本文關(guān)鍵詞：人結(jié)直腸癌相關(guān)成纖維細(xì)胞和結(jié)腸正常成纖維細(xì)胞對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞EMT的影響及機(jī)制

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【摘要】：結(jié)直腸癌是消化系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一,據(jù)世界癌癥協(xié)會(huì)2015年的研究表明,結(jié)直腸癌的發(fā)病率和死亡率仍然高居第三位。雖然針對(duì)結(jié)直腸癌的化學(xué)治療和靶向治療已經(jīng)取得了顯著進(jìn)展,但是仍有60%的手術(shù)后病人會(huì)發(fā)生原位復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。因此,只有徹底地弄清結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移的機(jī)制,才能為結(jié)直腸癌的治療提供新方案。腫瘤微環(huán)境不僅為腫瘤的生長提供了充足的營養(yǎng),而且它可以通過一些信號(hào)通路調(diào)控結(jié)直腸癌細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移。其中癌相關(guān)成纖維細(xì)胞(CAFs)是腫瘤微環(huán)境的主要成分,它在結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移過程中扮演了重要角色。相比于正常的成纖維細(xì)胞(NFs), CAFs中33個(gè)基因高甲基化,26個(gè)基因低甲基化,其表達(dá)更高水平的FAP、a-SMA和POSTN等等。目前CAFs到底是通過何種機(jī)制促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移尚不完全清楚。Wnt/β-catenin信號(hào)通路的異常激活在結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展中起了重要作用,那么CAFs是不是通過調(diào)控Wnt/β-catenin信號(hào)通路發(fā)揮促腫瘤轉(zhuǎn)移的作用?既然NFs和CAFs細(xì)胞基因存在差異,那么NFs對(duì)腫瘤細(xì)胞Wnt/p-catenin信號(hào)通路和其生物學(xué)行為又會(huì)產(chǎn)生何種影響?本研究將進(jìn)行初步探討。首先,我們采用組織塊植入法,從人結(jié)直腸癌患者的腫瘤組織中分離純化CAFs,從正常切緣處分離純化NFs,借助Western Blot和免疫熒光方法進(jìn)行鑒定。其次,通過免疫熒光、Q-PCR和SA-β-gal染色方法檢測(cè)細(xì)胞活化和衰老程度,結(jié)果表明CAFs的活化和衰老程度均要高于NFs。接下來,我們將CAFs與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞遷移能力增強(qiáng),上皮標(biāo)記E-Cadherin下調(diào),間質(zhì)標(biāo)記Vimentin和Fibronectin上調(diào),即促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)；同時(shí)Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)因子S552和DVL3的水平上調(diào),表明腫瘤細(xì)胞Wnt/β-catenin信號(hào)通路活化。用NFs上清條件培養(yǎng)結(jié)直腸癌細(xì)胞或NFs與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng),腫瘤細(xì)胞遷移和侵襲能力下降,E-Cadherin上調(diào),N-Cadherin下調(diào),即NFs抑制腫瘤細(xì)胞發(fā)生EMT；同時(shí)Wnt/p-catenin信號(hào)通路相關(guān)因子β-catenin和DVL2的表達(dá)水平下調(diào),Wnt/β-catenin信號(hào)受抑制。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),NFs促進(jìn)腫瘤細(xì)胞Wnt5a表達(dá),同時(shí)Wnt/Ca2+通路活化。通過上述實(shí)驗(yàn),我們得到以下結(jié)論：1.人結(jié)直腸癌相關(guān)成纖維細(xì)胞活化和衰老程度高于結(jié)腸正常成纖維細(xì)胞；2.人結(jié)直腸癌相關(guān)成纖維細(xì)胞促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞EMT、遷移和Wnt/β-catenin信號(hào)通路活化；3.人結(jié)腸正常成纖維細(xì)胞抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞EMT、遷移和侵襲能力以及Wnt/β-catenin信號(hào)通路活化,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖,與Wnt5a高表達(dá)相關(guān)；4.人結(jié)腸正常成纖維細(xì)胞誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞Wnt/Ca2+信號(hào)通路激活可能與Wnt5a高表達(dá)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：結(jié)直腸癌 腫瘤-間質(zhì)相互作用 癌相關(guān)成纖維細(xì)胞 成纖維細(xì)胞 Wnt/β-catenin信號(hào) EMT 原代細(xì)胞培養(yǎng)
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.34
【目錄】：

• 致謝4-5
• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 英文縮略語10-14
• 1 引言14-18
• 2 主要的儀器設(shè)備和試劑18-30
• 2.1 儀器設(shè)備18-20
• 2.2 試劑20-23
• 2.3 所用溶液配方23-30
• 3 材料和方法30-41
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料30
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法30-41
• 4 結(jié)果41-58
• 4.1 原代成纖維細(xì)胞的鑒定以及活化、衰老特征比較41-45
• 4.2 CAFs促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞EMT作用和機(jī)制45-48
• 4.3 NFs抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞EMT的作用和機(jī)制48-58
• 5 討論58-62
• 6 結(jié)論62-63
• 參考文獻(xiàn)63-67
• 綜述67-80
• 參考文獻(xiàn)74-80
• 作者簡歷80-81
• 1 教育背景80
• 2 在讀期間取得的科研成果80-81
• 3 在讀期間取得的獎(jiǎng)勵(lì)81

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