C是表達(dá)在胞外的一種粘附分子,在表皮中主要發(fā)揮表皮屏障保護(hù)作用。另一種和表皮層細(xì)胞分化相關(guān)的標(biāo)記分子GRHL3 (grainyhead-like 3)在表皮的新陳代謝過(guò)程中可以促進(jìn)表皮基底層細(xì)胞的遷移,GRHL3是一個(gè)轉(zhuǎn)錄因子,又稱為Get1,在表皮屏障中可以促進(jìn)表皮基底層細(xì)胞的遷移,在表皮的正常分化過(guò)程中,基底層細(xì)胞會(huì)由先前的未分化狀態(tài)逐漸發(fā)展成熟,GRHL3在這一過(guò)程中可以促進(jìn)表皮基底層細(xì)胞特異性基因的表達(dá)。因此研究GRHL3在皮膚鱗癌細(xì)胞系中的表達(dá)變化將有助于我們分析LCE3C對(duì)皮膚癌的發(fā)病機(jī)制中扮演的作用,為了探討LCE3C蛋白在皮膚鱗狀細(xì)胞癌以及基底細(xì)胞癌中的分布及其調(diào)控的分子機(jī)制,分別從組織水平和細(xì)胞水平分析LCE3C的組織分布和與其相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子GRHL3的表達(dá)變化及其與細(xì)胞增殖與劃痕愈合能力的影響。方法1.利用HE染色分析皮膚鱗癌、基底細(xì)胞癌與正常皮膚組織形態(tài)方面的差異。2.利用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)LCE3C在銀屑病、皮膚鱗癌、基底細(xì)胞癌組織中的表達(dá),正常人皮膚組織做對(duì)照。3.根據(jù)Genbank提供的人LCE3C基因mRNA的序列(Genbank序列號(hào)：NM 178434.2),利用Primer 5.0軟件,設(shè)計(jì)引物,用基因工程的方法構(gòu)建綠色熒光蛋白融合表達(dá)的LCE3C重組表達(dá)載體pLCE3C-GFP。4.將重組表達(dá)載體pLCE3C-GFP、pGFP分別轉(zhuǎn)染人皮膚鱗癌細(xì)胞系A(chǔ)431,用激光共聚焦顯微術(shù)分析LCE3C在A431細(xì)胞中的定位。5.Western blot方法檢測(cè)轉(zhuǎn)錄因子GRHL3對(duì)LCE3C表達(dá)的影響。6.MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)LCE3C對(duì)A431細(xì)胞增殖能力的影響。7.劃痕愈合實(shí)驗(yàn)檢測(cè)LCE3C對(duì)A431細(xì)胞在劃痕處的愈合能力的影響。結(jié)果1.HE染色結(jié)果顯示,和正常人皮膚組織相比,皮膚鱗癌和基底細(xì)胞癌的表皮層分層情況嚴(yán)重紊亂,分層界限不明顯,且基底層、棘層有明顯增厚的跡象。2.免疫組化結(jié)果顯示,相比于正常人皮膚組織,LCE3C在SCC和BCC組織中LCE3C表達(dá)明顯增加,在皮膚癌組織中LCE3C主要分布在表皮的角質(zhì)層,且主要表達(dá)分布在細(xì)胞核外。3.激光共聚焦結(jié)果顯示,LCE3C主要表達(dá)分布在細(xì)胞核外。4.Western blot結(jié)果顯示,與角質(zhì)形成細(xì)胞(HaCaT)相比,A431細(xì)胞中GRHL3表達(dá)量顯著降低,而LCE3C 表達(dá)量明顯增高；過(guò)量表達(dá)GRHL3的細(xì)胞(A431/GRHL3) LCE3C表達(dá)量顯著降低。5.MTT結(jié)果顯示,相比于正常未轉(zhuǎn)基因的A431細(xì)胞,過(guò)量表達(dá)LCE3C的A431/LCE3C-GFP細(xì)胞在12 h、24 h、48 h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞相對(duì)增殖率均低于A431細(xì)胞。6.劃痕愈合實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,和正常未轉(zhuǎn)基因的A431細(xì)胞相比,過(guò)量表達(dá)LCE3C 的 A431/LCE3C-GFP細(xì)胞在劃痕處的愈合能力明顯降低。結(jié)論1.與正常人皮膚組織相比,LCE3C在皮膚癌中的表達(dá)增加,主要分布在皮膚角質(zhì)層的細(xì)胞核外；2.轉(zhuǎn)錄因子GRHL3和LCE3C的表達(dá)在皮膚癌細(xì)胞系A(chǔ)431細(xì)胞中表現(xiàn)為負(fù)相關(guān)；3.LCE3C在一定程度上可能抑制A431細(xì)胞的增殖與劃痕愈合能力。
【關(guān)鍵詞】：LCE3C GRHL3 皮膚鱗狀細(xì)胞癌 基底細(xì)胞癌 細(xì)胞定位
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R739.5
【目錄】：

• 中英文縮略詞對(duì)照表5-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 1 前言10-16
• 2 材料與方法16-30
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-38
• 4 討論38-40
• 5 結(jié)論40-41
• 6 參考文獻(xiàn)41-46
• 附錄 個(gè)人簡(jiǎn)歷46-47
• 教育背景46
• 研究生在讀期間參與的研究項(xiàng)目46
• 獲獎(jiǎng)情況46
• 碩士生期間發(fā)表論文46
• 參加學(xué)術(shù)會(huì)議46-47
• 致謝47-48
• 綜述48-57
• 參考文獻(xiàn)54-57

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 陳瓊瓊;LCE3C在皮膚癌組織中分布和細(xì)胞定位及其調(diào)控機(jī)制的初步研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

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本文編號(hào)：546413